本發(fā)明涉及藥物評價，尤其是涉及一種評價伊馬替尼及氨氯地平在胃腸道間質瘤體內的相互作用的方法。

背景技術：

1、胃腸間質瘤（gastrointestinal?stromal?tumors，?gist）是消化道最常見的間葉源性腫瘤，約占胃腸道腫瘤?0.3%~1%，且其發(fā)病率有年輕化趨勢。甲磺酸伊馬替尼（imatinib，?im）是一種酪氨酸酶?(tkis)抑制劑，作為靶向藥物應用于gist的臨床治療，對于完全切除的中高危gist患者以及不可切除、復發(fā)轉移或者晚期的gist患者，?取得了令人矚目的成就。研究表明，im作為口服小分子靶向藥物，不僅是肝細胞色素酶p450(cyp3a4）的底物，同時是cyp3a4、cyp2d6、cyp2c9和cyp2c19的抑制劑。因此影響肝臟cyp活性，將造成im體內濃度的顯著變化，從而引起嚴重的不良反應。

2、苯磺酸氨氯地平（amlodipine?besylate，aml）。aml，屬于第三代二氫吡啶類鈣通道阻滯劑，是全球應用最為廣泛的高血壓降壓藥物之一，同時也是冠心病治療中的一類常用藥物。aml具有水、脂雙重溶解特性，口服后6-12?h?達到血藥高峰濃度(8-12?ng/ml)，生物利用度為?64%-90%?，血漿半衰期長達30-50?h，在體內90%?aml經肝細胞色素p450(cyp3a4）介導代謝。通過世界衛(wèi)生組織（who）不良反應（adr）數(shù)據(jù)庫（http://www.vigiaccess.org/），目前全球范圍內im與aml聯(lián)合用藥發(fā)生藥物不良反應的報告，包含16份涉及因im和aml共同使用造成的嚴重不良反應，包括嚴重的全身水腫、惡心、以及器官感覺減退癥狀。因此，研究氨氯地平和伊馬替尼相互作用機制，有助于提高gist患者用藥安全性的同時，能極大促進臨床合理用藥、精準用藥，具有促進社會發(fā)展的作用。

3、目前，藥物相互作用（ddi）引起的im血藥濃度范圍的波動，現(xiàn)研究較為薄弱，目前全球范圍內僅有11項報道，且主要集中在cyp誘導劑（環(huán)磷酰胺、利福平、苯妥英）、cyp抑制劑（人參、酮康唑）、cyp底物（吉非替尼、舍曲林），p-gp底物（環(huán)孢素a）及p-gp激動劑（圣約翰草）等（見圖2，已發(fā)表）。因此，基于前期臨床發(fā)現(xiàn)及相關文獻報道，我們建立了一種評價im與aml相互作用的方法。該方法包括結合藥代動力學及代謝組學方式，并通過單次聯(lián)合用藥及長期連續(xù)性聯(lián)合用藥的雙模型進行評價。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明為解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種評價伊馬替尼及氨氯地平在胃腸道間質瘤體內的相互作用的方法，通過小鼠藥代動力學參數(shù)分析，為臨床合理評估人體伊馬替尼血藥濃度與藥代動力學特點通過了數(shù)據(jù)支持。

2、本發(fā)明采用的技術方案是：

3、一種評價伊馬替尼及氨氯地平在胃腸道間質瘤體內的相互作用的方法，包括：

4、s01、處理藥劑，并得到a藥劑和b藥劑；

5、s02、以雌性自發(fā)性高血壓的大鼠為給藥目標，并將給藥目標分為4組；

6、s03、給4組給藥目標分別灌胃純水、a藥劑、b藥劑以及a藥劑+b藥劑；

7、s04、給藥后取大鼠的尾靜脈血，并保存血漿；

8、s05、對血漿進行定性定量的藥代動力學分析以及藥物代謝組學分析，得到分析數(shù)據(jù)；

9、s06、導入藥代動力學分析得到的分析數(shù)據(jù)并計算2個藥劑在非房室模型中的主要藥代動力學參數(shù)，可知2個藥物會發(fā)生顯著的藥物相互作用；

10、s07、采集和處理藥物代謝組的原始數(shù)據(jù)，并對原始數(shù)據(jù)進行多變量分析，得到a藥劑與a藥劑+?b藥劑的共同代謝通路以及b藥劑與a藥劑+b藥劑的共同代謝通路；

11、s08、獲取2個藥物的結構，明確2個藥物相互作用的基因和蛋白；

12、s09、優(yōu)化2個藥物的結構，使得2個藥物之間形成氫鍵。

13、可選地，步驟s01的處理藥劑過程包括：

14、用純水+1%dmso溶解氨氯地平，得到a藥，且其濃度為0.4mg/ml；

15、用純水溶解伊馬替尼，得到b藥，且其濃度為12mg/ml。

16、可選地，對給藥目標進行單次給藥以及連續(xù)給藥；

17、其中，單次給藥：大鼠均在給藥前禁食12?h，灌胃給藥一次，取大鼠的尾靜脈血進行后續(xù)檢驗；

18、連續(xù)給藥：每組大鼠每天灌胃給藥一次，連續(xù)灌胃14天，期間正常飲食，于第14天時，取大鼠的尾靜脈血進行后續(xù)檢驗。

19、可選地，步驟s06中的具體步驟包括：

20、將步驟s04中得到的血漿放入離心管中，將離心管進行渦旋混合獲得樣品，將樣品進行離心并收集上清液，將上清液儲存在?-80℃環(huán)境中直至分析；將?is?工作溶液加入到每個血漿樣品中用于提取。渦流后進行混合，將混合物進行離心并收集上清液，對上清液進行定性定量分析，計算2個藥物在非房室模型中的主要藥代動力學參數(shù)；

21、a藥劑和b藥劑單次給藥后，a藥劑和b藥劑的藥時曲線下面積均增加；藥物半衰期均縮短；連續(xù)給藥后，a藥劑和b藥劑的auc的藥時曲線下面積均增加；藥物半衰期均延長，結果表明，單次給藥或多次給藥，兩個藥物均會發(fā)生顯著的藥物相互作用。

22、可選地，步驟s07中的藥物代謝組學分析得到的共同代謝通路包括：

23、a藥劑與a藥劑和b藥劑的共同代謝通路為苯丙氨酸代謝、原發(fā)性膽汁酸生物合成和嘌呤代謝比較；

24、b藥劑與a藥劑和b藥劑的共同代謝通路為甘油磷脂代謝、初級膽汁酸生物合成、苯丙氨酸代謝和嘌呤代謝。

25、可選地，步驟s08中通過pubchem得到依馬替尼和氨氯地平的結構，并利用swisstargetprediction數(shù)據(jù)庫得到伊馬替尼和氨氯地平對應的基因靶點，并對靶點命名進行統(tǒng)一，獲得靶點對應的基因名；

26、分析伊馬替尼和氨氯地平對應共同基因靶點；

27、利用string數(shù)據(jù)庫中提供的ppi的構建原理及蛋白質的作用信息，構建伊馬替尼和氨氯地平三維的基礎ppi網(wǎng)絡圖，并繪制藥物-成分-靶基因互作網(wǎng)絡。

28、可選地，根據(jù)藥物-成分-靶基因互作網(wǎng)絡明確伊馬替尼和氨氯地平藥物相互作用的基因和蛋白；

29、共計31個共同靶點存在于伊馬替尼和氨氯地平之間，相互作用的蛋白共計26個，相互作用的細胞內基因有30個，主要集中在溶質轉運體蛋白方面。

30、可選地，步驟s09中對伊馬替尼和氨氯地平的分子動力學模擬分析，具體包括以下步驟：

31、采用gaussian16和b3lyp/6-31g*優(yōu)化伊馬替尼和氨氯地平的結構，作為動力學模擬的初始結構；

32、使用算法進行結構的優(yōu)化和細化；

33、使用multiwfn25生成相應的resp2電荷；

34、使用sobtop生成配體的拓撲文件，并將am1-bcc電荷替換為resp2電荷；

35、使用packmol將8個伊馬替尼分子和8個氨氯地平分子裝入60??立方盒中，然后加入3600個spc水分子，溶質到盒子邊界的距離為10??。

36、可選地，在步驟s09中進行了兩次能量最小化：

37、第一次使用最陡下降法進行5000步，最小化約束值為300?kj/(mol/nm)；

38、第二次使用共軛梯度法進行5000步，最小化約束值為100?kj/(mol/nm)；

39、在能量最小化之后，進行模擬退火；

40、進行500?ps的npt模擬，然后進行50?ns的生產模擬；

41、在生產模擬中，v-rescale算法控制溫度，parrinello-rahman算法控制壓力，模擬步長為2?fs，靜電相互作用采用粒子網(wǎng)格ewald?(pme)算法，氫鍵約束采用lincs算法。

42、可選地，步驟s09中伊馬替尼和氨氯地平之間形成少量的氫鍵，支持在兩個藥物聚合過程中穩(wěn)定整個體系的氫鍵網(wǎng)絡的存在，證實兩個藥物之間具有自組裝聚集的能力。

43、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：

44、1、通過小鼠藥代動力學參數(shù)分析，為臨床合理評估人體伊馬替尼血藥濃度與藥代動力學特點通過了數(shù)據(jù)支持。

45、2、單劑量即成人一次使用完的劑量如注射劑，如成人用口服液為單劑量包裝等，但多劑量劑型多，特點是可反復取用，課題組對伊馬替尼和氨氯地平的單劑量給藥以及多劑量都進行了藥代動力學參數(shù)研究，提供了比較完備的臨床血藥濃度監(jiān)測參考。

46、3、藥代動力學的優(yōu)點：在于可充分模擬藥物在體內的藥物隨著時間變化的量化指標，有利于了解藥物在體內的具有作用時間和最大作用濃度。代謝組學的優(yōu)點：在于可以用于篩選藥物相互作用后的生物學標志物。網(wǎng)絡藥理學的優(yōu)點在于可以通過現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫預測藥物作用的靶點和蛋白，有助于提前鎖定藥物相互作用的靶點，明確深層機制。分子動力學模擬分析的優(yōu)點：在于可以通過藥物的化學鍵及空間結構模擬出藥物相互作用的鍵能及位點，有助于從分子層面明確藥物相互作用的原理。

47、4、四者進行聯(lián)合的優(yōu)點：在于藥代動力學實驗先從實踐的角度，證實二者相互作用；再以代謝組學的方法進一步明確二者相互作用的代謝通路和敏感性物質；網(wǎng)絡藥理學從已有數(shù)據(jù)闡明上述通路與藥物靶點的關系；分子動力學模擬從兩個藥物分子本身出發(fā)，明確其相互作用的基團、位點和鍵能。這樣四位一體的評價方案，不僅深層次明確了藥物相互作用的原理，還為藥物相互作用與疾病診療，提供了相關數(shù)據(jù)。