本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種含有多肽和sod的組合物及其在治療腫瘤中的用途。

背景技術(shù)：

1、超氧化物歧化酶(superoxide?dismutase,sod)是一種重要的抗氧化酶，主要作用是催化超氧化物陰離子(o2-)轉(zhuǎn)化為氧氣和過氧化氫，從而保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激的損傷。sod在生物體內(nèi)的抗氧化防御系統(tǒng)中扮演著關(guān)鍵角色。

2、超氧化物陰離子是代謝過程中產(chǎn)生的有害副產(chǎn)物，可以引起氧化應(yīng)激，損傷細(xì)胞膜、dna和蛋白質(zhì)。sod通過兩步反應(yīng)將超氧化物陰離子(o2-)轉(zhuǎn)化為氧氣(o2)和過氧化氫(h2o2)，后者隨后可以通過過氧化氫酶或谷胱甘肽過氧化物酶進(jìn)一步分解成水。sod通過清除這些超氧化物陰離子，有效地防止了氧化損傷，維持細(xì)胞健康。

3、sod在許多組織中廣泛存在，并在保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激和維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)方面起著重要作用。研究表明，sod活性與多種疾病(如神經(jīng)退行性疾病、炎癥性疾病、癌癥和心血管疾病)的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。增強(qiáng)體內(nèi)sod活性或通過外源性補(bǔ)充sod可能有助于預(yù)防和治療這些疾病。sod及其類似物已被研究用于藥物開發(fā)和治療多種與氧化應(yīng)激相關(guān)的疾病。

4、超氧化物歧化酶(sod)是一種關(guān)鍵的抗氧化酶，通過催化超氧化物陰離子轉(zhuǎn)化為氧氣和過氧化氫，保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激的損傷。sod在抗衰老、疾病防治和維持細(xì)胞健康方面具有重要的生物學(xué)意義。

5、多肽(peptides)是由氨基酸通過肽鍵連接而成的鏈狀分子，介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間。根據(jù)氨基酸殘基的數(shù)量，多肽通常分為寡肽(少于10個(gè)氨基酸)、多肽(10-50個(gè)氨基酸)和蛋白質(zhì)(超過50個(gè)氨基酸)。

6、多肽激素如胰島素、促甲狀腺激素等，通過血液傳遞信號(hào)，調(diào)節(jié)體內(nèi)各種生理過程。多肽如腦啡肽和內(nèi)啡肽在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮重要的信號(hào)傳導(dǎo)作用。天然存在于生物體內(nèi)，具有抗菌、抗病毒和抗真菌活性，如defensins和cathelicidins。許多酶是由多肽鏈組成，催化各種生化反應(yīng)。多肽構(gòu)成了一些結(jié)構(gòu)蛋白，如角蛋白和膠原蛋白，提供細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)支持。

7、通過逐步添加保護(hù)氨基酸來合成多肽鏈，是實(shí)驗(yàn)室中常用的多肽合成方法。在液相中進(jìn)行多肽的逐步合成，適用于短肽的制備。通過基因工程技術(shù)，在細(xì)胞中表達(dá)和提取目標(biāo)多肽。對多肽進(jìn)行化學(xué)修飾，如脂化、糖基化、磷酸化等，以增強(qiáng)其穩(wěn)定性、活性或靶向性。

8、多肽藥物在癌癥、糖尿病、心血管疾病等治療中顯示出廣泛應(yīng)用前景。多肽疫苗通過引導(dǎo)免疫系統(tǒng)識(shí)別和攻擊病原體或腫瘤細(xì)胞，具有較高的特異性和安全性。多肽在生物標(biāo)志物檢測和疾病診斷中具有重要應(yīng)用，如多肽抗體檢測。多肽作為膳食補(bǔ)充劑，用于增強(qiáng)免疫力、抗氧化和抗疲勞等。多肽用于制備生物材料、納米材料和智能材料，具有良好的生物相容性和可調(diào)控性。

9、多肽因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和功能，在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和材料科學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。通過不斷的研究和技術(shù)進(jìn)步，多肽的潛力將被進(jìn)一步挖掘和應(yīng)用，推動(dòng)科學(xué)和技術(shù)的進(jìn)步。

10、結(jié)直腸癌(colorectal?cancer,crc)是一種常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)生于結(jié)腸或直腸的內(nèi)壁。結(jié)直腸癌是全球第三大常見癌癥和第四大癌癥相關(guān)死亡原因。其發(fā)病率和死亡率在發(fā)達(dá)國家較高，但隨著生活方式的改變，發(fā)展中國家的發(fā)病率也在上升。通常在50歲以上人群中較為常見，男性發(fā)病率稍高于女性。

11、家族性腺瘤性息肉病(fap)和遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌(hnpcc，lynch綜合征)是主要的遺傳性風(fēng)險(xiǎn)因素。有結(jié)直腸癌家族史者風(fēng)險(xiǎn)較高。高脂肪、低纖維飲食增加風(fēng)險(xiǎn)。紅肉和加工肉類的攝入也與發(fā)病率相關(guān)。肥胖和缺乏體力活動(dòng)增加風(fēng)險(xiǎn)。長期吸煙和大量飲酒是結(jié)直腸癌的危險(xiǎn)因素?？肆_恩病和潰瘍性結(jié)腸炎等慢性炎癥性腸病增加結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)。

12、早期常無明顯癥狀，或僅有輕微的消化不良、腹脹等不適。晚期直腸或結(jié)腸癌常導(dǎo)致便血或大便顏色變暗。排便習(xí)慣改變，包括腹瀉、便秘或大便形狀改變。持續(xù)性腹痛或不適。癌癥進(jìn)展可能導(dǎo)致體重減輕和持續(xù)疲勞。

13、早期結(jié)直腸癌常通過手術(shù)切除治療，包括局部切除和根治性切除。用于術(shù)后輔助治療或晚期癌癥的全身治療。常用藥物包括氟尿嘧啶、奧沙利鉑和伊立替康。術(shù)前或術(shù)后放療可減少復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。采用靶向藥物如貝伐單抗、賽諾菲和西妥昔單抗治療特定類型的結(jié)直腸癌。近年來，免疫檢查點(diǎn)抑制劑如帕博利珠單抗(keytruda)和納武單抗(opdivo)在治療晚期或轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌中顯示出潛力。

14、結(jié)直腸癌是一種常見且具有潛在致命性的惡性腫瘤，但通過早期篩查、生活方式的改變和適當(dāng)?shù)闹委?，許多病例可以得到有效控制甚至治愈。了解其風(fēng)險(xiǎn)因素、癥狀、診斷和治療方法，對于預(yù)防和治療結(jié)直腸癌至關(guān)重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

0、發(fā)明概述

1、為了解現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種含有多肽和sod的組合物及其制備方法，以及它們在治療結(jié)直腸癌方面的應(yīng)用。

2、對此，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、在一方面，本發(fā)明涉及一種抗腫瘤組合物，其特征在于，所述抗腫瘤組合物由抗腫瘤多肽和sod組成。

4、進(jìn)一步地，本發(fā)明所述抗腫瘤組合物由10-200μg/ml的抗腫瘤多肽和100-1000u/ml的sod組成。

5、更進(jìn)一步地，本發(fā)明所述抗腫瘤組合物由10μg/ml的抗腫瘤多肽和500u/ml的sod組成。

6、另一方面，本發(fā)明所述抗腫瘤多肽選自：

7、(1)具有ktwfylqaghvdspmnrelc(seq?id?no.1)所示的氨基酸序列的多肽；和/或

8、(2)與seq?id?no.1所示的氨基酸序列的同源性至少為70％，且具有相同或相似功能的多肽。

9、進(jìn)一步地，本發(fā)明所述抗腫瘤多肽為與seq?id?no.1所示的氨基酸序列的同源性至少為80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％，且具有相同或相似功能的多肽。

10、進(jìn)一步地，所述抗腫瘤多肽的氨基酸序列為ktwfylqaghvdspmnrelc(seq?idno.1)。

11、第三方面，本發(fā)明所述抗腫瘤多肽的制備方法，包括采用固相合成法合成該抗腫瘤多肽的步驟。

12、進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

13、(1)樹脂溶脹

14、rinkamide?am樹脂(200-400目)，加dmf或dcm溶脹10-30分鐘，用dmf洗滌；

15、(2)脫保護(hù)

16、用哌啶/dmf溶液處理樹脂上的fmoc保護(hù)基，用dmf或dcm多次洗滌樹脂；

17、(3)加載第一個(gè)氨基酸

18、將第一個(gè)氨基酸與活化試劑和綴合試劑混合，加入到溶脹的樹脂中，攪拌反應(yīng)1-2小時(shí)，哌啶/dmf溶液洗滌20-30分鐘除去fmoc基團(tuán)，然后用dmf/dcm多次洗滌樹脂，以除去未反應(yīng)的試劑和副產(chǎn)物；

19、(4)氨基酸的逐步延伸

20、將下一個(gè)氨基酸與活化試劑和綴合試劑混合，加入到樹脂上進(jìn)行耦合反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間1-2小時(shí)，每個(gè)氨基酸耦合后，重復(fù)脫保護(hù)步驟和洗滌步驟；依次加入seq?id?no.1中的每個(gè)氨基酸，重復(fù)上述步驟，直到合成完所有的氨基酸；

21、(5)最終脫保護(hù)和裂解

22、合成完最后一個(gè)氨基酸后，用哌啶/dmf溶液進(jìn)行最后一次脫保護(hù)，用dmf/dcm多次洗滌樹脂，使用裂解液處理樹脂，裂解多肽并去除側(cè)鏈保護(hù)基，反應(yīng)時(shí)間1-3小時(shí)，收集裂解液，真空除去溶劑并凍干；

23、(6)層析并純化

24、使用儀器純化合成的多肽，通過相關(guān)儀器確認(rèn)多肽的純度和分子量。

25、第四方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明所述的抗腫瘤組合物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。

26、第五方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明所述的抗腫瘤組合物在誘導(dǎo)癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死中的用途。

27、第六方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明所述的抗腫瘤組合物在制備癌癥細(xì)胞程序性壞死誘導(dǎo)劑中的用途。

28、進(jìn)一步地，本發(fā)明所述腫瘤為結(jié)直腸癌。

29、本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及有益效果：

30、本發(fā)明提供的新型多肽，以特定比例與sod混合，能夠誘導(dǎo)結(jié)直腸細(xì)胞癌死亡，同時(shí)對正常細(xì)胞的基本無毒，且可以明顯抑制腫瘤細(xì)胞的的生長，為制備治療腫瘤藥物提供了新的策略。