本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種抗衰老藥物組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、t細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中重要的淋巴細(xì)胞，其主要職責(zé)是識(shí)別和清除感染性病原體、腫瘤細(xì)胞及衰老細(xì)胞等，并維持免疫記憶。t細(xì)胞識(shí)別主要組織相容性復(fù)合體(mhc)分子遞呈的抗原肽段，并保持自身耐受性。然而，隨著個(gè)體年齡的增長(zhǎng)，人類的胸腺發(fā)生萎縮，導(dǎo)致t細(xì)胞免疫功能發(fā)生變化，出現(xiàn)多種衰老特征。例如，老年人體內(nèi)幼稚t細(xì)胞比例降低、記憶t細(xì)胞比例增高，t細(xì)胞受體組庫(kù)多樣性降低，t細(xì)胞出現(xiàn)耗竭表型等。這些導(dǎo)致老年人對(duì)抗原，特別是新抗原的識(shí)別和響應(yīng)能力下降，對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答較弱等免疫功能下降表現(xiàn)，從而易患各種新發(fā)感染性疾病、腫瘤等疾病，并且易于向重癥發(fā)展。同時(shí)，t細(xì)胞的衰老也參與了老年人體內(nèi)慢性炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展。特別是近年來一項(xiàng)研究顯示，在t細(xì)胞中條件性敲除線粒體轉(zhuǎn)錄因子a(mitochondrial?transcription?factor?a，tfam)不僅引起t細(xì)胞衰老，也引起了全身各個(gè)實(shí)質(zhì)性臟器的衰老表型及整個(gè)機(jī)體的早衰，說明t細(xì)胞衰老不僅僅是增齡的表現(xiàn)，可能也是機(jī)體衰老的始動(dòng)因素之一。因此，清除衰老的t細(xì)胞可能是延緩衰老的一種手段。

2、自然殺傷細(xì)胞(nk細(xì)胞)，是人體先天性免疫的核心細(xì)胞，具有雙重功能，既可以作為免疫細(xì)胞發(fā)揮殺傷作用，又可以作為免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞參與免疫應(yīng)答，是一類無需預(yù)先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的淋巴細(xì)胞，不僅可以殺傷腫瘤細(xì)胞和抵御病毒，nk細(xì)胞還在清除衰老細(xì)胞和抗衰老方面具有重要作用。有研究表明，nk細(xì)胞可以在體內(nèi)外殺傷并清除衰老的免疫細(xì)胞，提升機(jī)體的免疫力，改善機(jī)體的亞健康狀態(tài)。

3、聚肌苷酸胞苷酸[polyinosinic:polycytidylic?acid，poly(i:c)]，是一種合成的雙鏈rna類似物，由聚胞苷鏈和聚肌苷鏈組成。作為一種干擾素誘導(dǎo)劑，poly(i:c)可激活toll樣受體3(toll-like?receptor?3，tlr3)，分別引起i型干擾素(尤其是ifn-β)的分泌，以及激活轉(zhuǎn)錄因子nf-κb和ap-1，從而激發(fā)炎癥因子和趨化因子(如tnf-α，il-6和cxcl10)的表達(dá)。

4、cn114686429a公開了一種激活nk細(xì)胞的腫瘤免疫治療方法，提供了一種核連蛋白或其促進(jìn)劑的用途，用于制備一種藥物或制劑，所述藥物或制劑(a)用于促進(jìn)nk細(xì)胞的擴(kuò)增，(b)治療腫瘤；和/或(c)殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞。通過該方法激活nk細(xì)胞，獲得的nk細(xì)胞具有廣譜的抗腫瘤作用，不需要識(shí)別腫瘤特異性抗原，免疫系統(tǒng)啟動(dòng)時(shí)間快。

5、cn110760480a公開了一種抗腫瘤nk細(xì)胞及其制備方法，通過crispr-cas9基因編輯技術(shù)使nk92恒定高表達(dá)細(xì)胞因子il2與il12，恒定高表達(dá)的il2與il12經(jīng)過自分泌途徑作用于nk92細(xì)胞自身及其它鄰近細(xì)胞，明顯提高nk92細(xì)胞的增殖能力與對(duì)k562腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。

6、綜上所述，如何提升nk細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞和衰老細(xì)胞的能力，已成為目前本領(lǐng)域亟待解決的問題之一。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種抗衰老藥物組合物及其應(yīng)用，所述抗衰老藥物組合物包括poly(i:c)和nk細(xì)胞，通過poly(i:c)激活nk細(xì)胞，促進(jìn)nk細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞和/或衰老細(xì)胞。

2、為達(dá)此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種抗衰老藥物組合物，所述抗衰老藥物組合物包括聚肌苷酸胞苷酸[poly(i:c)]和自然殺傷細(xì)胞(nk細(xì)胞)。

4、本發(fā)明提供的抗衰老藥物組合物中，poly(i:c)具有激活nk細(xì)胞的作用，可以促進(jìn)nk細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞和衰老細(xì)胞。

5、可以理解的是，任意種類的poly(i:c)，以及以poly(i:c)為主要活性成分的衍生復(fù)合試劑均能適用于本發(fā)明。

6、優(yōu)選地，所述自然殺傷細(xì)胞為自體來源和/或異體來源。

7、優(yōu)選地，所述抗衰老藥物組合物中聚肌苷酸胞苷酸和自然殺傷細(xì)胞的比例為1μg：(5×102～2×106)個(gè)。

8、上述(5×102-2×106)的具體點(diǎn)值可以選擇5×102、1×103、5×103、1×104、5×104、1×105、5×105、1×106或2×106等。

9、優(yōu)選地，所述抗衰老藥物組合物的劑型包括藥劑學(xué)上可接受的任意一種劑型。例如片劑、散劑、混懸劑、膠囊劑、注射劑、噴霧劑、溶液劑、灌腸劑、乳劑、膜劑、栓劑、貼劑、滴鼻劑或滴丸劑等。

10、優(yōu)選地，所述抗衰老藥物組合物還包括藥劑學(xué)上可接受藥用輔料。

11、本發(fā)明所述抗衰老藥物組合物可單獨(dú)給藥也可以與輔料搭配做成適當(dāng)?shù)膭┬瓦M(jìn)行給藥，所述輔料包括稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、乳化劑、助溶劑、增溶劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、ph調(diào)節(jié)劑、抗氧劑、抑菌劑或緩沖劑中的任意一種或至少兩種的組合。

12、優(yōu)選地，所述抗衰老藥物組合物為單一的復(fù)方制劑。

13、優(yōu)選地，所述抗衰老藥物組合物為聚肌苷酸胞苷酸和自然殺傷細(xì)胞兩種單獨(dú)的制劑的組合。

14、優(yōu)選地，所述聚肌苷酸胞苷酸和自然殺傷細(xì)胞同時(shí)施用。

15、優(yōu)選地，所述聚肌苷酸胞苷酸和自然殺傷細(xì)胞依次施用。

16、本發(fā)明所述抗衰老藥物組合物可以為單一的復(fù)方制劑形式，也可以為兩種單獨(dú)的制劑的組合；當(dāng)為兩種單獨(dú)的制劑的組合時(shí)，其用藥方式可以為同時(shí)施用，也可以為依次施用，例如先加入自然殺傷細(xì)胞，再加入聚肌苷酸胞苷酸。

17、第二方面，本發(fā)明提供了如第一方面所述的抗衰老藥物組合物在制備殺傷腫瘤細(xì)胞和/或衰老細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。

18、雖然衰老和腫瘤存在部分相似的特征(如基因組不穩(wěn)定、表觀遺傳改變、慢性炎癥和腸道菌群失衡)，但衰老過程的一些特征(如線粒體功能障礙，細(xì)胞間通訊改變，蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)失衡)并未在腫瘤中發(fā)現(xiàn)明確對(duì)應(yīng)現(xiàn)象。另外，衰老過程所伴隨的細(xì)胞端粒縮短和干細(xì)胞衰竭等現(xiàn)象，還會(huì)抑制腫瘤發(fā)生，說明衰老細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞存在本質(zhì)的區(qū)別。

19、本發(fā)明通過使用抗衰老藥物組合物，poly(i:c)促進(jìn)nk細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞和衰老細(xì)胞，進(jìn)一步提升nk細(xì)胞清除衰老細(xì)胞的能力，改善免疫力，幫助人體延緩衰老過程。具體地，本發(fā)明將poly(i:c)用于促進(jìn)nk細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞sk-ov-3，以及衰老的原代t細(xì)胞和成纖維細(xì)胞imr-90。

20、優(yōu)選地，所述腫瘤細(xì)胞包括卵巢癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、膽管癌細(xì)胞、腸癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞、乳頭狀瘤細(xì)胞、鱗狀上皮瘤細(xì)胞、腺癌細(xì)胞或畸胎瘤細(xì)胞中的任意一種或至少兩種的組合。

21、優(yōu)選地，所述衰老細(xì)胞的來源包括外界誘導(dǎo)衰老細(xì)胞和/或自然衰老細(xì)胞。

22、優(yōu)選地，所述外界誘導(dǎo)衰老細(xì)胞的制備方法包括藥物誘導(dǎo)、紫外線誘導(dǎo)、電離輻射誘導(dǎo)、超聲波處理、機(jī)械損傷、過表達(dá)衰老基因、蛋白酶抑制劑誘導(dǎo)、抑制細(xì)胞代謝狀態(tài)或引起細(xì)胞代謝壓力中的任意一種或至少兩種的組合。

23、優(yōu)選地，所述電離輻射的射線包括x射線或伽馬射線，所述過表達(dá)衰老基因包括過表達(dá)hras基因，所述抑制細(xì)胞代謝狀態(tài)包括使用糖酵解抑制劑或線粒體抑制劑誘導(dǎo)細(xì)胞衰老，所述引起細(xì)胞代謝壓力包括限制細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分(如葡萄糖、氨基酸等)引起細(xì)胞代謝壓力誘導(dǎo)細(xì)胞衰老。

24、優(yōu)選地，所述藥物誘導(dǎo)衰老細(xì)胞和自然衰老細(xì)胞的初始細(xì)胞各自獨(dú)立地選自免疫細(xì)胞、紅細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、上皮細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞、生殖細(xì)胞、干細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、肺細(xì)胞、心肌細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、腸道細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、卵巢細(xì)胞、成骨細(xì)胞或成纖維細(xì)胞中的任意一種或至少兩種的組合。

25、優(yōu)選地，所述免疫細(xì)胞包括t細(xì)胞、b細(xì)胞、nk細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、nkt細(xì)胞、γδt細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞或肥大細(xì)胞中的任意一種或至少兩種的組合。

26、優(yōu)選地，所述衰老細(xì)胞的衰老檢測(cè)指標(biāo)包括cd57、cd28、klrg1、sa-β-gal或p21中的任意一種或至少兩種的組合。

27、優(yōu)選地，所述聚肌苷酸胞苷酸是自然殺傷細(xì)胞的免疫激動(dòng)劑。

28、第三方面，本發(fā)明提供了一種清除腫瘤細(xì)胞和/或衰老細(xì)胞的方法，所述方法包括將腫瘤細(xì)胞和/或衰老細(xì)胞與第一方面所述的抗衰老藥物組合物混合。

29、本發(fā)明提供的清除腫瘤細(xì)胞和/或衰老細(xì)胞的方法，可以應(yīng)用于nk細(xì)胞抗病毒機(jī)制的研究以及藥物的篩選等領(lǐng)域。

30、優(yōu)選地，所述方法具體包括：將初始細(xì)胞的密度調(diào)整至5×104-2×106個(gè)/ml，與自然殺傷細(xì)胞以效靶比為1：(0.5-2)進(jìn)行混合，加入0-100μg/ml聚肌苷酸胞苷酸。

31、可以理解的是，將上述方法中各項(xiàng)數(shù)值進(jìn)行等比例擴(kuò)大或縮小，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

32、上述5×104-2×106的具體點(diǎn)值可以選擇5×104、8×104、1×105、2×105、5×105、8×105、1×106、1.5×106或2×106等。

33、上述0.5-2的具體點(diǎn)值可以選擇0.5、0.7、0.9、1、1.1、1.2、1.4、1.6、1.8或2等。

34、優(yōu)選地，所述方法還具體包括：將抗衰老藥物組合物中的0-100μg/ml聚肌苷酸胞苷酸與密度為5×104-2×106個(gè)/ml的自然殺傷細(xì)胞混合處理20-30h，與腫瘤細(xì)胞和/或衰老細(xì)胞以效靶比為1：(0.5-2)進(jìn)行混合。

35、可以理解的是，將上述方法中各項(xiàng)數(shù)值進(jìn)行等比例擴(kuò)大或縮小，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

36、上述5×104-2×106的具體點(diǎn)值可以選擇5×104、8×104、1×105、2×105、5×105、8×105、1×106、1.5×106或2×106等。

37、上述20-30的具體點(diǎn)值可以選擇20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30等。

38、上述0.5-2的具體點(diǎn)值可以選擇0.5、0.7、0.9、1、1.1、1.2、1.4、1.6、1.8或2等。

39、第四方面，本發(fā)明提供了如第一方面所述的抗衰老藥物組合物在制備殺傷衰老t細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。

40、優(yōu)選地，所述衰老t細(xì)胞sa-β-gal活性水平低、細(xì)胞表面cd28-klrg1+、細(xì)胞表面cd28-cd57+。

41、第五方面，本發(fā)明提供了如第一方面所述的抗衰老藥物組合物在制備殺傷衰老成纖維細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。

42、優(yōu)選地，所述衰老成纖維細(xì)胞過表達(dá)hras基因。

43、上述各項(xiàng)數(shù)值范圍內(nèi)的其他具體點(diǎn)值均可選擇，在此便不再一一贅述。

44、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

45、本發(fā)明提供了一種抗衰老藥物組合物，所述抗衰老藥物組合物包括poly(i:c)和nk細(xì)胞，通過poly(i:c)激活nk細(xì)胞，促進(jìn)nk細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞和/或衰老細(xì)胞。本發(fā)明還提供了一種抗衰老藥物組合物在制備殺傷腫瘤細(xì)胞和/或衰老細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用，所述藥物具有改善免疫力，幫助人體延緩衰老過程的潛在應(yīng)用可能。