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      一種重組非洲豬瘟弱毒疫苗及其制備方法和應(yīng)用

      文檔序號(hào):40395088發(fā)布日期:2024-12-20 12:18閱讀:來源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種重組非洲豬瘟弱毒疫苗,其特征在于,所述疫苗包括促凋亡基序缺失的p54蛋白,所述促凋亡基序缺失的p54蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.4所示。

      2.一種重組非洲豬瘟弱毒疫苗的制備方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:

      3.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟1還包括:所述p54蛋白由e183l基因編碼,所述e183l基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示,所述敲除的e183l基因序列為asfvgz分離株全基因組序列162311-162355和162251-162355的核苷酸序列。

      4.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述敲除還包括:將所述p54蛋白第150-164位氨基酸或150-184位氨基酸的基因片段上下游序列各1200bp作為同源重組同源臂、asfvp72啟動(dòng)子和gfp基因的pcr片段通過融合pcr試劑盒克隆至puc19載體,其中所述gfp基因在所述asfvp72晚期啟動(dòng)子的控制下進(jìn)行表達(dá)。

      5.如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述同源重組同源臂包括左臂和右臂,所述左臂核苷酸序列如seq?id?no.2所示;所述右臂核苷酸序列如seq?id?no.3所示。

      6.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟2還包括:

      7.如權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,所述轉(zhuǎn)染的還包括將2μg的所述p72gfp-p54△dbm或p72gfp-p54△ctm轉(zhuǎn)染至所述pam細(xì)胞;所述轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h,所述感染的劑量為1moi,所述感染后的時(shí)間為24h。

      8.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟2還包括通過常規(guī)pcr程序?qū)χ亟M病毒的純度進(jìn)行評(píng)估和鑒定,使用的引物為p54-check-f和p54-check-r;所述p54-check-f序列為:5'-gttttgatgcatttagatacca-3';所述p54-check-r序列為:5'-caacatactgttgtatattataag-3'。

      9.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述asfv?gz病毒全長(zhǎng)序列見genbank登錄號(hào):mt496893.1。

      10.如權(quán)利要求1所述的重組非洲豬瘟弱毒疫苗在預(yù)防非洲豬瘟的應(yīng)用。


      技術(shù)總結(jié)
      本發(fā)明公開了一種重組非洲豬瘟弱毒疫苗及其制備方法和應(yīng)用,涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,疫苗包括促凋亡基序缺失的p54蛋白,由E183L基因編碼,核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示;缺失的促凋亡基序?yàn)锳SFV?GZ分離株全基因組序列162311?162355和162251?162355的核苷酸序列;其制備方法為:構(gòu)建同源重組載體和重組病毒ASFV?p54△DBM和ASFV?p54△CTM;該疫苗應(yīng)用于預(yù)防非洲豬瘟。本發(fā)明篩選出了p54蛋白發(fā)揮促凋亡功能的關(guān)鍵基序,構(gòu)建獲得了一種p54蛋白促凋亡基序敲除的重組ASFV對(duì)家豬的致病力顯著降低,能夠促進(jìn)宿主免疫反應(yīng),誘導(dǎo)高水平抗體。

      技術(shù)研發(fā)人員:陳鴻軍,劉英楠,李遙,劉靜宜,龔浪,張桂紅,王衡,李劼,謝振華,狄棟棟
      受保護(hù)的技術(shù)使用者:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所(中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心上海分中心)
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/12/19
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