1.一種重組非洲豬瘟弱毒疫苗,其特征在于,所述疫苗包括促凋亡基序缺失的p54蛋白,所述促凋亡基序缺失的p54蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.4所示。
2.一種重組非洲豬瘟弱毒疫苗的制備方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:
3.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟1還包括:所述p54蛋白由e183l基因編碼,所述e183l基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示,所述敲除的e183l基因序列為asfvgz分離株全基因組序列162311-162355和162251-162355的核苷酸序列。
4.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述敲除還包括:將所述p54蛋白第150-164位氨基酸或150-184位氨基酸的基因片段上下游序列各1200bp作為同源重組同源臂、asfvp72啟動(dòng)子和gfp基因的pcr片段通過融合pcr試劑盒克隆至puc19載體,其中所述gfp基因在所述asfvp72晚期啟動(dòng)子的控制下進(jìn)行表達(dá)。
5.如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述同源重組同源臂包括左臂和右臂,所述左臂核苷酸序列如seq?id?no.2所示;所述右臂核苷酸序列如seq?id?no.3所示。
6.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟2還包括:
7.如權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,所述轉(zhuǎn)染的還包括將2μg的所述p72gfp-p54△dbm或p72gfp-p54△ctm轉(zhuǎn)染至所述pam細(xì)胞;所述轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h,所述感染的劑量為1moi,所述感染后的時(shí)間為24h。
8.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟2還包括通過常規(guī)pcr程序?qū)χ亟M病毒的純度進(jìn)行評(píng)估和鑒定,使用的引物為p54-check-f和p54-check-r;所述p54-check-f序列為:5'-gttttgatgcatttagatacca-3';所述p54-check-r序列為:5'-caacatactgttgtatattataag-3'。
9.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述asfv?gz病毒全長(zhǎng)序列見genbank登錄號(hào):mt496893.1。
10.如權(quán)利要求1所述的重組非洲豬瘟弱毒疫苗在預(yù)防非洲豬瘟的應(yīng)用。