本發(fā)明屬于獸藥，具體涉及一種蛋禽用水溶性桂枝揮發(fā)油溶液及其制備方法和應用。

背景技術：

1、腸炎、輸卵管炎是在家禽養(yǎng)殖，特別是蛋雞養(yǎng)殖的過程中繞不開的兩座大山，一年四季都可發(fā)生，但以夏季發(fā)病率最高。而炎癥多發(fā)于飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生差、管理水平低的雞場。導致家禽腸炎和輸卵管炎的致病因素很多，細菌感染常被作為引發(fā)的主要因素，呈全世界流行，臨床以大腸桿菌、沙門氏菌、魏氏梭菌等感染最為常見，對養(yǎng)殖業(yè)危害較大。該病多由致病菌經(jīng)口腔而感染，當飼料或飲水中微生物含量超標時便容易發(fā)生。

2、細菌性腸炎發(fā)生后，病雞通常會表現(xiàn)精神不振、呆立、雙翅下垂、閉眼縮頸、不愿走動等，隨著發(fā)病時間增長，會出現(xiàn)消瘦，雞冠蒼白，采食量下降，拉水樣稀便或者飼料樣糞便，嚴重的會拉深褐色或者紅色胡蘿卜樣的糞便。細菌感染后一方面會降低機體對營養(yǎng)的吸收，破壞腸絨毛表面，減少絨毛吸收養(yǎng)分的表面積，造成營養(yǎng)缺乏和飼料的浪費，阻礙雞群正常生產(chǎn)，蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋重、蛋品質均會受到嚴重影響。另一方面影響雞群腸道的免疫功能，增加病毒感染概率，造成大量死淘。

3、細菌性輸卵管炎在蛋雞中發(fā)生概率很高，輕者表現(xiàn)不明顯；嚴重者呆立，雙翅下垂，企鵝狀站立；蛋雞無產(chǎn)蛋高峰，蛋殼質量差，薄殼蛋、軟殼蛋、砂皮蛋增多，蛋殼上常帶血跡；肛門紅腫，從泄殖腔內(nèi)排出輸卵管內(nèi)的黃、白色膿樣分泌物，污染肛門周邊羽毛；翻肛檢查，輸卵管口有條狀或點狀、紫紅色出血。輸卵管發(fā)炎后主要危害為卵泡發(fā)育不規(guī)律，導致產(chǎn)蛋性能的下降和產(chǎn)蛋周期的延長。輸卵管炎還會導致蛋白分泌的減少，造成雞蛋小、蛋重輕，影響?zhàn)B殖經(jīng)濟效益。此外還能引起腹膜炎和呼吸道癥狀的繼發(fā)感染。

4、據(jù)大數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示，全球約76.1％的雞群會發(fā)生腸炎或輸卵管炎，細菌性腸炎導致家禽養(yǎng)殖業(yè)年損失超過20億元，輸卵管炎影響蛋雞每個生產(chǎn)周期損失36.46元/只，因此采取有效防控措施，應對雞群越來越嚴重的細菌性感染具有重要意義。

5、目前藥物治療主要以抗生素為主，細菌性腸炎主要使用氨基糖苷類藥物如慶大霉素、新霉素阿米卡星、安普霉素等；喹諾酮類藥物恩諾沙星，甲硝唑；細菌性卵管炎則主要使用大觀霉素、鹽酸林可霉素、多西環(huán)素、阿莫西林、恩諾沙星，環(huán)丙沙星、左氧氟沙星；頭孢克洛等頭孢菌素類。對于處于產(chǎn)蛋期的蛋雞，多種常規(guī)抗生素使用均會受到嚴格限制，直接影響生產(chǎn)效益；另一方面，抗生素的過量使用導致耐藥性普遍升高，長此以往，常規(guī)治療方案的有效率會大打折扣，增加養(yǎng)殖成本。因此，亟待開發(fā)具有高抑菌活性的抗生素替代藥物用于腸炎/輸卵管炎防控。

6、近年來，植物精油因其高抑菌活性被廣泛關注，其是以植物根、莖、葉、花和果實等為原料，通過水蒸氣蒸餾、溶劑提取和超臨界co2流體萃取等方法提取出來的活性物質，其具有一定芳香氣味，代表成分如百里香酚、香芹酚、肉桂醛等。肉桂醛為桂枝中提取的揮發(fā)油中主要成分，其被作為天然的抗菌物質，具有無殘留、無抗藥性的特點，對動物機體健康、提高生產(chǎn)性能有非常明顯的效果。例如，已有專利公開了一種飼料用抗菌促生長復合添加劑及其制造方法和應用，其原料中包含肉桂油和百里香酚20％～30％，對常見革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均具有較強抑菌殺菌作用，對畜禽有顯著防病、促生長作用，可以有效替代養(yǎng)殖過程中使用的抗生素。也有專利公開了一種用于抑制肉鴿常見病原菌的精油，其中肉桂精油也表現(xiàn)出對禽常見致病菌(大腸桿菌、沙門氏菌等)均有較強抑菌活性。

7、通過對現(xiàn)有技術的分析后發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)已公開的專利中均是直接購買的桂枝揮發(fā)油原料，一方面對其來源不清晰，另一方面也很難控制使用成本，而桂枝揮發(fā)油的提取純化工藝鮮有報道；另一方面按照專利公開的精油配方制備后，模擬臨床使用很難完全水溶形成澄清溶液，對于蛋禽規(guī)?；B(yǎng)殖場的應用造成很大困難。針對這些問題，迫切需要開發(fā)一種性價比高、得率高的桂枝揮發(fā)油提取工藝，并對提取后的桂枝揮發(fā)油進行乳化配制，讓其迅速水溶實現(xiàn)水線給藥成為現(xiàn)實，既能夠控制產(chǎn)品成本，又能滿足實際養(yǎng)殖生產(chǎn)工作的需要，對推動產(chǎn)蛋期腸炎/輸卵管炎治療具有重要意義。

8、因此，特提出本技術。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在至少解決上述現(xiàn)有技術中存在的技術問題之一。為此，本發(fā)明提出一種蛋禽用水溶性桂枝揮發(fā)油溶液及其制備方法，能夠用于防治蛋禽腸炎/輸卵管炎，臨床應用預防效果明顯，治療起效快、治愈率高，且對生產(chǎn)無明顯副作用。

2、本發(fā)明第一方面的目的，在于提供一種水溶性桂枝揮發(fā)油溶液。

3、本發(fā)明第二方面的目的，在于提供本發(fā)明第一方面的水溶性桂枝揮發(fā)油溶液的制備方法。

4、本發(fā)明第三方面的目的，在于提供一種藥物。

5、本發(fā)明第四方面的目的，在于提供本發(fā)明第一方面的水溶性桂枝揮發(fā)油溶液和/或本發(fā)明第三方面的藥物的應用。

6、本發(fā)明第五方面的目的，在于提供一種產(chǎn)品。

7、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術方案是：

8、本發(fā)明的第一個方面，提供一種水溶性桂枝揮發(fā)油溶液，包括以下組分：桂枝揮發(fā)油、防腐劑、乳化劑、助乳化劑和抗氧化劑。

9、在本發(fā)明一些實施方式中，按質量份計，所述水溶性桂枝揮發(fā)油溶液包括桂枝揮發(fā)油8～20份、防腐劑0.01～0.5份、乳化劑20～37份、助乳化劑20～45份和抗氧化劑0.0001～0.7份。

10、在本發(fā)明一些優(yōu)選實施方式中，按質量份計，所述水溶性桂枝揮發(fā)油溶液包括桂枝揮發(fā)油8～15份、防腐劑0.01～0.1份、乳化劑20～30份、助乳化劑20～35份和抗氧化劑0.0001～0.7份。

11、在本發(fā)明一些實施方式中，所述乳化劑包括吐溫，更優(yōu)選地，所述乳化劑包括聚氧乙烯氫化蓖麻油或聚氧乙烯硬脂酸酯；最佳地，所述乳化劑為聚氧乙烯氫化蓖麻油。

12、在本發(fā)明一些實施方式中，所述助乳化劑包括聚甘油酯、甘油、乙二醇、二乙二醇單乙醚中至少一種；優(yōu)選所述助乳化劑為聚甘油酯和二乙二醇單乙醚。

13、在本發(fā)明一些實施方式中，所述抗氧化劑包括二丁基羥基甲苯、亞硫酸氫鈉、叔丁基對苯二酚中至少一種。

14、在本發(fā)明一些優(yōu)選實施方式中，所述抗氧化劑包括二丁基羥基甲苯、亞硫酸氫鈉和叔丁基對苯二酚中至少兩種。

15、在本發(fā)明一些更優(yōu)選實施方式中，所述抗氧化劑為二丁基羥基和亞硫酸氫鈉的組合。

16、在本發(fā)明一些實施方式中，所述水溶性桂枝揮發(fā)油溶液包括桂枝揮發(fā)油10～12份、聚甘油酯10～12份、聚氧乙烯氫化蓖麻油20～25份、二乙二醇單乙醚11～15份、檸檬酸0.03～0.08份、二丁基羥基甲苯0.01～0.15份和亞硫酸氫鈉0.15～0.25份。

17、在本發(fā)明一些實施方式中，所述水溶性桂枝揮發(fā)油溶液還包括水10～15份。

18、在本發(fā)明一些實施方式中，所述桂枝揮發(fā)油由包括以下方法制備得到：

19、對桂枝水溶液進行復合酶酶解處理，收集酶解液；

20、使用超臨界co2萃取法與溶劑法或蒸餾法對酶解液進行提取，濃縮，即得到桂枝揮發(fā)油。

21、在本發(fā)明一些實施方式中，所述復合酶的添加量為桂枝質量的2％～4％。

22、在本發(fā)明一些實施方式中，所述復合酶的添加量為桂枝質量的3％。

23、在本發(fā)明一些實施方式中，所述復合酶包括纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和木聚糖酶。

24、在本發(fā)明一些實施方式中，所述纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和木聚糖酶的酶活力為8～15萬u/g。

25、在本發(fā)明一些實施方式中，所述纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和木聚糖酶的酶活力分別為9萬u/g、10萬u/g、9萬u/g和12萬u/g。

26、在本發(fā)明一些實施方式中，所述纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和木聚糖酶的質量比為0.5～2:1:0.5～3:1～2。

27、在本發(fā)明一些優(yōu)選實施方式中，所述纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和木聚糖酶的質量比為0.5～2:1:0.5～3:1～2。

28、在本發(fā)明一些優(yōu)選實施方式中，所述纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和木聚糖酶的質量比為1～2:1:2～3:1。

29、在本發(fā)明一些更優(yōu)選實施方式中，所述纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和木聚糖酶的質量比為1:1:2:1。

30、在本發(fā)明一些實施方式中，所述復合酶酶解處理的條件為ph值4.5～5.5，水分30％～40％，溫度45℃～50℃，時間0.5h～2h。

31、在本發(fā)明一些優(yōu)選實施方式中，所述復合酶酶解處理的條件為ph值4.5～5.0，水分35％～40％，溫度45℃～48℃，時間1h～1.5h。

32、在本發(fā)明一些更優(yōu)選實施方式中，所述復合酶酶解處理的條件為ph值4.6～4.8，水分35％～40％，溫度45℃～48℃，時間0.5h～1.5h。

33、在本發(fā)明一些實施方式中，所述超臨界co2萃取的條件為萃取壓力25～35mpa、萃取溫度40～45℃、萃取時間為0.5～3h、co2流量為20～25l/h。

34、在本發(fā)明一些優(yōu)選實施方式中，所述超臨界co2萃取的條件為萃取壓力25～30mpa、萃取溫度40～45℃、萃取時間為1～3h、co2流量為20～25l/h。

35、在本發(fā)明一些更優(yōu)選實施方式中，所述超臨界co2萃取的條件為萃取壓力28～30mpa、萃取溫度41～43℃、萃取時間為1～2h、co2流量為23～25l/h。

36、在本發(fā)明一些實施方式中，所述溶劑法中的溶劑為乙醇。

37、在本發(fā)明一些實施方式中，所述溶劑法的條件為乙醇濃度為50％～70％、乙醇用量為藥材重量的10～20倍，提取時間為1～3h。

38、在本發(fā)明一些優(yōu)選實施方式中，所述溶劑法的條件為乙醇濃度為60％～70％、乙醇用量為藥材重量的10～15倍，提取時間為1～2h。

39、在本發(fā)明一些更優(yōu)選實施方式中，所述溶劑法的條件為乙醇濃度為60％～70％、乙醇用量為藥材重量的10～12倍，提取時間為1～2h。

40、在本發(fā)明一些實施方式中，所述蒸餾法的條件為蒸餾溫度88～100℃，蒸餾時間為3～5h。

41、在本發(fā)明一些實施方式中，使用超臨界co2萃取法與溶劑法或蒸餾法對所述酶解液進行提取，濃縮，即得到桂枝揮發(fā)油。

42、在本發(fā)明一些實施方式中，所述濃縮可使用包括但不限于真空濃縮、減壓濃縮等常規(guī)方法進行濃縮。

43、本發(fā)明通過復合酶酶解聯(lián)合超臨界co2萃取技術能夠更大限度促進桂枝揮發(fā)油的提取和收集。

44、在本發(fā)明一些實施方式中，所述水溶性桂枝揮發(fā)油溶液的粒徑10～80nm。

45、本發(fā)明的第二個方面，提供本發(fā)明第一方面的水溶性桂枝揮發(fā)油溶液的制備方法，包括以下步驟：

46、將抗氧劑、防腐劑和助乳化劑混合，得到混合溶液a；

47、混合溶液a與乳化劑混合，得到混合溶液b；

48、混合溶液b與桂枝揮發(fā)油和水混合，乳化，即得到水溶性桂枝揮發(fā)油溶液。

49、在本發(fā)明一些實施方式中，所述乳化的條件為壓力15000psi～80000psi，溫度35℃～45℃，乳化時間10～70min。

50、在本發(fā)明一些實施方式中，所述乳化的條件為壓力30000psi～70000psi，溫度35℃～45℃，乳化時間30～60min。

51、在本發(fā)明一些實施方式中，所述乳化的條件為壓力55000psi～60000psi，溫度35℃～45℃，乳化時間30～50min。

52、本發(fā)明的第三個方面，提供一種藥物，包括本發(fā)明第一方面的水溶性桂枝揮發(fā)油溶液。

53、在本發(fā)明一些實施方式中，所述藥物包括藥學上可用的輔料。

54、在本發(fā)明一些實施方式中，所述藥學可接受的輔料包括填充劑、崩解劑、稀釋劑、分散劑、賦形劑、穩(wěn)定劑、潤滑劑、粘合劑、濕潤劑、矯味劑、助懸劑、溶劑、緩釋劑、乳化劑、吸收促進劑、表面活性劑、防腐劑、色素、香精和溶劑中的至少一種。

55、在本發(fā)明一些實施方式中，所述填充劑選自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素或葡萄糖等；所述粘合劑選自纖維素衍生物、藻酸鹽、淀粉、水、糊精、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等；所述崩解劑選自微晶纖維素、羥甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素或交聯(lián)羥甲基纖維素鈉；所述潤滑劑選自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸鈣、碳酸氫鈉、微粉硅膠、滑石粉或硬脂酸鎂：所述助懸劑選自微粉硅膠、蜂蠟、纖維素、固態(tài)聚乙二醇：所述潤濕劑選自甘油、聚氧乙烯硬脂酸酯、氫化蓖麻油或卵磷脂：所述溶劑選自液態(tài)聚乙二醇、異丙醇、聚氧乙烯硬脂酸酯、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油選自大豆油、蓖麻油、花生油、調(diào)和油等：所述表面活性劑選自十二烷基苯磺酸鈉、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨(吐溫)等：所述矯味劑選自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、甜菊素、安賽蜜、檸檬酸或糖精鈉；所述防腐劑選自對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯中的至少一種。

56、在本發(fā)明一些實施方式中，所述藥物的劑型選自片劑(如普通片劑、雙層片劑、多層片劑、緩釋片劑、單室控釋片劑、雙室控釋片劑、微孔型控釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片)、丸劑、粉劑、混懸劑、凝膠、乳液、乳膏、顆粒劑、納米顆粒、膠囊(如普通膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的ph依賴型膠囊、胃腸復合膠囊)、栓劑、注射劑、噴霧和針劑。

57、本發(fā)明的第四個方面，提供本發(fā)明第一方面的水溶性桂枝揮發(fā)油溶液和/或本發(fā)明第三方面的藥物在(1)～(9)中至少一種中的應用：

58、(1)制備預防和/或治療雞腸炎的產(chǎn)品；

59、(2)制備預防和/或治療雞輸卵管炎的產(chǎn)品；

60、(3)制備預防和/或治療大腸桿菌感染引發(fā)的疾病的產(chǎn)品；

61、(4)制備預防和/或治療沙門氏菌感染引發(fā)的疾病的產(chǎn)品；

62、(5)制備預防和/或治療梭菌感染引發(fā)的疾病的產(chǎn)品；

63、(6)制備預防和/或治療具有沙殼蛋、薄殼蛋、臟蛋臨床癥狀的蛋雞的產(chǎn)品；

64、(7)制備提高蛋雞產(chǎn)蛋率、正品蛋率、蛋品質的產(chǎn)品；

65、(8)抑菌；

66、(9)制備抑菌產(chǎn)品。

67、在本發(fā)明一些實施方式中，(8)和(9)中的菌包括金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、大腸桿菌、梭菌中至少一種。

68、在本發(fā)明一些實施方式中，(1)和(2)中所述雞包括蛋雞。

69、本發(fā)明的第五個方面，提供一種產(chǎn)品，包括本發(fā)明第一方面的水溶性桂枝揮發(fā)油溶液或本發(fā)明第三方面的藥物。

70、在本發(fā)明一些實施方式中，所述產(chǎn)品包括但不限于試劑、試劑盒和藥物。

71、本發(fā)明的有益效果是：

72、本發(fā)明中的水溶性桂枝揮發(fā)油溶液具有較強體外抑菌功效，能夠有效防治蛋禽腸炎和輸卵管炎，改善臨床稀糞癥狀，減少輸卵管炎引起的沙殼蛋、軟殼蛋等，提升正品蛋率，延長產(chǎn)蛋高峰。

73、本發(fā)明對桂枝揮發(fā)油進行了高壓均質乳化處理，實現(xiàn)桂枝揮發(fā)油具有水溶性，更加便捷用于臨床養(yǎng)殖中的水線給藥，更容易被養(yǎng)殖戶接受，尤其是在產(chǎn)蛋期發(fā)揮對抗生素替代性的抗菌消炎作用，保障蛋禽養(yǎng)殖經(jīng)濟效益。