本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)，涉及自體再生性醫(yī)學(xué)技術(shù)，特別是一種葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、注射美容是一種非手術(shù)整形美容方法，應(yīng)用非常廣泛。將生物材料或人工合成的生物相容性好的材料注射入真皮層或皮下，通過局部充填或其他不同的作用機(jī)理達(dá)到減少皮膚褶皺或塑性的效果。

2、市場上主要分兩類填充產(chǎn)品，一類是玻尿酸(透明質(zhì)酸)和膠原蛋白皮內(nèi)或皮下充填，屬于外源性充填材料，有外觀不自然、易分解，維持時間短等不足點；另一類是plla童顏針，屬于刺激自體膠原蛋白增生產(chǎn)生自然充填效果，但是制作難度高，必須是凍干粉，其顆粒必須嚴(yán)控在40-63微米，微粒小于30微米，會被巨噬細(xì)胞吞噬，形成肉芽腫，影響美容效果。

3、因此，需要一種外觀自然、不易分解、維持時間長且制作要求較低的美容產(chǎn)品。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的，在于提供了一種葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液及其制備方法和應(yīng)用。使用本發(fā)明后，在真皮層內(nèi)通過增生的巨噬細(xì)胞m2的表征作用，同時促進(jìn)膠原蛋白、彈性蛋白、纖維連接蛋白和透明質(zhì)酸增生，提高皮下支撐，外觀自然、維持時間長；所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液用于制作醫(yī)美產(chǎn)品，制作技術(shù)穩(wěn)定，良率高。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案：一種葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體(dex-ae/pegd?a)微顆粒溶液，含有兩種重復(fù)結(jié)構(gòu)單元：第一結(jié)構(gòu)單元和第二結(jié)構(gòu)單元，第一結(jié)構(gòu)單元來自第一單體，第一單體為聚乙二醇二丙烯酸酯(pegda)，具有結(jié)構(gòu)a；第二結(jié)構(gòu)單元來自第二單體，第二單體為經(jīng)修飾的高分子葡聚糖(dex-ae)，具有結(jié)構(gòu)b；

3、

4、其中m＝10-100，n＝4-400，r1選自-ocnhch2ch＝ch2、-ch2ch2nh2或h；r2選自-ocnhch2ch＝ch2、-ch2ch2nh2或h；r3選自-ocnhch2ch＝ch2、-ch2ch2nh2或h；所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液由第一單體和第二單體經(jīng)紫外交聯(lián)而成。所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒是一種具有高度生物相容性的生物活性材料，無刺激性，使用部位腫塊6-8小時后可消失復(fù)原。所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒由體內(nèi)葡聚糖酶分解成葡萄糖和peg，peg是fda和nmpa認(rèn)證的藥物制劑，具有無毒、無免疫原性、無抗原性、水溶性的特點，可經(jīng)由腎臟排出。所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液注射于皮下，可促進(jìn)相應(yīng)部位皮下組織中巨噬細(xì)胞增生，其增生的巨噬細(xì)胞超過90％為m2表征，m2巨噬細(xì)胞通過分泌tgf-β、il-10、vegf-a和生長因子，促進(jìn)纖維母細(xì)胞(fibroblasts)增生和血管內(nèi)皮細(xì)胞(blood?vesselendotheli?al?cells)增生。纖維母細(xì)胞合成、分泌細(xì)胞外基質(zhì)(emc)和膠原蛋白(i型、iii型)、彈性蛋白和纖維連接蛋白；emc是由大分子和礦物質(zhì)組成的基質(zhì)，包含膠原、酶、透明質(zhì)酸、糖蛋白、蛋白聚糖、糖胺聚糖和羥基磷灰石，形成膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和彈性纖維，為周圍細(xì)胞提供結(jié)構(gòu)和生化支持，為重塑真皮層組織結(jié)構(gòu)提供支撐，消除表皮層皺紋和缺陷。因其為自體再生膠原蛋白形成的纖維充填，具有非常自然的外觀效果，充填效果可以維持18-24個月。

5、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液中，所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒具有結(jié)構(gòu)c，

6、

7、所述結(jié)構(gòu)a的平均分子量為200-20,000道爾頓，所述結(jié)構(gòu)b的平均分子量為20,000-200,000道爾頓。

8、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液中，所述結(jié)構(gòu)a的平均分子量為1000-8000道爾頓，所述結(jié)構(gòu)b的平均分子量為10,000-150,000道爾頓。

9、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液中，所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒的顆粒長度為10-40μm。該顆粒長度的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒，充填效果可維持長達(dá)24個月。

10、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液的制備方法，于第一單體和第二單體中加入光引發(fā)劑和純凈水，經(jīng)紫外交聯(lián)，得葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液。所述方法制得的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒為條形纖維，纖維長度為10-40μm，其溶液呈透明金黃色，略帶粘性，ph為7.2-7.4。

11、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液的制備方法中，包括以下步驟，

12、步驟a，按以下濃度配制溶液：pbs緩沖液80-90wt％，第一單體聚乙二醇二丙烯酸酯水溶液1-4wt％，第二單體經(jīng)修飾的高分子葡聚糖水溶液8-18wt％；

13、步驟b，按第一單體和第二單體總重量的3-8％稱取光引發(fā)劑i2959；

14、步驟c，將第一單體水溶液、第二單體水溶液、pbs緩沖溶液、i2959混合，其中第一單體:第二單體:pbs的重量比為(1-4):(8-18):(80-90)，攪拌均勻，經(jīng)0.5μm的精密過濾泵過濾兩遍，灌入注射器；

15、步驟d，將灌裝后的注射器平躺放置于365nm的紫外光源下，于20-25℃下交聯(lián)反應(yīng)10-12h，得葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液。

16、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液的制備方法中，步驟c中，其中第一單體:第二單體:pbs的重量比為1:9:90。

17、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液的制備方法中，步驟c中，其中第一單體:第二單體:pbs的重量比為2:8:90。

18、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液的制備方法中，步驟c中，其中第一單體:第二單體:pbs的重量比為2:18:80。

19、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液的制備方法中，步驟c中，其中第一單體:第二單體:pbs的重量比為4:16:80。

20、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用。

21、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，以所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液為主料，加入一種或多種可接受的輔料，制備成醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品。

22、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品為形成皮下支撐產(chǎn)品、促進(jìn)深度皮膚(深及真皮層或以下，臨床即稱深度皮膚)創(chuàng)面愈合產(chǎn)品或體表手術(shù)部位修復(fù)產(chǎn)品。將所述醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品在體表部位進(jìn)行皮下注射，如同在細(xì)胞間注入細(xì)胞間質(zhì)，促進(jìn)注射部位巨噬細(xì)胞增生，從而促進(jìn)該部位纖維母細(xì)胞增生；纖維母細(xì)胞合成、分泌細(xì)胞外基質(zhì)(emc)和膠原蛋白(i型、iii型)、彈性蛋白和纖維連接蛋白；emc是由大分子和礦物質(zhì)組成的基質(zhì)，包含膠原、酶、透明質(zhì)酸、糖蛋白、蛋白聚糖、糖胺聚糖和羥基磷灰石，形成膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和彈性纖維，在真皮層充填因衰老而損失的纖維和基質(zhì)成分，或填補創(chuàng)傷、外形缺陷，對充填區(qū)形成皮下支撐，改變相應(yīng)區(qū)域外觀、產(chǎn)生縮窄或增大等效果。所述深度皮膚損傷創(chuàng)面，包括急性創(chuàng)面和慢性潰瘍創(chuàng)面，如外科撕脫傷、糖尿病足潰瘍、壓瘡等，將所述醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品澆注于傷口缺損部位，可緩解傷口的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞增多，并顯示m2表征(p?henotype?ii)，促進(jìn)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、組織細(xì)胞(纖維母細(xì)胞)生長，誘導(dǎo)毛細(xì)血管生成，形成肉芽組織充填創(chuàng)面缺損，最終形成平整的組織基礎(chǔ)供后續(xù)的刃厚皮移植(split?thickness?skin?grafting)覆蓋創(chuàng)面。所述體表手術(shù)部位如皮膚腫瘤切除后、陳舊增生性瘢痕切除后的傷口，將所述醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品澆注于傷口，可促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織再生，最后移植表皮完成修復(fù)。

23、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品作為基液或添加于支架材料，用于a?dscs細(xì)胞皮膚創(chuàng)面修復(fù)。

24、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品可用于皮下注射，所述注射部位為臉部、頸部或其他適宜皮下注射部位。

25、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述臉部包括鼻梁、前額、下頜、顳部。注射區(qū)后續(xù)增生的膠原蛋白、成纖維、脂肪細(xì)胞，對充填區(qū)域形成皮下支撐，改變相應(yīng)區(qū)域外觀。

26、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述其他適宜皮下注射部位包括陰道壁黏膜下、陰莖體。注射后可產(chǎn)生縮窄和增大效果。

27、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述輔料包含生物活性劑。

28、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述生物活性劑選自干細(xì)胞、生長因子、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、plla、嗨體、氨基酸、維生素、殼聚糖、甘露醇、明膠或至少兩種的組合。

29、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述生長因子選自表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、血小板衍生化的生長因子、人生長激素、血管內(nèi)皮生長因子或至少兩種的組合。

30、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述輔料包含纖維素醚類物質(zhì)，所述纖維素醚類物質(zhì)選自甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、羧乙基纖維素、羥丙基纖維素或羥丙甲基纖維素中的一種或至少兩種的組合。

31、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述輔料包含麻醉劑，所述麻醉劑選自利多卡因、普魯卡因、依替卡因、普莫卡因、奎尼卡因中的一種或至少兩種的組合。

32、前述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液在制備醫(yī)學(xué)美容產(chǎn)品中的應(yīng)用中，所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液的重量濃度為1-20wt％。

33、與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明所述的葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)體微顆粒溶液是一種具有高度生物相容性的生物活性材料，無刺激性。將其用于皮下，可促進(jìn)相應(yīng)部位皮下組織中巨噬細(xì)胞增生，其增生的巨噬細(xì)胞超過90％為m2表征，m2巨噬細(xì)胞通過分泌tgf-β、il-10、vegf-a和生長因子，促進(jìn)纖維母細(xì)胞增生和血管內(nèi)皮細(xì)胞增生。纖維母細(xì)胞合成、分泌細(xì)胞外基質(zhì)(emc)和膠原蛋白(i型、iii型)；emc是由大分子和礦物質(zhì)組成的基質(zhì)，包含膠原、酶、糖蛋白、蛋白聚糖、糖胺聚糖和羥基磷灰石，為周圍細(xì)胞提供結(jié)構(gòu)和生化支持，為重塑真皮層組織結(jié)構(gòu)提供支撐，消除表皮層皺紋和缺陷。因其為自體再生膠原擔(dān)保形成的纖維充填，具有非常自然的外觀效果，不易分解，充填效果可維持長達(dá)24個月。所述葡聚糖聚乙二醇交聯(lián)微顆粒溶液制備程序簡捷，產(chǎn)品良率高。