本發(fā)明涉及癌癥免疫治療，特別涉及一種用于激活和上調(diào)機(jī)體免疫細(xì)胞活性的化合物、治療肺癌的組合物及其制備方法與使用方法。

背景技術(shù)：

1、免疫療法是癌癥治療的一種有前途的方法，開創(chuàng)了治療的新時代。然而，由于實體腫瘤微環(huán)境(tumor?microenvironment，tme)的免疫抑制性質(zhì)，免疫療法作為肺癌患者的單一療法的療效仍然有限。為了應(yīng)對這一挑戰(zhàn)，需要能夠增強(qiáng)宿主免疫力的替代藥物。

2、免疫檢查點抑制劑(immune?checkpoint?inhibitors，icis)程序性細(xì)胞死亡蛋白-1(pd-1)和細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白-4(ctla-4)等免疫檢查點抑制劑的出現(xiàn)，開創(chuàng)了抗腫瘤治療的新時代。在過去十年中，icis，尤其是pd-1軸抑制劑，徹底改變了肺癌治療，成為不可或缺的治療工具。然而，icis的臨床反應(yīng)率仍然令人失望的低，肺癌患者的平均反應(yīng)率僅為15％。造成這種有限反應(yīng)的因素有幾個，包括腫瘤負(fù)荷、微衛(wèi)星穩(wěn)定性、程序性細(xì)胞死亡配體-1(pd-l1)的表達(dá)和t細(xì)胞浸潤。對icis治療的耐藥性也帶來了重大挑戰(zhàn)。

3、此外，腫瘤微環(huán)境(tme)的免疫抑制性質(zhì)對免疫療法的效力構(gòu)成了重大挑戰(zhàn)。tme是一個復(fù)雜的細(xì)胞和分子網(wǎng)絡(luò)，它不僅支持腫瘤的生長和存活，還通過多種機(jī)制抑制免疫細(xì)胞的功能。例如，tme中的免疫檢查點分子、基質(zhì)細(xì)胞和其他因素可以共同作用，限制免疫細(xì)胞對腫瘤的攻擊，導(dǎo)致免疫逃逸、免疫耐受或免疫逆轉(zhuǎn)現(xiàn)象。

4、為了克服這些障礙，研究人員一直在探索新的藥物和治療策略。一些策略包括使用干擾素基因刺激劑(sting)激動劑、toll樣受體(tlr)激動劑，以及細(xì)胞免疫療法，如嵌合抗原受體t細(xì)胞(car-t)療法。這些方法旨在激活或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對腫瘤的響應(yīng)，但實體腫瘤的復(fù)雜性和tme的免疫抑制特性使得這些治療手段的有效性受限。

5、本發(fā)明正是在這一背景下提出的，旨在提供一種新的組合物和治療方法，通過結(jié)合傳統(tǒng)中藥成分麥冬皂苷-d(op-d)和pd-1抗體，以期增強(qiáng)宿主的抗腫瘤免疫反應(yīng)，提高肺癌治療的療效，特別是對那些對現(xiàn)有免疫療法反應(yīng)不佳的患者。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供一種用于激活和上調(diào)機(jī)體免疫細(xì)胞活性的化合物、治療肺癌的組合物及其制備方法與使用方法。

2、其中麥冬皂苷－d(op－d)是從麥冬中提取的一種免疫活性物質(zhì)。研究表明，特定比例的麥冬與人參共煮可促進(jìn)骨髓和外周血細(xì)胞增殖，提高胸腺指數(shù)，減輕化療引起的骨髓抑制。此外，作為疫苗佐劑，op－d可以增強(qiáng)針對抗原的抗體反應(yīng)。在抗原刺激下，op－d可以顯著增加小鼠脾細(xì)胞中th1細(xì)胞因子(ifn－γ，il－12p40)，th2細(xì)胞因子(il－4)和th17細(xì)胞因子(il－17a)的范圍。

3、本研究旨在探索op－d作為免疫治療劑在肺癌治療中提高抗腫瘤療效的潛力，并檢驗其刺激免疫系統(tǒng)的潛在機(jī)制。

4、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種用于激活和上調(diào)機(jī)體免疫細(xì)胞活性的化合物，其特征在于，該化合物為麥冬皂苷-d，用于誘導(dǎo)免疫細(xì)胞活化標(biāo)志物cd25和cd69的表達(dá)；所述麥冬皂苷-d的結(jié)構(gòu)式如下：

5、

6、本發(fā)明還提供一種用于治療肺癌的組合物，所述組合物包括麥冬皂苷－d和pd－1抗體；其中，麥冬皂苷－d作為有效成分，用于激活和上調(diào)機(jī)體免疫細(xì)胞活性；抗pd－1抗體，用于與麥冬皂苷－d協(xié)同作用，增強(qiáng)宿主的免疫反應(yīng)。

7、優(yōu)選地，所述麥冬皂苷－d是從麥冬屬植物的根中提取得到，pd－1抗體是一種特異性結(jié)合程序性細(xì)胞死亡蛋白－1的單克隆抗體。

8、優(yōu)選地，所述麥冬皂苷-d在激活t細(xì)胞時，激活t細(xì)胞和上調(diào)免疫細(xì)胞活化標(biāo)志物cd69和cd25的表達(dá)，誘導(dǎo)t細(xì)胞分泌細(xì)胞因子干擾素-γ(ifn-γ)和腫瘤壞死因子α(tnf-α)同時能夠刺激白介素-6以及趨化因子cxcl9-11的產(chǎn)生。

9、優(yōu)選地，所述麥冬皂苷-d通過sting信號通路激活免疫細(xì)胞；

10、優(yōu)選地，所述麥冬皂苷-d能引起鈣內(nèi)流和活化t細(xì)胞核因子(nfat)及stat5的核轉(zhuǎn)位。

11、本發(fā)明提供一種評估麥冬皂苷-d(op-d)對宿主免疫細(xì)胞功能影響的方法，該方法包括如下步驟：

12、步驟s1：將宿主的免疫細(xì)胞與麥冬皂苷－d共同培養(yǎng)；

13、步驟s2：測量共同培養(yǎng)后的免疫細(xì)胞中cd69和cd25的表達(dá)水平；

14、步驟s3：測量麥冬皂苷－d處理后的免疫細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化，nfat和stat5的核轉(zhuǎn)位情況。

15、本發(fā)明提供一種組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

16、步驟a：提取麥冬屬植物根中的麥冬皂苷－d；

17、步驟b：生產(chǎn)或采購pd－1抗體；

18、步驟c：將op－d和pd－1抗體按照特定的比例混合形成組合物。

19、本發(fā)明還提供一種使用所述的組合物的方法，用于治療肺癌，該方法包括以下步驟：

20、步驟x1：將op－d(5－10mg/kg)和抗pd－1抗體(10mg/kg)進(jìn)行組合，形成治療所需的組合物；

21、步驟x2：通過靜脈注射、皮下注射或肌肉注射的方式將組合物施用于患者，以增強(qiáng)其對腫瘤的免疫反應(yīng)；

22、步驟x3：監(jiān)測患者的免疫反應(yīng)和腫瘤生長情況，以評估治療效果。

23、優(yōu)選地，所述步驟x1中的op－d和抗pd－1抗體的特定比例是根據(jù)患者體內(nèi)免疫細(xì)胞活化標(biāo)志物cd69和cd25的表達(dá)水平確定。

24、在本發(fā)明中，已確定麥冬根中提取的免疫活性物質(zhì)麥冬皂苷－d(op－d)是增強(qiáng)抗原特異性免疫反應(yīng)并與抗腫瘤免疫療法產(chǎn)生協(xié)同作用的潛在候選藥物。體外實驗表明，op－d可激活t細(xì)胞并上調(diào)免疫細(xì)胞活化標(biāo)志物的表達(dá)：cd69和cd25，誘導(dǎo)t細(xì)胞分泌ifn－γ和tnf－α，此外，op－d還能刺激細(xì)胞因子il－6以及趨化因子分子cxcl9－11的產(chǎn)生。體內(nèi)實驗表明，op－d與抗pd－1療法相結(jié)合具有顯著的協(xié)同作用。這種組合增強(qiáng)了宿主的免疫反應(yīng)，并創(chuàng)造了抑制腫瘤生長的免疫微環(huán)境?？傮w而言，本發(fā)明的研究結(jié)果凸顯了op－d作為免疫反應(yīng)增強(qiáng)劑的潛力，以及抗腫瘤免疫療法的有希望的補(bǔ)充，為肺癌的更好治療結(jié)果鋪平了道路。

25、采用本發(fā)明的技術(shù)方案，具有以下有益效果：

26、本發(fā)明能增強(qiáng)免疫反應(yīng)：組合物中的麥冬皂苷-d(op-d)能夠有效激活t細(xì)胞，上調(diào)免疫細(xì)胞活化標(biāo)志物cd69和cd25的表達(dá)，從而增強(qiáng)宿主的免疫反應(yīng)。

27、本發(fā)明能促進(jìn)細(xì)胞因子產(chǎn)生：op-d能夠刺激干擾素-γ(ifn-γ)、白介素-6(il-6)以及趨化因子cxcl9-11的產(chǎn)生，這些細(xì)胞因子對調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)至關(guān)重要。

28、本發(fā)明能激活sting信號通路：op-d通過sting信號通路激活免疫細(xì)胞，該通路在細(xì)胞對病原體和腫瘤細(xì)胞的先天免疫反應(yīng)中起著核心作用。

29、本發(fā)明能促進(jìn)鈣內(nèi)流和轉(zhuǎn)錄因子核轉(zhuǎn)位：op-d誘導(dǎo)的鈣內(nèi)流和nfat及stat5的核轉(zhuǎn)位有助于激活t細(xì)胞，增強(qiáng)其對腫瘤細(xì)胞的識別和應(yīng)答。

30、本發(fā)明能協(xié)同增效：op-d與pd-1抗體聯(lián)合使用時，op-d顯示出協(xié)同效應(yīng)，可能提高免疫檢查點抑制劑的療效，尤其對那些對單獨pd-1抗體治療反應(yīng)不佳的肺癌患者。

31、本發(fā)明的組合物和治療方法為肺癌患者提供了一種新的治療選擇，尤其是對于那些需要更有效治療方案的患者。

32、本發(fā)明易于制備和施用：組合物的制備方法簡單、成本效益高，且施用方法(靜脈注射、皮下注射或肌肉注射)為臨床應(yīng)用提供了便利。

33、本發(fā)明通過將傳統(tǒng)中藥成分與現(xiàn)代免疫治療技術(shù)相結(jié)合，為癌癥免疫治療領(lǐng)域提供了新的見解和治療方法；通過結(jié)合傳統(tǒng)中藥成分麥冬皂苷-d(op-d)和pd-1抗體，以期增強(qiáng)宿主的抗腫瘤免疫反應(yīng)，提高肺癌治療的療效，特別是對那些對現(xiàn)有免疫療法反應(yīng)不佳的患者。