本發(fā)明屬于生物，具體地，本發(fā)明涉及一種靶向b7-h3的抗體藥物偶聯(lián)物及其在腫瘤治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、b7-h3，又稱b7h3或cd276，是一種i型跨膜蛋白，屬于b7免疫共刺激和共抑制家族。b7-h3由染色體15q24編碼，由一個胞外區(qū)、一個跨膜區(qū)和一個短的胞內(nèi)區(qū)組成。大量正常組織的免疫組化(ihc)分析顯示，b7-h3僅在少數(shù)組織中低表達(dá)，甚至檢測不到。但是，已發(fā)現(xiàn)b7-h3在膀胱癌、前列腺癌和黑色素瘤等多種實體瘤中過表達(dá)；并且隨著研究深入，更多證據(jù)表明b7-h3在免疫細(xì)胞中主要發(fā)揮共抑制作用，有利于腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視。因此，b7-h3的過度表達(dá)與腫瘤患者的不良預(yù)后以及體外模型中腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移潛力有關(guān)。

2、目前，有超過20項臨床試驗已經(jīng)或正在測試靶向b7-h3的單克隆抗體免疫治療策略的安全性和有效性。此外，國內(nèi)外已有多個靶向b7-h3的抗體藥物偶聯(lián)物(antibody-drugconjugate，adc)藥物進(jìn)入臨床試驗階段。

3、第一三共開發(fā)的靶向b7-h3的adc藥物ds-7300，其是將mc-ggfg-dxd含藥連接子通過隨機(jī)偶聯(lián)方式與靶向b7h3的hm30抗體偶聯(lián)，制備得到dar＝4的靶向b7-h3?adc藥物，結(jié)構(gòu)如下所示：

4、

5、macrogenics開發(fā)的靶向b7-h3的adc藥物mgc018，其由抗b7-h3人源化igg1單抗經(jīng)可裂解的linker偶聯(lián)duocarmycin(duba)形成，平均dar為2.7，結(jié)構(gòu)如下所示：

6、

7、百奧泰開發(fā)的靶向b7-h3的adc藥物bat8009，其由重組人源化抗b7-h3抗體與dna拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑通過可裂解連接子偶聯(lián)而成。

8、艾伯維開發(fā)的靶向b7-h3的adc藥物abbv-155，其是由抗b7-h3抗體與促進(jìn)細(xì)胞凋亡的bcl-xl抑制劑通過連接子偶聯(lián)而成，用于治療晚期實體瘤，結(jié)構(gòu)如下所示：

9、

10、以上adc藥物均顯示出了一定的治療效果，但也存在一定的問題。例如，macrogenics于2021年公布了mgc018治療晚期實體瘤的ⅰ期臨床試驗(cohort?expansion，nct03729596)，其中在安全性方面，43名患者出現(xiàn)3級及以上治療相關(guān)不良事件(trae)(50％)，常見的嚴(yán)重trae包括中性粒細(xì)胞減少(22.1％)和血小板減少(7％)。而第一三共開發(fā)的ds-7300采用的是隨機(jī)偶聯(lián)的方式，會造成adc產(chǎn)物具有較大的異質(zhì)性。

11、目前，含喜樹堿類化合物的靶向b7-h3的adc的可選擇種類仍比較少，并且鑒于當(dāng)前已有此類adc藥物的上述不足，本領(lǐng)域仍需要提供一種對b7-h3具有更好靶向性且產(chǎn)物異質(zhì)性更低、副作用更小、因此治療效果更佳的含喜樹堿類化合物的adc藥物。

12、申請日為2021年12月2日、標(biāo)題為“一種抗人b7-h3單克隆抗體及其應(yīng)用”的中國專利申請cn202111459992.0(公布號cn114573695a)公開了鼠源以及人源化的抗人b7-h3單克隆抗體。在該申請中，以重組人b7-h3胞外區(qū)作為免疫原，通過雜交瘤技術(shù)制備了能夠結(jié)合b7-h3胞外區(qū)的鼠源抗人b7-h3單克隆抗體；在鼠源抗體的基礎(chǔ)上構(gòu)建了能夠特異性結(jié)合細(xì)胞表面的b7-h3的人-鼠嵌合抗體；進(jìn)一步地，通過cdrs移植和cdrs區(qū)突變構(gòu)建得到了人源化抗體，所述人源化抗體保留了特異性結(jié)合人b7-h3胞外區(qū)和細(xì)胞膜表面b7-h3的能力，并且能夠由細(xì)胞膜表面b7-h3介導(dǎo)內(nèi)化。但是，雖然該申請中的鼠源以及人源化抗體具有優(yōu)秀的作用效果，但仍具有進(jìn)一步改進(jìn)的空間。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，cn114573695a中公開的一株抗b7-h3人源化抗體雖然對人b7-h3具有高親和力，但是易斷裂。在抗體的實際應(yīng)用中，抗體易斷裂、乃至片段化會導(dǎo)致含該抗體的產(chǎn)品的異質(zhì)性提高，由此增加產(chǎn)品的免疫原性、降低藥效、甚至導(dǎo)致毒副作用。因此，無論是單獨(dú)應(yīng)用還是進(jìn)一步開發(fā)其他產(chǎn)品，該人源化抗體均存在一定的缺陷。

2、因此，在該已知的抗b7-h3人源化抗體基礎(chǔ)上，本發(fā)明的發(fā)明人采用可變區(qū)定點突變的方式，篩選了能夠克服上述缺陷的新型抗b7-h3抗體；并且進(jìn)一步地，嘗試將經(jīng)突變改造的抗體與特定結(jié)構(gòu)的喜樹堿類化合物偶聯(lián)得到抗體藥物偶聯(lián)物，來選擇具有更佳b7-h3靶向性與b7-h3表達(dá)細(xì)胞殺傷效果的抗體藥物偶聯(lián)物。

3、因此，本發(fā)明的一個目的是提供特異性結(jié)合b7-h3的抗體或其片段。本發(fā)明的另一個目的是提供采用該抗體或其片段制備的靶向b7-h3的抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽。

4、在本發(fā)明的上下文中，鹵素是指氟(f)、氯(cl)、溴(br)或碘(i)。

5、在本發(fā)明的上下文中，“接頭”與“連接子”、“接頭化合物”可互換使用。

6、在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“含藥連接子”是指藥物(例如小分子藥物，諸如喜樹堿類化合物)與連接子直接或間接以共價鍵鍵合得到的化合物。

7、本發(fā)明的技術(shù)方案如下。

8、第一方面

9、本發(fā)明提供一種抗b7-h3抗體或其片段，所述抗體或其片段包含重鏈和輕鏈，所述重鏈和輕鏈包含來自以下氨基酸序列組合的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3和輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3：

10、(i)示于seq?id?no:1的氨基酸序列；和示于seq?id?no:3的氨基酸序列；

11、(ii)示于seq?id?no:1的氨基酸序列；和示于seq?id?no:4的氨基酸序列；或

12、(iii)示于seq?id?no:1的氨基酸序列；和示于seq?id?no:5的氨基酸序列。

13、在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“片段”涵蓋所述抗b7-h3抗體的各種功能性片段，其保留了所述抗體對抗原的結(jié)合能力以及相應(yīng)的生物學(xué)活性。本領(lǐng)域公知，抗體對抗原的結(jié)合能力以及相應(yīng)的生物學(xué)活性可以通過完整抗體的片段來實現(xiàn)，所述片段能夠使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得，并且以與對于完整抗體的方式相同的方式就功用性進(jìn)行篩選。例如，可通過重組dna技術(shù)或通過酶促或化學(xué)斷裂完整抗體來產(chǎn)生所述抗體的抗原結(jié)合片段。例如，所述片段可以是fab、f(ab’)2或scfv片段等。

14、上述各項的氨基酸序列分別為本發(fā)明提供的特定抗b7-h3抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列；參見本發(fā)明的“具體實施方式”部分。采用本領(lǐng)域公知或常規(guī)的抗體重鏈或輕鏈可變區(qū)中互補(bǔ)決定區(qū)的定義工具(諸如kabat方案、abm方案、chothia方案、contact方案、imgt方案、增強(qiáng)型chothia/abm方案)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定二者組合形成抗體時所包含的重鏈cdrs和輕鏈cdrs。例如，在本發(fā)明實施例1中提供了根據(jù)kabat方案定義cdrs時，各個cdr的氨基酸序列在可變區(qū)全長中的位置。根據(jù)本領(lǐng)域公知或常規(guī)的定義工具可以得到重鏈cdrs和輕鏈cdrs組合，而包含這些重鏈cdrs和輕鏈cdrs組合中每一個cdrs組合的抗體或其片段均在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。

15、進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段包含選自以下的重鏈cdrs和輕鏈cdrs(cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3；和，cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3)的組合：

16、(i)所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分別包含與seq?id?no:8、seq?id?no:9和seq?idno:10所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分別包含與seq?id?no:11、seq?id?no:12和seq?id?no:14所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；

17、(ii)所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分別包含與seq?id?no:8、seq?id?no:9和seqid?no:10所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分別包含與seq?id?no:11、seq?id?no:12和seq?id?no:15所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和

18、(iii)所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分別包含與seq?id?no:8、seq?id?no:9和seqid?no:10所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分別包含與seq?id?no:11、seq?id?no:12和seq?id?no:16所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。

19、在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“至少75％同一性”涵蓋至少75％同一性至100％同一性之間任何百分比的同一性，例如75％、80％、85％、90％，甚至91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、甚至100％同一性。取決于該術(shù)語的使用情況，所述“至少75％同一性”導(dǎo)致的氨基酸序列的至多25％差異可存在于重鏈或輕鏈cdrs中，或重鏈或輕鏈cdrs以外的任意區(qū)域中，所述任意區(qū)域例如本發(fā)明抗體或其片段的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的框架區(qū)，或者本發(fā)明抗體或其片段的重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)。所述差異可以由任何位置的氨基酸缺失、添加或置換產(chǎn)生，其中置換可以是保守置換或非保守置換。

20、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方式，本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段包含選自以下的重鏈cdrs和輕鏈cdrs(cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3；和，cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3)的組合：

21、(i)所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分別包含seq?id?no:8、seq?id?no:9和seq?idno:10所示氨基酸序列；和所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分別包含seq?id?no:11、seq?idno:12和seq?id?no:14所示氨基酸序列；

22、(ii)所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分別包含seq?id?no:8、seq?id?no:9和seq?idno:10所示氨基酸序列；和所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分別包含seq?id?no:11、seq?idno:12和seq?id?no:15所示氨基酸序列；和

23、(iii)所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分別包含seq?id?no:8、seq?id?no:9和seq?idno:10所示氨基酸序列；和所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分別包含seq?id?no:11、seq?idno:12和seq?id?no:16所示氨基酸序列。

24、本發(fā)明提供的抗體或其片段為抗b7-h3、特別是人b7-h3的抗體或其片段。在uniprotkb-q5zpr3中示例性地提供了人b7-h3的氨基酸序列。

25、本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段至少包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)，二者均包括上述cdrs以及其間的框架區(qū)(framework?region，fr)，各個區(qū)的排列方式為fr1-cdr1-fr2-cdr2-fr3-cdr3-fr4。進(jìn)一步地，在本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段中，所述重鏈可變區(qū)可包含示于seq?id?no:1的氨基酸序列或與所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或，所述輕鏈可變區(qū)可包含示于seq?id?nos:3-5中任一個的氨基酸序列或與所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。

26、優(yōu)選地，在本發(fā)明提供的抗體或其片段中，所述重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)包含選自以下的序列組合：

27、(i)所述重鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:1所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和所述輕鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:3所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；

28、(ii)所述重鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:1所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和所述輕鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:4所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和

29、(iii)所述重鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:1所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和所述輕鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:5所示氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。

30、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方式，本發(fā)明提供的抗體或其片段包含選自以下的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的組合：

31、(i)所述重鏈可變區(qū)包含seq?id?no:1所示氨基酸序列；和所述輕鏈可變區(qū)包含seq?id?no:3所示氨基酸序列；

32、(ii)所述重鏈可變區(qū)包含seq?id?no:1所示氨基酸序列；和所述輕鏈可變區(qū)包含seq?id?no:4所示氨基酸序列；和

33、(iii)所述重鏈可變區(qū)包含seq?id?no:1所示氨基酸序列；和所述輕鏈可變區(qū)包含seq?id?no:5所示氨基酸序列。

34、本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段可以是包含上文限定的結(jié)構(gòu)域的任何形式的抗體或其片段，例如單克隆抗體、嵌合抗體、部分或全部人源化的抗體等任意形式。本發(fā)明提供的抗體或其片段還可以是scfv、bsfv、dsfv、(dsfv)2、fab、fab'、f(ab')2或fv等形式。

35、除了可變區(qū)之外，本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段還可以包含恒定區(qū)，例如重鏈恒定區(qū)(ch)和/或輕鏈恒定區(qū)(cl)，或者恒定區(qū)中的任一個或多個結(jié)構(gòu)域，例如ch1、ch2、ch3、ch4等等中任一個或多個?；蛘?，本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段可以包含重鏈和/或輕鏈，其中重鏈可包含例如igg、iga、igm、igd或ige的重鏈恒定區(qū)，輕鏈可包含κ或λ型的輕鏈恒定區(qū)。

36、優(yōu)選地，本發(fā)明提供抗b7-h3人源化抗體或其片段。更優(yōu)選地，本發(fā)明提供抗b7-h3人源化單克隆抗體或其片段。

37、本發(fā)明提供了特異性地結(jié)合b7-h3且經(jīng)分離和結(jié)構(gòu)表征的人源化單克隆抗體。根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方式，本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體為hz10b4m1、hz10b4m2或hz10b4m3，具體參見本發(fā)明的“具體實施方式”部分。

38、第二方面

39、本發(fā)明還提供一種核酸分子，其包含編碼本發(fā)明所述的抗b7-h3抗體或其片段中包含的重鏈cdrs、輕鏈cdrs、輕鏈可變區(qū)、重鏈可變區(qū)、重鏈和/或輕鏈的核苷酸序列。

40、第三方面

41、本發(fā)明的核酸分子可以被克隆到載體中，進(jìn)而轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。因此，第三方面，本發(fā)明還提供一種載體，所述載體包含本發(fā)明的核酸分子。所述載體可以為真核表達(dá)載體、原核表達(dá)載體、人工染色體及噬菌體載體等。

42、第四方面

43、本發(fā)明的載體或核酸分子可以用于轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，用于保存或抗體表達(dá)等目的。因此，第四方面，本發(fā)明提供一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含本發(fā)明的核酸分子和/或載體，或者所述宿主細(xì)胞被本發(fā)明的核酸分子和/或載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染。宿主細(xì)胞可以是任何原核或真核細(xì)胞，例如細(xì)菌或昆蟲、真菌、植物或動物細(xì)胞。

44、本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段可以利用本領(lǐng)域已知的任何方法獲得。例如，在允許本發(fā)明提供的宿主細(xì)胞表達(dá)所述抗體的重鏈和輕鏈的情況下，培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞。任選地，所述方法還包括回收產(chǎn)生的抗體的步驟。如上所述，例如，可通過重組dna技術(shù)或通過酶促或化學(xué)斷裂完整抗體來產(chǎn)生抗體的片段。本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段可以利用本領(lǐng)域已知的任何方法獲得。例如，在允許本發(fā)明提供的宿主細(xì)胞表達(dá)所述抗體的重鏈和/或輕鏈以組裝成所述抗體的情況下，培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞。任選地，所述方法還包括回收產(chǎn)生的抗體的步驟。

45、第五方面

46、本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段、核酸分子、載體和/或宿主細(xì)胞可以被包含在藥物組合物中，更特別地被包含在藥物制劑中，從而根據(jù)實際需要用于各種目的。因此，在第五方面，本發(fā)明還提供一種組合物，所述組合物包含本發(fā)明所述的抗b7-h3抗體或其片段、核酸分子、載體和/或宿主細(xì)胞；優(yōu)選地，所述組合物為藥物組合物，其還任選地包含藥學(xué)上可接受的載體、輔料或賦形劑。

47、第六方面

48、本發(fā)明提供所述抗b7-h3抗體或其片段、核酸分子、載體、宿主細(xì)胞和/或組合物在制備用于治療與b7-h3表達(dá)(包括過表達(dá))相關(guān)疾病的藥物中的用途。優(yōu)選地，所述疾病為腫瘤。更優(yōu)選地，所述腫瘤為實體腫瘤，例如胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌、食管癌、非小細(xì)胞癌、前列腺癌、卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤、尤文肉瘤、腎母細(xì)胞瘤和促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞瘤。

49、第七方面

50、本發(fā)明還提供所述抗b7-h3抗體或其片段、核酸分子、載體、宿主細(xì)胞和/或組合物在制備用于診斷與b7-h3表達(dá)(包括過表達(dá))相關(guān)疾病的試劑中的用途。優(yōu)選地，所述疾病為腫瘤或癌癥。更優(yōu)選地，所述疾病為實體腫瘤，例如胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌、食管癌、非小細(xì)胞癌、前列腺癌、卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤、尤文肉瘤、腎母細(xì)胞瘤和促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞瘤。

51、第八方面

52、本發(fā)明還提供一種治療與b7-h3表達(dá)(包括過表達(dá))相關(guān)疾病的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用本發(fā)明的抗b7-h3抗體或其片段、核酸分子、載體、宿主細(xì)胞和/或組合物，以及任選的其他藥物或手段。該任選的其他藥物或手段是指可以與本發(fā)明所述抗體或其片段、核酸分子、載體、宿主細(xì)胞和/或組合物聯(lián)合施用的其他藥物或手段，例如小分子化藥、靶向藥、抗體等重組蛋白藥、疫苗、adc、溶瘤病毒、基因和核酸治療藥物和放射療法。二者的聯(lián)合施用可以采取任意形式進(jìn)行，例如同時、連續(xù)或間隔一定時間進(jìn)行。

53、優(yōu)選地，所述疾病為腫瘤或癌癥。更優(yōu)選地，所述疾病為實體腫瘤，例如胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌、食管癌、非小細(xì)胞癌、前列腺癌、卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤、尤文肉瘤、腎母細(xì)胞瘤和促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞瘤。

54、優(yōu)選地，所述受試者為哺乳動物，優(yōu)選靈長類動物，更優(yōu)選為人。

55、本發(fā)明提供的上述疾病治療方法在應(yīng)用時取決于多種因素，包括所施用的具體活性成分，患者的年齡、體重、性別或身體和醫(yī)療狀況，待處理病情的嚴(yán)重程度，給藥途徑等。

56、第九方面

57、本發(fā)明還提供一種診斷與b7-h3表達(dá)(包括過表達(dá))相關(guān)疾病的方法，所述方法包括使本發(fā)明的抗b7-h3抗體或其片段、核酸分子、載體、宿主細(xì)胞和/或組合物與來自受試者的樣品相接觸。優(yōu)選地，所述疾病為腫瘤或癌癥。更優(yōu)選地，所述疾病為實體腫瘤，例如胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌、食管癌、非小細(xì)胞癌、前列腺癌、卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤、尤文肉瘤、腎母細(xì)胞瘤和促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞瘤。

58、優(yōu)選地，所述受試者為哺乳類動物；更優(yōu)選地，所述受試者為人。

59、第十方面

60、本發(fā)明提供包含所述抗b7-h3抗體或其片段、核酸分子、載體、宿主細(xì)胞和/或組合物的試劑盒。所述試劑盒用于上文所述的治療或者診斷用途?？蛇x地，所述試劑盒還可包括使用說明書。

61、第十一方面

62、如上所述，本發(fā)明的另一個目的是提供制備的靶向b7-h3的抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽，其中優(yōu)選地，采用本發(fā)明提供的抗b7-h3抗體或其片段來制備所述抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽。因此，第十一方面，本發(fā)明提供一種抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽，所述抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽具有如結(jié)構(gòu)式ia和/或ib所示的結(jié)構(gòu)：

63、

64、和/或

65、

66、在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，ab表示抗b7-h3抗體或其片段。優(yōu)選地，所述抗體或其片段為本發(fā)明上文在第一方面中所限定的抗b7-h3抗體或其片段。

67、在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，m為亞苯基或由一個或多個取代基取代的亞苯基，或化學(xué)鍵；在取代的亞苯基中，所述取代基選自烷基(例如c1-6烷基、優(yōu)選c1-4烷基)、鹵代烷基(例如鹵代c1-6烷基、優(yōu)選鹵代c1-4烷基，例如三氟甲基)、烷氧基(例如c1-6烷氧基、優(yōu)選c1-4烷氧基，優(yōu)選甲氧基)、鹵素、酯基、酰胺基和氰基；優(yōu)選地，m為鹵素取代的亞苯基。

68、在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，sp1選自c1-8亞烷基、c1-8亞環(huán)烷基或c1-21(優(yōu)選c1-16、更優(yōu)選c1-11、更優(yōu)選c5-9)直鏈亞雜烷基，所述c1-21直鏈亞雜烷基包含1-11個(優(yōu)選1-6個、更優(yōu)選3-5個)選自n、o或s的雜原子，其中所述c1-8亞烷基、c1-8亞環(huán)烷基和c1-21直鏈亞雜烷基各自獨(dú)立地任選被選自羥基、氨基、磺酸基和氰基的一個或多個取代基取代。

69、在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，sp2選自-nh(ch2ch2o)ach2ch2co-、-nh(ch2ch2o)ach2co-、-s(ch2)aco-或化學(xué)鍵，其中a為1-20的整數(shù)，優(yōu)選1-10的整數(shù)，更優(yōu)選1-6的整數(shù)。

70、在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，a表示2-4個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)。其中，a表示2個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)時，可以為-phe-lys-、-val-ala-、-val-lys-、-ala-lys-、-val-cit-、-phe-cit-、-leu-cit-、-phe-arg-或-gly-val-，優(yōu)選為-phe-lys-、-val-ala-或-val-cit-；a表示3個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)時，可以為-glu-val-ala-、-glu-val-cit-或-ala-ala-ala-，優(yōu)選為-glu-val-ala-或-ala-ala-ala-；a表示4個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)時，可以為-gly-gly-phe-gly-或-gly-phe-gly-gly-，優(yōu)選為-gly-gly-phe-gly-。優(yōu)選地，a為-val-ala-、-gly-gly-phe-gly-或-ala-ala-ala-。在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，基團(tuán)a通過其短肽結(jié)構(gòu)氨基端的氨基與sp2相連。

71、在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，m優(yōu)選為鹵素取代的亞苯基，特別是氟取代的亞苯基。

72、在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，sp1優(yōu)選為c1-11、優(yōu)選c5-9、更優(yōu)選c7直鏈亞雜烷基，其包含1-6個、優(yōu)選3-5個、更優(yōu)選4個選自n、o或s的雜原子。

73、在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，sp2優(yōu)選為化學(xué)鍵。

74、在結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，m為1～10、優(yōu)選1～8(例如1～5)、更優(yōu)選3～8。m可以為整數(shù)或非整數(shù)。

75、進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽具有如結(jié)構(gòu)式ic和/或id所示的結(jié)構(gòu)：

76、

77、和/或

78、

79、?????????????????????????

80、在結(jié)構(gòu)式ic和/或id中，ab、基團(tuán)a及m與結(jié)構(gòu)式ia和/或ib中的ab、基團(tuán)a及m的定義相同。

81、在結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，cpt為喜樹堿類化合物。

82、進(jìn)一步地，在結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中，cpt的結(jié)構(gòu)如結(jié)構(gòu)式i所示，其中結(jié)構(gòu)式i與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接，優(yōu)選以結(jié)構(gòu)式i中與基團(tuán)g相鄰的氨基與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接：

83、

84、在結(jié)構(gòu)式i中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，r1、r2、r3、r4獨(dú)立地為氫、鹵素、羥基、c1-6烷氧基、氨基或取代氨基、c1-7烷基或取代的c1-7烷基，或者r1、r2、r3、r4中的任意兩個連同它們所連接的碳原子構(gòu)成c3-6(優(yōu)選c3-5)環(huán)狀烷基。當(dāng)r1、r2、r3、r4獨(dú)立地為c1-6烷氧基時，所述c1-6烷氧基包括直鏈或支鏈的c1-6烷氧基，優(yōu)選地為直鏈或支鏈的c1-3烷氧基，更優(yōu)選甲氧基。當(dāng)r1、r2、r3、r4獨(dú)立地為取代氨基時，所述取代氨基為由選自甲基和乙基的一個或多個取代基取代的氨基。當(dāng)r1、r2、r3、r4獨(dú)立地為c1-7烷基或取代的c1-7烷基時，所述c1-7烷基或取代的c1-7烷基包括直鏈或支鏈的c1-7(優(yōu)選c3-5、更優(yōu)選c4)烷基或取代的c1-7(優(yōu)選c3-5、更優(yōu)選c4)烷基，并且，取代的c1-7烷基為由選自環(huán)丙基和環(huán)丁基的一個或多個取代基取代的c1-7烷基；或者，所述直鏈或支鏈的c1-7烷基或取代的c1-7烷基優(yōu)選為c1-3烷基或取代的c1-3烷基，例如甲基、鹵代甲基(優(yōu)選三氟甲基)。

85、在結(jié)構(gòu)式i中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，g為氫、鹵素、甲基或甲氧基。優(yōu)選地，g為氫、氟或氯。

86、在結(jié)構(gòu)式i中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，y為氧、硫、砜、亞砜、亞甲基或取代亞甲基。取代亞甲基可以是亞甲基的一個氫被取代，也可以是兩個氫同時被取代，取代基可以為芐基或烷基；當(dāng)取代基為烷基時，所述烷基與r3和/或r4以及連同它們所連接的碳原子可以構(gòu)成c3-6元并環(huán)或螺環(huán)的結(jié)構(gòu)；或者，當(dāng)取代基為2個烷基時，所述2個烷基可以與基團(tuán)y一起構(gòu)成c3-6元螺環(huán)的結(jié)構(gòu)。當(dāng)y為取代亞甲基時，取代亞甲基的取代基優(yōu)選為烷基，更優(yōu)選為直鏈或支鏈的c1-4烷基。

87、優(yōu)選地，y為氧、硫、砜、亞砜或亞甲基；或者，優(yōu)選地，y為氧、硫或亞甲基。

88、在結(jié)構(gòu)式i中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，x為氧或硫。

89、在結(jié)構(gòu)式i中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，n＝0或1。

90、結(jié)構(gòu)式i中，在r1、r2、r3、r4同時為氫、x為氧、n＝0的情況下，當(dāng)y為亞甲基時，g不可為氫或氟；而當(dāng)y為氧或硫時，g不可為氫。

91、優(yōu)選地，r1、r2、r3、r4獨(dú)立地為氫、鹵素(例如氟)、c1-7烷基或取代的c1-7烷基，或者r1、r2、r3、r4中的任意兩個連同它們所連接的碳原子構(gòu)成c3-6環(huán)狀烷基(例如c3-5環(huán)狀烷基)。進(jìn)一步地，r1、r2可以是相同的；和/或，r3、r4可以是相同的。

92、優(yōu)選地，y為由烷基取代的亞甲基，所述烷基與r3和/或r4以及連同它們所連接的碳原子可以構(gòu)成c3-6元并環(huán)或螺環(huán)的結(jié)構(gòu)。

93、優(yōu)選地，x可以為氧。

94、優(yōu)選地，x為氧，g為氫、鹵素(例如氟或氯)、甲基或甲氧基，y和r1、r2、r3、r4如上文所定義。

95、優(yōu)選地，x為氧，g為氫，y為亞甲基或取代亞甲基、氧、硫、亞砜或砜，r1、r2、r3、r4如上文所定義。

96、優(yōu)選地，x為氧，g為氟，y為亞甲基或取代亞甲基、氧或硫，r1、r2、r3、r4如上文所定義。

97、優(yōu)選地，x為氧，g為氯，y為亞甲基或取代亞甲基、氧或硫，r1、r2、r3、r4如上文所定義。

98、優(yōu)選地，x為氧，g為甲基，y為亞甲基或取代亞甲基、氧或硫，r1、r2、r3、r4如上文所定義。

99、優(yōu)選地，x為氧，g為甲氧基，y為亞甲基或取代亞甲基、氧或硫，r1、r2、r3、r4如上文所定義。

100、優(yōu)選地，x為氧，g為氫，y為亞甲基、亞砜、砜、氧或硫，r1、r2獨(dú)立地為氫、氟或甲基，r3、r4獨(dú)立地為氫。

101、優(yōu)選地，x為氧，g為氟，y為亞甲基、亞砜、砜、氧或硫，r1、r2獨(dú)立地為氫、氟或甲基，r3、r4獨(dú)立地為氫。

102、優(yōu)選地，n＝0。

103、根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式，在結(jié)構(gòu)式i中：

104、g為氫，y為亞甲基，r1和r2為甲基，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

105、g為氫，y為亞甲基，r1和r2為氟，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

106、g為氫，y為亞甲基，r1和r2之一與r3和r4之一連同它們所連接的碳原子構(gòu)成c3環(huán)狀烷基，r1和r2另一與r3和r4另一為氫，x為氧，n＝0；

107、g為氫，y為硫，r1和r2為氫，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

108、g為氫，y為亞砜，r1和r2為氫，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

109、g為氫，y為硫，r1和r2為氟，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

110、g為氫，y為砜，r1和r2為氫，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

111、g為氫，y為亞甲基，r1和r2為氫，r3和r4為氫，x為氧，n＝1；

112、g為氟，y為氧，r1和r2為氫，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

113、g為氟，y為硫，r1和r2為氫，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

114、g為氟，y為氧，r1和r2為氟，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

115、g為氟，y為亞甲基，r1和r2為氟，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；

116、g為氫，y為氧，r1和r2為氟，r3和r4為氫，x為氧，n＝0；或

117、g為氟，y為硫，r1和r2為氟，r3和r4為氫，x為氧，n＝0。

118、優(yōu)選地，在結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中，cpt的結(jié)構(gòu)如結(jié)構(gòu)式ia所示，其中結(jié)構(gòu)式ia與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接，優(yōu)選以結(jié)構(gòu)式ia中左側(cè)苯環(huán)上的氨基與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接：

119、

120、結(jié)構(gòu)式ia中，基團(tuán)r1、r2、r3、r4與上文結(jié)構(gòu)式i中基團(tuán)r1、r2、r3、r4的定義相同，但是r1、r2、r3、r4不同時為氫。

121、或者，在結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中，cpt的結(jié)構(gòu)如結(jié)構(gòu)式ii所示，其中結(jié)構(gòu)式ii與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接，優(yōu)選以結(jié)構(gòu)式ii中與基團(tuán)g相鄰的氨基與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接：

122、

123、在結(jié)構(gòu)式ii中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，r5為c1-5烷基或由一個或多個取代基取代的c1-5烷基、c3-6環(huán)狀烷基或由一個或多個取代基取代的c3-6環(huán)狀烷基、苯基或取代苯基。當(dāng)r5為c1-5烷基或取代的c1-5烷基時，所述c1-5烷基包括直鏈或支鏈的c1-5烷基。進(jìn)一步地，r5為c1-4直鏈烷基。當(dāng)r5為取代的c1-5烷基或取代的c3-6環(huán)狀烷基時，取代基選自鹵素、羥基、甲氧基、三氟甲基、氨基或取代氨基、甲磺?；蚦3-6環(huán)狀烷基；并且其中，取代氨基為由選自甲基和乙基的一個或多個取代基取代的氨基。當(dāng)r5為取代苯基時，取代基選自烷基(例如c1-6烷基、優(yōu)選c1-3)或鹵素。

124、在結(jié)構(gòu)式ii中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，g為氫、鹵素(例如氟)、甲基或甲氧基。優(yōu)選地，g為氫、氟或氯。

125、結(jié)構(gòu)式ii中，x為氧或硫。

126、結(jié)構(gòu)式ii中，n＝0或1。

127、結(jié)構(gòu)式ii中，當(dāng)x為氧、g為氫、n＝0時，r5不可為正丁基。

128、優(yōu)選地，在結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中，cpt的結(jié)構(gòu)如結(jié)構(gòu)式iia所示，其中結(jié)構(gòu)式iia與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接，優(yōu)選以結(jié)構(gòu)式iia中左側(cè)苯環(huán)上的氨基與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接：

129、

130、結(jié)構(gòu)式iia中，基團(tuán)r5與上文結(jié)構(gòu)式ii中基團(tuán)r5的定義相同，但是r5不可為正丁基。

131、根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式，在結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中，所述cpt的結(jié)構(gòu)如下所示，其中各個結(jié)構(gòu)式與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接，優(yōu)選以各個結(jié)構(gòu)式中左側(cè)苯環(huán)上的氨基與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接：

132、

133、

134、

135、進(jìn)一步地，在結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中，cpt的結(jié)構(gòu)如結(jié)構(gòu)式iv所示，其中結(jié)構(gòu)式iv中與r8連接于同一個碳的羥基與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a的羧基通過自釋放結(jié)構(gòu)相連，該自釋放結(jié)構(gòu)例如實線表示與結(jié)構(gòu)式ia、ib、ic和id的任一個中基團(tuán)a的羧基連接的位點，波浪線表示與結(jié)構(gòu)式iv中羥基連接的位點：

136、

137、在結(jié)構(gòu)式iv中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，r8為氫、三氟甲基、c1-5烷基或由一個或多個取代基取代的c1-5烷基、c3-6環(huán)狀烷基或由一個或多個取代基取代的c3-6環(huán)狀烷基、或鹵素。

138、當(dāng)r8為取代的c1-5烷基或取代的c3-6環(huán)狀烷基時，所述取代基選自鹵素、羥基、甲氧基、三氟甲基、氨基或取代氨基、甲磺?；蚦3-6環(huán)狀烷基；并且其中，取代氨基為由選自甲基和乙基的一個或多個取代基取代的氨基。

139、第十二方面

140、本發(fā)明提供一種抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽，所述抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽具有通式所示結(jié)構(gòu)，其中，mab表示抗b7-h3抗體或其片段。優(yōu)選地，mab為本發(fā)明上文在第一方面中所限定的抗b7-h3抗體或其片段。

141、在該通式中，基團(tuán)m、sp1、sp2、a及cpt與上文第十一方面中基團(tuán)m、sp1、sp2、a及cpt的定義相同；n為1～10、優(yōu)選1～8(例如1～5)、更優(yōu)選3～8。

142、在該通式中，el選自如下基團(tuán)，其中，表示與mab中半胱氨酸相連，表示與m相連：

143、el-1a和/或el-1b：和/或el-2：el-3：el-4：el-5：el-6：

144、第十三方面

145、本發(fā)明提供具有通式“l(fā)-a-cpt”所示結(jié)構(gòu)的含藥連接子(linker-payload)，其中l(wèi)表示用于抗體藥物偶聯(lián)物(adc)的連接子，a表示一個或多個氨基酸，cpt為喜樹堿類化合物。

146、在本發(fā)明的第十三方面，所述具有通式l-a-cpt所示結(jié)構(gòu)的含藥連接子為結(jié)構(gòu)式iii所示結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥：

147、

148、在結(jié)構(gòu)式iii中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，e選自如下基團(tuán)，其中，表示與m的連接位點：

149、e-1：e-2：e-3：e-4：e-5：和e-6：

150、在結(jié)構(gòu)式iii中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，m為亞苯基或由一個或多個取代基取代的亞苯基，或化學(xué)鍵；在取代的亞苯基中，所述取代基選自烷基(例如c1-6烷基、優(yōu)選c1-4烷基)、鹵代烷基(例如鹵代c1-6烷基、優(yōu)選鹵代c1-4烷基，例如三氟甲基)、烷氧基(例如c1-6烷氧基、優(yōu)選c1-4烷氧基，優(yōu)選甲氧基)、鹵素、酯基、酰胺基和氰基；優(yōu)選地，m為鹵素取代的亞苯基。

151、在結(jié)構(gòu)式iii中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，sp1選自c1-8亞烷基、c1-8亞環(huán)烷基或c1-21(優(yōu)選c1-16、更優(yōu)選c1-11、更優(yōu)選c5-9)直鏈亞雜烷基，所述c1-21直鏈亞雜烷基包含1-11個(優(yōu)選1-6個、更優(yōu)選3-5個)選自n、o或s的雜原子，其中所述c1-8亞烷基、c1-8亞環(huán)烷基和c1-21直鏈亞雜烷基各自獨(dú)立地任選被選自羥基、氨基、磺酸基和氰基的一個或多個取代基取代。

152、在結(jié)構(gòu)式iii中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，sp2選自-nh(ch2ch2o)ach2ch2co-、-nh(ch2ch2o)ach2co-、-s(ch2)aco-或化學(xué)鍵，其中a為1-20的整數(shù)，優(yōu)選1-10的整數(shù)，更優(yōu)選1-6的整數(shù)。

153、在結(jié)構(gòu)式iii中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，a表示2-4個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)。其中，a表示2個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)時，可以為-phe-lys-、-val-ala-、-val-lys-、-ala-lys-、-val-cit-、-phe-cit-、-leu-cit-、-phe-arg-或-gly-val-，優(yōu)選為-phe-lys-、-val-ala-或-val-cit-；a表示3個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)時，可以為-glu-val-ala-、-glu-val-cit-或-ala-ala-ala-，優(yōu)選為-glu-val-ala-或-ala-ala-ala-；a表示4個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)時，可以為-gly-gly-phe-gly-或-gly-phe-gly-gly-，優(yōu)選為-gly-gly-phe-gly-。優(yōu)選地，a為-val-ala-、-gly-gly-phe-gly-或-ala-ala-ala-。在結(jié)構(gòu)式iii中，基團(tuán)a通過其短肽結(jié)構(gòu)氨基端的氨基與sp2相連。

154、在結(jié)構(gòu)式iii中，m優(yōu)選為鹵素取代的亞苯基，特別是氟取代的亞苯基。

155、在結(jié)構(gòu)式iii中，sp1優(yōu)選為c1-11、優(yōu)選c5-9、更優(yōu)選c7直鏈亞雜烷基，其包含1-6個、優(yōu)選3-5個、更優(yōu)選4個選自n、o或s的雜原子。

156、在結(jié)構(gòu)式iii中，sp2優(yōu)選為化學(xué)鍵。

157、在結(jié)構(gòu)式iii中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，cpt為喜樹堿類化合物。

158、其中，當(dāng)基團(tuán)e為e1時，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式iii進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式iiia：

159、

160、在結(jié)構(gòu)式iiia中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，r6、r7獨(dú)立地為氫、鹵素或ar’s，ar’為苯基或由一個或多個取代基取代的苯基，在取代的苯基中，所述取代基選自烷基(例如c1-c6烷基、優(yōu)選c1-c4烷基)、烷氧基(例如c1-c6烷氧基、優(yōu)選c1-c4烷氧基，優(yōu)選甲氧基)、鹵素、酯基、酰胺基和氰基。優(yōu)選地，ar’為苯基、4-甲基甲?；〈交?-甲?；鶈徇〈交?/p>

161、例如，在結(jié)構(gòu)式iii和結(jié)構(gòu)式iiia中，cpt為本發(fā)明上文第十一方面中提供的結(jié)構(gòu)式i或結(jié)構(gòu)式ia所示的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥，以及對應(yīng)的具體化合物。

162、當(dāng)cpt為本發(fā)明上文第十一方面中提供的結(jié)構(gòu)式i所示的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥時：

163、

164、結(jié)構(gòu)式i中，基團(tuán)g、x、y、r1、r2、r3、r4、n與上文第十一方面中結(jié)構(gòu)式i中基團(tuán)g、x、y、r1、r2、r3、r4、n的定義相同。并且在結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中，結(jié)構(gòu)式i與基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接，優(yōu)選以結(jié)構(gòu)式i中與基團(tuán)g相鄰的氨基與a的羧基通過酰胺鍵相連接，即在結(jié)構(gòu)式i所示化合物的氨基與結(jié)構(gòu)式iii或iiia中a的羧基形成了酰胺鍵。

165、當(dāng)cpt為本發(fā)明上文第十一方面中提供的結(jié)構(gòu)式ia所示的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥時：

166、

167、?????????

168、結(jié)構(gòu)式ia中，基團(tuán)r1、r2、r3、r4與上文第十一方面中結(jié)構(gòu)式ia中基團(tuán)r1、r2、r3、r4的定義相同，但是r1、r2、r3、r4可以同時為氫。并且在結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中，結(jié)構(gòu)式ia與基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接，優(yōu)選以結(jié)構(gòu)式ia中左側(cè)苯環(huán)上的氨基與基團(tuán)a的羧基通過酰胺鍵相連接，即結(jié)構(gòu)式ia所示化合物的氨基與結(jié)構(gòu)式iii或iiia中a的羧基形成了酰胺鍵。

169、特別地，當(dāng)結(jié)構(gòu)式iiia所示化合物中的“cpt”為結(jié)構(gòu)式ia所示化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥時，r6和r7可以同時為氫，或不同時為氫。同樣地，結(jié)構(gòu)式ia中的r1、r2、r3、r4可以同時為氫，或不同時為氫。根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式，當(dāng)r6和r7同時為氫時，結(jié)構(gòu)式ia中的r1、r2、r3、r4不同時為氫；當(dāng)r6和r7不同時為氫時，結(jié)構(gòu)式ia中的r1、r2、r3、r4可以同時為氫，或不同時為氫。

170、又如，在結(jié)構(gòu)式iii和結(jié)構(gòu)式iiia中，cpt為本發(fā)明上文第十一方面中提供的結(jié)構(gòu)式ii或結(jié)構(gòu)式iia所示的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥，以及對應(yīng)的具體化合物。

171、當(dāng)cpt為本發(fā)明上文第十一方面中提供的結(jié)構(gòu)式ii所示的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥時：

172、

173、結(jié)構(gòu)式ii中，基團(tuán)g、r5、x、n與上文第十一方面中結(jié)構(gòu)式ii中基團(tuán)g、r5、x、n的定義相同。并且在結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中，結(jié)構(gòu)式ii與基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接，優(yōu)選以結(jié)構(gòu)式ii中與基團(tuán)g相鄰的氨基與基團(tuán)a的羧基通過酰胺鍵相連接，即結(jié)構(gòu)式ii所示化合物的氨基與結(jié)構(gòu)式iii或iiia中a的羧基形成了酰胺鍵。

174、當(dāng)cpt為本發(fā)明上文第十一方面中提供的結(jié)構(gòu)式iia所示的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥時：

175、

176、結(jié)構(gòu)式iia中，基團(tuán)r5與上文第十一方面中結(jié)構(gòu)式iia中基團(tuán)r5的定義相同，但是可以為正丁基。并且在結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中，結(jié)構(gòu)式iia與基團(tuán)a中的羧基通過酰胺鍵相連接，優(yōu)選以結(jié)構(gòu)式iia中左側(cè)苯環(huán)上的氨基與基團(tuán)a的羧基通過酰胺鍵相連接，即結(jié)構(gòu)式iia所示化合物的氨基與結(jié)構(gòu)式iii或iiia中a的羧基形成了酰胺鍵。

177、上文第十一方面中提出的化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、14-p、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥均可用作結(jié)構(gòu)式iii或iiia中的“cpt”，并通過其氨基與結(jié)構(gòu)式iii或iiia中基團(tuán)a的羧基通過酰胺鍵連接。

178、又如，在結(jié)構(gòu)式iii和結(jié)構(gòu)式iiia中，cpt可以為結(jié)構(gòu)式iv所示的依喜替康(exteacan)衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥：

179、

180、在結(jié)構(gòu)式iv中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，r8為氫、三氟甲基、c1-5烷基或由一個或多個取代基取代的c1-5烷基、c3-6環(huán)狀烷基或由一個或多個取代基取代的c3-6環(huán)狀烷基、或鹵素。并且在結(jié)構(gòu)式iii和結(jié)構(gòu)式iiia中，結(jié)構(gòu)式iv經(jīng)由其中與r8連接于同一個碳的羥基與基團(tuán)a中的羧基通過自釋放結(jié)構(gòu)相連，該自釋放結(jié)構(gòu)例如實線表示與結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中a的羧基連接的位點，波浪線表示與結(jié)構(gòu)式iv中羥基連接的位點。

181、當(dāng)r8為取代的c1-5烷基或取代的c3-6環(huán)狀烷基時，所述取代基選自鹵素、羥基、甲氧基、三氟甲基、氨基或取代氨基、甲磺?；蚦3-6環(huán)狀烷基；并且其中，取代氨基為由選自甲基和乙基的一個或多個取代基取代的氨基。

182、特別地，當(dāng)結(jié)構(gòu)式iiia所示化合物中的“cpt”為結(jié)構(gòu)式iv所示化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、立體異構(gòu)體、溶劑化物或前藥時，r6和r7可以同時為氫，或不同時為氫。同樣地，結(jié)構(gòu)式iv中的r8可以為氫，或不為氫。根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式，在r6和r7同時為氫時，r8可以為氫或不為氫。

183、特別地，對于結(jié)構(gòu)式iiia所示的化合物，當(dāng)r6、r7為ar’s時，m優(yōu)選為亞苯基或取代的亞苯基，同時sp1為c1-21(優(yōu)選c1-16、更優(yōu)選c1-11、更優(yōu)選c5-9)直鏈亞雜烷基，所述直鏈亞雜烷基包含1-11個(優(yōu)選1-6個、更優(yōu)選3-5個)選自n、o或s的雜原子。

184、優(yōu)選地，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式iii和結(jié)構(gòu)式iiia所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式v所示的化合物：

185、

186、結(jié)構(gòu)式v中，r6、r7獨(dú)立地為ar’s，ar’為苯基或由一個或多個取代基取代的苯基，在取代的苯基中，取代基選自烷基(例如c1-c6烷基、優(yōu)選c1-c4烷基)、烷氧基(例如c1-c6烷氧基、優(yōu)選c1-c4烷氧基，優(yōu)選甲氧基)、鹵素、酯基、酰胺基和氰基。優(yōu)選地，ar’為苯基、4-甲基甲?；〈交?-甲?；鶈徇〈交?/p>

187、結(jié)構(gòu)式v中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，xh和yh獨(dú)立地為氫、鹵素、鹵代烷基(例如鹵代c1-c6烷基、優(yōu)選鹵代c1-c4烷基，例如三氟甲基)或烷氧基(例如c1-c6烷氧基、優(yōu)選c1-c4烷氧基，例如甲氧基)。

188、結(jié)構(gòu)式v中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，m為1～10、優(yōu)選1～5、更優(yōu)選3-5中任一整數(shù)。

189、結(jié)構(gòu)式v中，a表示2-4個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)，如上文所定義。

190、結(jié)構(gòu)式v中，cpt的定義及其在結(jié)構(gòu)式v中的連接關(guān)系與結(jié)構(gòu)式iii和結(jié)構(gòu)式iiia中cpt相同，如上文所定義。

191、優(yōu)選地，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式v所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式v-a所示的化合物：

192、

193、結(jié)構(gòu)式v-a中，基團(tuán)a、g、y、r1、r2、r3、r4、x、n與上文結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中基團(tuán)a、g、y、r1、r2、r3、r4、x、n的定義相同。

194、優(yōu)選地，結(jié)構(gòu)式v-a中，g為氫、氟或氯。

195、優(yōu)選地，結(jié)構(gòu)式v-a中，y為亞甲基、硫或氧。

196、結(jié)構(gòu)式v-a中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，“-a-nh-”表示所示氨基與a中的羧基形成酰胺鍵。

197、優(yōu)選地，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式v-a所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式v-a-1所示的化合物：

198、

199、或者，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式v所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式v-b所示的化合物：

200、

201、結(jié)構(gòu)式v-b中，基團(tuán)a、g、r5、x、n與上文結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中基團(tuán)a、g、r5、x、n的定義相同。

202、結(jié)構(gòu)式v-b中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，“-a-nh-”表示所示氨基與a中的羧基形成酰胺鍵。

203、優(yōu)選地，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式v-b所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式v-b-1所示的化合物：

204、

205、或者，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式v所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式v-c所示的化合物：

206、

207、結(jié)構(gòu)式v-c中，基團(tuán)a、r8與上文結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiiv中基團(tuán)a、r8的定義相同。

208、結(jié)構(gòu)式v-c中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，“-a-nh-”表示所示氨基與a中的羧基形成酰胺鍵。

209、結(jié)構(gòu)式v-c中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，‘-’與上文結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiiv中的cpt為結(jié)構(gòu)式iv時的自釋放結(jié)構(gòu)相同。

210、根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式v所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式vi所示的化合物：

211、

212、結(jié)構(gòu)式vi中，a表示2-4個氨基酸形成的短肽結(jié)構(gòu)，如上文所定義。

213、結(jié)構(gòu)式vi中，cpt為喜樹堿類化合物。cpt的定義及其在結(jié)構(gòu)式vi中的連接關(guān)系與結(jié)構(gòu)式iii和結(jié)構(gòu)式iiia中cpt相同，如上文所定義。

214、優(yōu)選地，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式vi所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式vi-a所示的化合物：

215、

216、結(jié)構(gòu)式vi-a中，基團(tuán)a、g、y、r1、r2、r3、r4、x、n與上文結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中基團(tuán)a、g、y、r1、r2、r3、r4、x、n的定義相同。

217、優(yōu)選地，結(jié)構(gòu)式vi-a中，g為氫、氟或氯。

218、優(yōu)選地，結(jié)構(gòu)式vi-a中，y為亞甲基、硫或氧。

219、結(jié)構(gòu)式vi-a中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，“-a-nh-”表示所示氨基與a中的羧基形成酰胺鍵。

220、優(yōu)選地，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式vi-a所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式vi-a-1所示的化合物：

221、

222、或者，結(jié)構(gòu)式vi所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式vi-b所示的化合物：

223、

224、結(jié)構(gòu)式vi-b中，基團(tuán)a、g、r5、x、n與上文結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中基團(tuán)a、g、r5、x、n的定義相同。

225、結(jié)構(gòu)式vi-b中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，“-a-nh-”表示所示cpt中的氨基與a中的羧基形成酰胺鍵。

226、更優(yōu)選地，結(jié)構(gòu)式vi-b所示化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式vi-b-1所示的化合物：

227、

228、或者，本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式vi所示的化合物進(jìn)一步為結(jié)構(gòu)式vi-c所示的化合物：

229、

230、結(jié)構(gòu)式vi-c中，基團(tuán)a、r8的定義與上文結(jié)構(gòu)式iii或結(jié)構(gòu)式iiia中基團(tuán)a、r8的定義相同。

231、結(jié)構(gòu)式vi-c中，并且在本發(fā)明的上下文中如無其他說明，“-a-nh-”表示所示氨基與a中的羧基形成酰胺鍵。

232、當(dāng)結(jié)構(gòu)式v-c中自釋放結(jié)構(gòu)為時，結(jié)構(gòu)式v-c可進(jìn)一步如結(jié)構(gòu)式vi-c所示結(jié)構(gòu)。

233、根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式，在本發(fā)明的第十三方面，所述化合物具有如下結(jié)構(gòu)：

234、

235、

236、

237、

238、

239、

240、

241、

242、

243、

244、第十四方面

245、本發(fā)明提供一種抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽的制備方法，所述方法包括以下步驟：

246、a.抗體還原：將≥5.5倍抗體摩爾當(dāng)量的還原劑加入到含5-30mg/ml濃度抗體的磷酸鹽緩沖液中，反應(yīng)1.5-2h，其中所述還原劑為選自tcep、dtt、2-mea和dtba中的一種或多種；

247、b.抗體偶聯(lián)及水解：將步驟a中經(jīng)還原的抗體置換到ph?6.5-7.8的磷酸鹽緩沖液中，并將抗體稀釋到3.5-15mg/ml濃度，將溶解于有機(jī)共溶劑中的4.5-6.5倍抗體摩爾當(dāng)量的含藥連接子加入到所述抗體稀釋液中，在15-35℃下攪拌反應(yīng)≥0.5h，其中所述有機(jī)共溶劑為選自dma、dmso、dmf和acn中的一種或多種；將抗體偶聯(lián)產(chǎn)物置換到ph?7.4-9.0的磷酸鹽緩沖液中，在35±10℃下加熱2-24h，得到水解產(chǎn)物；

248、c.疏水層析：使用疏水填料對抗體偶聯(lián)產(chǎn)物進(jìn)行疏水層析純化。

249、其中，步驟a中，所述抗體為抗腫瘤相關(guān)抗原的抗體，所述例如her2、b7-h3、her3、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd37、cd45、cd56、cd66e、cd70、cd74、cd73、cd79b、cd138、cd147、cd223、epcam、粘蛋白1(mucin?1)、steap1、gpnmb、fgf2、folr1、egfr、egfrviii、組織因子(tissuefactor)、c-met、fgfr、nectin?4、ags-16、鳥苷酸環(huán)化酶c(guanylyl?cyclasec)、間皮素(mesothelin)、slc44a4、psma、epha2、ags-5、gpc-3、c-kit、ror1、pd-l1、cd27l、5t4、mucin16、napi2b、steap、slitrk6、etbr、bcma、trop-2、ceacam5、sc-16、slc39a6、delta-like?protein3、claudin?18.2等。

250、優(yōu)選地，所述抗體為抗b7-h3抗體。更優(yōu)選地，所述抗體為本發(fā)明第一方面中提供的抗b7-h3抗體。例如，所述抗b7-h3抗體可以為本發(fā)明在實施例中提供的抗b7-h3抗體hz10b4、hz10b4m1、hz10b4m2或hz10b4m3。

251、優(yōu)選地，步驟b中，所述含藥連接子為本發(fā)明第十三方面中限定的化合物。

252、第十五方面

253、本發(fā)明提供的抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽可以被包含在組合物中，更特別地被包含在藥物組合物、例如藥物制劑中，從而根據(jù)實際需要用于各種目的。因此，第十五方面，本發(fā)明還提供一種組合物，所述組合物包含本發(fā)明所述的抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽；優(yōu)選地，所述組合物為藥物組合物，其還任選地包含藥學(xué)上可接受的載體、輔料或賦形劑。本發(fā)明提供的藥物組合物可以制成醫(yī)學(xué)或藥學(xué)領(lǐng)域已知的各種劑型，經(jīng)適用方式施用。

254、第十六方面

255、本發(fā)明還提供所述抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽和/或包含其的組合物在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。

256、優(yōu)選地，所述腫瘤與腫瘤相關(guān)抗原例如her2、b7-h3、her3、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd37、cd45、cd56、cd66e、cd70、cd74、cd73、cd79b、cd138、cd147、cd223、epcam、粘蛋白1(mucin?1)、steap1、gpnmb、fgf2、folr1、egfr、egfrviii、組織因子(tissuefactor)、c-met、fgfr、nectin?4、ags-16、鳥苷酸環(huán)化酶c(guanylyl?cyclase?c)、間皮素(mesothelin)、slc44a4、psma、epha2、ags-5、gpc-3、c-kit、ror1、pd-l1、cd27l、5t4、mucin16、napi2b、steap、slitrk6、etbr、bcma、trop-2、ceacam5、sc-16、slc39a6、delta-like?protein3、claudin?18.2的陽性或高表達(dá)相關(guān)。

257、優(yōu)選地，所述腫瘤與b7-h3表達(dá)相關(guān)。更優(yōu)選地，所述腫瘤為實體腫瘤，例如胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌、食管癌、非小細(xì)胞癌、前列腺癌、卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤、尤文肉瘤、腎母細(xì)胞瘤和促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞瘤。

258、第十七方面

259、相應(yīng)地，本發(fā)明還提供一種治療腫瘤的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用本發(fā)明提供的抗體藥物偶聯(lián)物或其鹽和/或包含其的組合物。

260、優(yōu)選地，所述腫瘤與腫瘤相關(guān)抗原例如her2、b7-h3、her3、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd37、cd45、cd56、cd66e、cd70、cd74、cd73、cd79b、cd138、cd147、cd223、epcam、粘蛋白1(mucin?1)、steap1、gpnmb、fgf2、folr1、egfr、egfrviii、組織因子(tissuefactor)、c-met、fgfr、nectin?4、ags-16、鳥苷酸環(huán)化酶c(guanylyl?cyclase?c)、間皮素(mesothelin)、slc44a4、psma、epha2、ags-5、gpc-3、c-kit、ror1、pd-l1、cd27l、5t4、mucin16、napi2b、steap、slitrk6、etbr、bcma、trop-2、ceacam5、sc-16、slc39a6、delta-like?protein3、claudin?18.2的陽性或高表達(dá)相關(guān)。

261、優(yōu)選地，所述腫瘤與b7-h3表達(dá)(包括過表達(dá))相關(guān)。更優(yōu)選地，所述腫瘤為實體腫瘤，例如胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌、食管癌、非小細(xì)胞癌、前列腺癌、卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤、尤文肉瘤、腎母細(xì)胞瘤和促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞瘤。

262、優(yōu)選地，所述受試者為哺乳類動物，優(yōu)選靈長類動物，更優(yōu)選為人。

263、本發(fā)明提供的上述疾病治療方法在應(yīng)用時取決于多種因素，包括所施用的具體活性成分，患者的年齡、體重、性別或身體和醫(yī)療狀況，待處理病情的嚴(yán)重程度，給藥途徑等。

264、在一株已知的抗b7-h3人源化抗體基礎(chǔ)上，本發(fā)明的發(fā)明人采用可變區(qū)定點突變的方式，篩選得到了一系列新型的抗b7-h3人源化抗體。相比于該親本抗體，這些抗體在保留了親本抗體對b7-h3的高親和力的同時，還具有顯著更高的純度，由此克服了親本抗體易斷裂的缺陷，降低了毒副作用。進(jìn)一步地，本發(fā)明的發(fā)明人將該系列的新型人源化抗體與特定結(jié)構(gòu)的喜樹堿類化合物偶聯(lián)得到抗體藥物偶聯(lián)物，利用這些抗體的穩(wěn)定、強(qiáng)健的結(jié)構(gòu)和對b7-h3表達(dá)細(xì)胞的高靶向性與該特定結(jié)構(gòu)的喜樹堿類化合物的強(qiáng)細(xì)胞毒性作用，實現(xiàn)了優(yōu)異的腫瘤殺傷效果。