本發(fā)明涉及中藥提取，具體涉及一種常春藤提取物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、洋常春藤乙醇提取物具有解痙、黏液溶解、抗炎、抗菌抗病毒等多種作用。洋常春藤制劑目前在世界多個國家上市，并被廣泛使用于呼吸系統(tǒng)相關(guān)疾病，例如呼吸道粘膜炎、慢性支氣管炎、伴咳嗽的急性呼吸道炎癥。目前，洋常春藤乙醇提取物作為祛痰劑，被制成片劑、膠囊、泡騰片、口服液等多種劑型，在歐洲等多個國家批準上市。作為植物藥，洋常春藤制劑在兒童人群中使用具有良好的安全性和耐受性?，F(xiàn)有上市的prospan牌洋常春藤葉提取物糖漿劑，包含30％乙醇提取的洋常春藤葉提取物7mg/ml，山梨酸鉀1.34mg，無水檸檬酸500μg，山梨糖醇550mg，黃原膠1.5mg，香精3mg，純凈水定容至1ml。其中洋常春藤葉提取物為30％乙醇粗提取，皂苷及其他有效成分含量較低。

2、洋常春藤中主要藥效物質(zhì)為皂苷，三萜皂苷雙糖鏈配糖體包括常春藤皂苷b，常春藤皂苷c，常春藤皂苷d，單糖鏈配糖體α-常春藤皂苷。其他成分還包括黃酮類、香豆素類、聚乙炔、酚酸類、生物堿類、揮發(fā)油類等。

3、現(xiàn)有技術(shù)中公開了多種洋常春藤提取物的制備方法。

4、一測多評法同時測定常春藤口服液中4種皂苷(《中成藥》，2018年第40卷第8期)中采用80％乙醇提取，加堿液處理，4℃靜置過夜，濾液經(jīng)dm130大孔樹脂柱，30％乙醇、70％乙醇梯度洗脫，收集70％乙醇洗脫液濃縮后獲得提取物，但未公開提取物的抗炎效果、提取物得率、皂苷含量等。

5、洋常春藤提取物制備工藝優(yōu)化(楊子文，2018)的摘要中記載，采用80％乙醇提取，加入1％藥材量的堿處理，4℃冷沉8h，濾液經(jīng)hpd-100大孔樹脂柱，經(jīng)30％乙醇、80％乙醇梯度洗脫，收集80％乙醇洗脫液，濃縮后獲得提取物。該方法主要對常春藤皂苷c和α-常春藤皂苷的提取含量和回收率進行了工藝優(yōu)化，但不涉及其他的皂苷成分例如常春藤皂苷b和常春藤皂苷d，而且沒有公開提取物的，但該文獻也未公開提取物得率以及提取物的抗炎效果。

6、cn104306416a公開了一種治療支氣管炎、肺炎和哮喘的藥物及其制備方法(公開日：2015-01-28)，其中記載了常春藤皂苷類成分的制備方法：稱取常春藤的莖葉，在提取釜中按常春藤莖葉與乙醇溶液的質(zhì)量體積比1:3～10用純度為10～90％的乙醇溶液回流提取，回流提取后過濾，離心，減壓濃縮，旋蒸至浸膏狀；用去離子水溶解，過大孔樹脂柱，依次用水和乙醇溶液洗脫；將乙醇洗脫液減壓濃縮，60℃真空干燥，稱重，制得常春藤皂苷。說明書中公開了由常春藤皂苷、常春藤揮發(fā)油混合制成的常春藤口服液對慢性支氣管炎大鼠血清、肺組織及balf中sod活性的影響，并未公開常春藤皂苷成分單獨使用的抗炎效果。

7、cn102188465a公開了一種常春藤植物提取物的制備方法及其用途(公開日：2011-09-21)，其中記載常春藤提取物采用提取溶劑提取，提取液上大孔吸附樹脂，醇洗脫液干燥后即得提取物，該提取物中總皂苷含量不低于30％。該提取物可以單獨或與其它提取物配伍，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、呼吸系統(tǒng)疾病和肝炎等藥物的制備。但說明書中僅通過富集總皂苷含量作為條件優(yōu)化目標，未公開總皂苷、皂苷c和α-皂苷與藥效的作用關(guān)系。

8、現(xiàn)有技術(shù)中，對常春藤進行提取，均主要關(guān)注在提高皂苷的含量、回收率上，例如采用30％乙醇+70％乙醇梯度洗脫是為了去除極性大的雜質(zhì)，如多糖、色素等，是為了富集常春藤提取物中皂苷，提高皂苷含量。但現(xiàn)有技術(shù)并沒有研究皂苷的抗炎藥效是否與其含量或回收率有關(guān)，從公知常識來看，皂苷含量越高應(yīng)該藥效更佳，但申請人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)可能存在與公知常識相悖的現(xiàn)象?，F(xiàn)有技術(shù)沒有對提取工藝中的堿液用量，洗脫梯度與抗炎藥效之間的關(guān)系建立聯(lián)系，也未展開相應(yīng)的研究。有必要從提高常春藤提取物的抗炎藥效角度出發(fā)，對提取工藝進行進一步優(yōu)化。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的，是解決了現(xiàn)有技術(shù)中常春藤葉提取物成分不明，抗炎效果差的技術(shù)問題。

2、本發(fā)明提供一種制備工藝更簡單，成分確定，抗炎效果更好的常春藤提取物。本發(fā)明通過對提取工藝進行優(yōu)化，提高了可溶性有效成分得率，在更低的皂苷含量下，反而提高了提取物的抗炎藥效，縮短了生產(chǎn)周期，節(jié)省生產(chǎn)成本。

3、本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

4、一種常春藤提取物的制備方法，所述方法為：常春藤葉經(jīng)75％～85％乙醇提取，濃縮后調(diào)節(jié)ph至9.5～11，靜置，過濾后所得粗提液過層析柱，用60％～80％乙醇洗脫，制得所述常春藤提取物；所述層析柱為hpd100大孔樹脂柱、聚酰胺柱或c18柱中的一種。

5、進一步，所述層析柱為聚酰胺柱時，優(yōu)選將所述粗提液調(diào)節(jié)ph至中性，再過層析柱。

6、進一步，所述層析柱為c18柱時，所述粗提液過層析柱，可先用30％乙醇洗脫，再用60％～80％乙醇洗脫，收集60％～80％乙醇洗脫的洗脫液。

7、進一步，優(yōu)選所述層析柱為hpd100大孔樹脂柱。

8、進一步，所述方法包括以下步驟：

9、(1)取常春藤葉，粉碎，75％～85％乙醇回流提取，過濾合并濾液；

10、(2)濾液濃縮至無醇味，調(diào)節(jié)ph至9.5～11，冷藏靜置8～15小時，過濾得粗提液；

11、(3)粗提液經(jīng)層析柱，水洗脫至無色，用3～5倍柱體積60％～80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥，制得所述常春藤提取物；所述層析柱為hpd100大孔樹脂柱、聚酰胺柱或c18柱中的一種。

12、所述步驟(1)中，回流提取的次數(shù)可以為多次，如2～4次，優(yōu)選提取2～3次。

13、所述步驟(1)中，75％～85％乙醇的體積用量一般以常春藤葉投料質(zhì)量計為5-12ml/g。

14、所述步驟(1)中，所述回流提取的溫度優(yōu)選為80～90℃。

15、所述步驟(3)中，所述層析柱為聚酰胺柱時，優(yōu)選將粗提液調(diào)節(jié)ph至中性，再過層析柱。

16、所述層析柱為c18柱時，粗提液過層析柱后，可先采用30％乙醇洗脫后，用3～5倍柱體積60％～80％乙醇洗脫，收集60％～80％乙醇洗脫的洗脫液進行濃縮干燥。所述30％乙醇的洗脫體積為2～3倍柱體積，此部分洗脫液棄去。

17、最優(yōu)選的，所述層析柱為hpd100大孔樹脂柱。

18、所述步驟(2)中，優(yōu)選采用堿性溶液調(diào)節(jié)ph值，所述堿性溶液包括氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液。加入堿性溶液調(diào)節(jié)ph值后，還可加水至總體積為常春藤葉投料量的5～12倍(體積質(zhì)量比)。

19、所述氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液的濃度優(yōu)選3～8％，更優(yōu)選為5％。

20、所述堿性溶液的體積用量優(yōu)選為常春藤葉投料量0.2倍～0.4倍，優(yōu)選0.2～0.3倍，更優(yōu)選0.3倍。

21、更優(yōu)選的，所述堿性溶液中的氫氧化鈉或氫氧化鉀的質(zhì)量為常春藤葉投料量的1～2％。

22、所述常春藤包括洋常春藤(西洋常春藤hederahelixl.)、中華常春藤(尼泊爾常春藤hedera?nepalensis)、加拿利常春藤(hedera?canariensis)、革葉常春藤(hederacolchica)和日本常春藤(菱葉常春藤hederarhombea)等多種藥材原料。其中洋常春藤以及中華常春藤用于藥物治療較多。

23、本發(fā)明還提供按上述制備方法制得的常春藤提取物。

24、進一步，所述常春藤提取物包括α-常春藤皂苷、常春藤皂苷c、常春藤皂苷b和常春藤皂苷d，且α-常春藤皂苷、常春藤皂苷c、常春藤皂苷b和常春藤皂苷d的總質(zhì)量分數(shù)大于50％。

25、進一步，所述常春藤提取物中，所述α-常春藤皂苷的質(zhì)量含量大于10％，常春藤皂苷c的質(zhì)量含量大于30％，所述常春藤皂苷b的質(zhì)量含量大于2％，常春藤皂苷d的質(zhì)量含量大于1％。

26、本發(fā)明還提供所述常春藤提取物在制備治療或預(yù)防急性支氣管炎藥物中的應(yīng)用。

27、本發(fā)明還提供所述常春藤提取物在制備祛痰、鎮(zhèn)咳藥物中的應(yīng)用。

28、本發(fā)明還提供一種治療或預(yù)防急性支氣管炎藥物，包括所述常春藤提取物。

29、本發(fā)明還提供一種祛痰、鎮(zhèn)咳藥物，包括所述常春藤提取物。

30、本發(fā)明的有益效果在于：

31、本發(fā)明通過對制備工藝進行優(yōu)化，富集了常春藤原料中的抗炎成分，并且明確了特定成分含量的常春藤提取物具有較好的藥效。本發(fā)明獲得提取物中得率增加、皂苷含量有所降低，但所得提取物的抗炎效果更好，取得了預(yù)料不到的技術(shù)效果。本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)一味提高皂苷含量的技術(shù)偏見，在簡化洗脫程序的基礎(chǔ)上獲得了一種抗炎效果更好，得率更高的常春藤提取物，更利于口服溶液制劑的開發(fā)，減少增溶劑的使用。本發(fā)明可有效富集洋常春藤葉提取物中的抗炎成分，提取物的抗炎活性增加，因此同重量生藥量下抗炎效果更佳，有利于降低服用量，提高了原料藥物的經(jīng)濟效益和利用率。