本發(fā)明涉及一種新型鉀離子響應型載藥脂質(zhì)體及其制備方法，具體是一種可特異性響應腫瘤微環(huán)境中異常濃度(40～50mm)鉀離子而發(fā)生自組裝的新型脂質(zhì)體。

背景技術(shù)：

1、納米藥物遞送系統(tǒng)可改善藥物在體內(nèi)的生物分布和藥代動力學行為，提升藥物療效及降低藥物毒副作用，近幾十年來得到了廣泛研究。納米藥物遞送系統(tǒng)種類多樣，脂質(zhì)體一直為該領域的研發(fā)熱點。首個多柔比星脂質(zhì)體于1995年成功問市，隨著阿糖胞苷/柔紅霉素復方脂質(zhì)體首個sirna脂質(zhì)體近兩年陸續(xù)由fda獲批上市，為脂質(zhì)體研發(fā)注入了新活力。脂質(zhì)體具有特殊的磷脂雙分子層囊泡結(jié)構(gòu)，可裝載親水性藥物、疏水性藥物及核酸等，生物相容性良好，是一種理想的納米藥物遞送系統(tǒng)。研究表明大部分脂質(zhì)體藥物可以有效降低藥物毒副作用，但是存在腫瘤部位富集量低、滯留時間短、特異性差等問題，進而影響療效。

2、針對這個問題，采用刺激響應性材料來構(gòu)建刺激響應靶向脂質(zhì)體，刺激響應性材料構(gòu)建的智能脂質(zhì)體雖然不能直接靶向至腫瘤細胞結(jié)構(gòu)，但可以響應腫瘤微環(huán)境異常ph、酶等刺激信號發(fā)生理化性能變化，實現(xiàn)藥物在腫瘤部位的被動靶向富集，且具有較好的穩(wěn)定性，受到了越來越多的關(guān)注。然而，ph、酶等常見刺激響應型脂質(zhì)體還是存在藥物利用率不足等問題。

3、鉀離子(k+)為生物體細胞內(nèi)液的主要陽離子，人體中98％的鉀鹽都存在于細胞內(nèi)液，2％的鉀鹽存在于細胞外液。在正常生物體內(nèi)，血液及細胞外液中k+濃度約為3.5～5.5mm，細胞內(nèi)液中k+濃度約為150mm，約為細胞外液的30倍。近期的研究成果，表明一些腫瘤部位涉及大量細胞凋亡和壞死，從而造成腫瘤細胞組織間隙中k+濃度異常升高至約40～50mm，約為正常組織液的10倍。

4、在此，申請?zhí)枮?01510299844.5的專利申請中提出了“k+響應型靶向胞內(nèi)釋藥的兩親嵌段共聚物載藥膠束及其制備方法”，將苯并15冠5丙烯酰胺引入嵌段高分子，設計并制備了一種k+響應型靶向胞內(nèi)釋藥的兩親嵌段共聚物載藥膠束；而申請?zhí)?01610945016.9的專利申請中提出了“一種k+響應型兩親嵌段共聚物載藥膠束及其制備方法”，所述載藥膠束在體內(nèi)釋藥后其嵌段共聚物可經(jīng)正常代謝途徑排出體外，以避免在體內(nèi)蓄積引發(fā)潛在毒性。上述兩方案中的鉀離子響應型納米載藥系統(tǒng)均為膠束，未對鉀離子響應型脂質(zhì)體進行任何披露。

5、因此，本發(fā)明針對腫瘤微環(huán)境異常濃度k+的特征，構(gòu)建特異性響應k+的智能脂質(zhì)體，為腫瘤的治療提供了一種新思路和新方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，本發(fā)明提出一種可特異性響應腫瘤微環(huán)境中異常濃度(40～50mm)鉀離子而發(fā)生自組裝的新型脂質(zhì)體及其制備方法，延長腫瘤組織部位滯留時間及增強腫瘤細胞攝取率，提升藥物療效，對腫瘤的治療具有重要意義。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案：一種新型鉀離子響應型載藥脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體由鉀離子識別型共聚物修飾載藥脂質(zhì)體構(gòu)成，藥物包埋在脂質(zhì)體的內(nèi)核中，其中，載藥脂質(zhì)體中藥物的含量為3～10wt％；載藥脂質(zhì)體粒徑為70～200nm，所述鉀離子識別型共聚物為聚(n-異丙基丙烯酰胺-共聚-苯并15冠5丙烯酰胺-共聚-n,n-二甲基丙烯酰胺)-共聚-二硬脂?；字Ｒ掖及?，其結(jié)構(gòu)式如下：

3、

4、其中，y/(x+y+z)＝0.1～0.4，z/(x+y+z)＝0.2～0.5，x+y+z＝10～300。

5、進一步的，所述鉀離子識別型共聚物的制備方法如下，

6、s1、取n-異丙基丙烯酰胺、苯并15冠5丙烯酰胺、偶氮二異丁腈、n,n-二甲基丙烯酰胺、2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸，加入1,4-二氧六環(huán)溶解；

7、s2、向s1步驟中溶液中通入氮氣，去除溶液中的氧氣，于60℃～80℃溫度下密封反應6～24h；

8、s3、反應結(jié)束后，用四氫呋喃稀釋反應液，將稀釋后的反應液加入到無水乙醚或甲基叔丁基醚中沉淀后過濾，將得到的沉淀用四氫呋喃重新溶解至剛好完全溶解，溶解后再次將溶液用無水乙醚或甲基叔丁基醚進行沉淀，過濾，以此溶解沉淀過濾重復至少三次，得共聚物沉淀a；

9、s4、將s3步驟中的共聚物沉淀a干燥；

10、s5、取s4中的共聚物沉淀、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和n-羥基琥珀酰亞胺，加入三氯甲烷溶解得溶液b；

11、s6、取二硬脂?；字Ｒ掖及?，加入三氯甲烷溶解，加入三乙胺得溶液c；

12、s7、將溶液c加入溶液b中，通氮氣后于3℃下密封反應24h；

13、s8、反應結(jié)束后，旋蒸去除三氯甲烷，用四氫呋喃溶解，將溶解液加入無水乙醚或甲基叔丁基醚中沉淀過濾，將得到的沉淀用四氫呋喃重新溶解至剛好完全溶解，溶解后再次將溶液用無水乙醚或甲基叔丁基醚進行沉淀，過濾，以此溶解沉淀過濾重復至少三次，得共聚物沉淀d；

14、s9、將s8中的共聚物沉淀d干燥，最終得鉀離子識別型共聚物。

15、進一步的，所述步驟s1中的2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸、n-異丙基丙烯酰胺、偶氮二異丁腈的摩爾比為1：(100～200)：(0.05～0.5)；所述苯并15冠5丙烯酰胺的摩爾量占苯并15冠5丙烯酰胺、n-異丙基丙烯酰胺和n,n-二甲基丙烯酰胺摩爾量之和的10％～40％，1,4-二氧六環(huán)的使用量應使混合液中n-異丙基丙烯酰胺的濃度為10～30wt％。

16、本發(fā)明同時公開一種新型鉀離子響應型載藥脂質(zhì)體的制備方法，其包括以下步驟，

17、st1、取磷脂、膽固醇和所述鉀離子識別共聚物，加入有機溶液充分溶解；

18、st2、將st1步驟中的溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，去除有機溶劑，然后加入水相溶液，制得鉀離子識別型脂質(zhì)體；

19、st3、利用超聲波、濾膜擠出、剪切、均質(zhì)調(diào)控脂質(zhì)體粒徑；

20、st4、根據(jù)裝載藥物類型采用主動載藥法或被動載藥法，向步驟st3中的空白脂質(zhì)體中裝載藥物，即得鉀離子響應型載藥脂質(zhì)體。

21、進一步的，所述磷脂包括豆磷脂、卵磷脂、hspc、dhpc、dppc中任意一種或幾種或其合成磷脂。

22、進一步的，所述有機溶液包括氯仿、二氯甲烷、四氫呋喃或甲醇。

23、進一步的，所述水相溶液包括蔗糖水溶液、葡萄糖水溶液、緩沖溶液或生理鹽水。

24、進一步的，所述藥物包括多柔比星、達卡巴嗪、替莫唑胺、福莫斯汀、紫杉醇、順鉑和卡鉑。

25、本發(fā)明中鉀離子響應型載藥脂質(zhì)體的自組裝機理如下：

26、鉀離子識別型共聚物通過可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移自由基聚合(raft)和縮合反應“兩步法”合成，以生物相容性良好的二硬脂?；字Ｒ掖及?dspe)作為疏水部分，以n-異丙基丙烯酰胺(nipam)、苯并15冠5丙烯酰胺(b15c5am)和n,n-二甲基丙烯酰胺(dmam)的共聚物作為親水部分。該共聚物中的15冠5能夠選擇性絡合k+，在絡合k+后，其lsct向低溫遷移，共聚物的疏水性增強。本發(fā)明所述鉀離子識別型載藥脂質(zhì)體是鉀離子識別型共聚物修飾脂質(zhì)體表面形成的脂質(zhì)體，藥物包裹在脂質(zhì)體之中。載藥脂質(zhì)體進入血液循環(huán)后，由于胞外的k+濃度(3.5～5.5mmol/l)較低，而脂質(zhì)體對低濃度k+響應性較小，載藥脂質(zhì)體的lcst高于體溫，體溫對其形態(tài)不會產(chǎn)生太大的影響，載藥脂質(zhì)體仍保持良好的單分散性狀態(tài)。當載藥脂質(zhì)體到達腫瘤微環(huán)境部位，因腫瘤微環(huán)境的k+濃度(40～50mmol/l)較高，共聚物特異性地絡合鉀離子，使得載藥脂質(zhì)體的表面疏水性增強，脂質(zhì)體可通過疏水締合作用發(fā)生自組裝。

27、本發(fā)明的有益效果：鉀離子識別型脂質(zhì)體在識別腫瘤微環(huán)境中異常濃度鉀離子后由親水性轉(zhuǎn)變?yōu)槭杷裕|(zhì)體表面親脂性加強會有利于腫瘤細胞攝取，脂質(zhì)體由于疏水締合作用發(fā)生自組裝，提升了在腫瘤部位的滯留時間和積聚率，可增強藥物的療效。同時，整個制備方法簡單，生物相容性良好，可以裝載親水性藥物、疏水性藥物及核酸藥物，可作為一種通用的新型靶向智能納米藥物遞送系統(tǒng)。

28、總的說來，本發(fā)明延長了腫瘤組織部位滯留時間及增強腫瘤細胞攝取率，提升藥物療效，對腫瘤的治療具有重要意義。