一種2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑制備方法及其 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 2-甲氧基雌二醇（2-methoxyestradiol，2-ME)是20世紀(jì)70年代研究雌激素代謝 過程時(shí)，在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的雌二醇的天然代謝產(chǎn)物，屬新型激素類抗腫瘤藥物。近期，通過對 其藥理作用的研究表明，2-ME能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，擾亂微血管的生成，抑制新生血管的 生成，是較好的新生血管形成抑制劑。進(jìn)一步研究表明，其在體內(nèi)外對多種腫瘤均有良好的 抑制作用，已用于多發(fā)性骨髓瘤、前列腺癌和乳腺癌的治療，同時(shí)該化合物不依賴雌激素受 體，無雌激素作用。目前，2-ME對實(shí)體瘤的研究已處于臨床研究階段。
[0003] 2-ME在實(shí)際臨床應(yīng)用中仍存在諸多問題，如藥物的低溶解度、口服吸收無規(guī)律、肝 首過代謝作用強(qiáng)、半衰期短、生物利用度低等，大大影響了 2-ME的治療效果。為了得到一種 給藥次數(shù)少、生物利用度高、穩(wěn)定性好、制備簡單，有利于患者使用的制劑，提高2-ME靶向 性及其治療效果，以減少其毒副作用，具有非常重要的臨床意義。
[0004] 納米粒（nanoParticles)是利用天然高分子或合成的化學(xué)物質(zhì)為載體制成的載 藥微粒，納米粒子對腫瘤的增強(qiáng)滲透和滯留效應(yīng)，使更多藥物被動靶向而濃集于腫瘤組織， 提1?其抗腫瘤效果。
[0005] 白蛋白（bovineserumalbumin, BSA)是一種天然高分子載體材料，具有安全無毒、 免疫原性低、可生物降解、生物相容性好、易于修飾、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，是一種優(yōu)良的藥物載 體，其分子中氨基酸以肽鍵相連接，并且扭曲成團(tuán)狀，具有無數(shù)的網(wǎng)狀空隙，為鑲嵌攜帶藥 物創(chuàng)造了有利的空間條件。
[0006] 冷凍干燥在低溫下進(jìn)行，使得制劑中的一些揮發(fā)性成分損失小，微生物的生長和 酶的作用無法進(jìn)行，因此能保持制劑原有性狀，且體積幾乎不變，不會發(fā)生濃縮現(xiàn)象。干燥 能排除95-99%以上的水份，使干燥后產(chǎn)品能長期保存而不致變質(zhì)。因此將所制得的2-ME 白蛋白納米粒進(jìn)行凍干以得到粉針劑，旨在得到穩(wěn)定好、治療效果優(yōu)的2-ME白蛋白納米凍 干制劑。那么如何制備2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑，并實(shí)現(xiàn)在制備治療腫瘤藥物中 的應(yīng)用，是亟待解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種2-甲氧基雌 二醇白蛋白納米凍干劑制備方法及其應(yīng)用，可有效解決2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干 劑的制備，并實(shí)現(xiàn)在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用問題。
[0008] 本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，本發(fā)明2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑的制備方 法包括以下步驟： (I )、將2-甲氧基雌二醇(簡稱2-ME)溶解在有機(jī)溶劑無水乙醇中，制成2-甲氧基雌二 醇重量濃度為l-5mg/ml的溶液A ; (2) 、將牛血清白蛋白（BSA)溶解于超純水中，制成牛血清白蛋白重量濃度20-60mg/ml 的溶液B，加入表面活性劑，表面活性劑的加入量為溶液B重量的1/2000-5000,攪拌混勻， 用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值8-10 ; 所述的表面活性劑為吐溫-20 (Tween-20)、聚乙二醇-200 (PEG-200)、聚乙二醇-400 (PEG-400)、泊洛沙姆188中的任意一種或兩種以上任意量的組合； (3) 、將溶液A以0. 05-1. Oml/min的流速加入到溶液B中，溶液A和溶液B的體積比為 2-3 : 1，形成混合溶液C ; (4) 、在混合溶液C中加入交聯(lián)劑質(zhì)量濃度為8%的戊二醛，混合溶液C與質(zhì)量濃度為8% 的戊二醛的體積比為10-100 : 1，用磁力攪拌器攪拌均勻后，靜置固化； (5) 、將固化得到的制劑旋蒸去除有機(jī)溶劑，形成納米溶液D ; (6) 、在納米溶液D中加入凍干保護(hù)劑，凍干保護(hù)劑與納米溶液D的重量比為10-30 : 1，冷凍干燥去除水分，即為2-ME白蛋白納米凍干制劑； 所述的凍干保護(hù)劑為蔗糖，乳糖，甘露醇，海藻糖，葡萄糖的一種或兩種以上任意量的 組合。
[0009] 2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑具有抑制或凋亡癌細(xì)胞的功效，有效用于癌癥 的治療用藥，實(shí)現(xiàn)2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明方法簡單，易生產(chǎn)制備，穩(wěn)定性好，藥效長，治療癌癥靶向性強(qiáng)，能夠保護(hù)藥 物免受環(huán)境影響，起效快，負(fù)作用小，給藥次數(shù)少、生物利用度高、穩(wěn)定性好、制備簡單，有利 于患者使用，提高2-ME靶向性及其治療效果，減少毒副作用，具有非常重要的臨床意義，有 效用于制備治療癌癥的藥物，有巨大的經(jīng)濟(jì)和社會效益。
【附圖說明】
[0011] 圖1為本發(fā)明所制備的2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑的粒徑分布圖。
[0012] 圖2為本發(fā)明所制備的2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑的Zeta電位圖。
[0013] 圖3為本發(fā)明所制備的2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑在體外的藥物釋放曲 線圖。
[0014] 圖4為本發(fā)明所制備的2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑在實(shí)驗(yàn)癌癥中所得荷 瘤鼠的體重變化曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0016] 實(shí)施例1 本發(fā)明在具體實(shí)施中，由以下方法實(shí)現(xiàn)，將2-甲氧基雌二醇溶于無水乙醇中，制成濃 度為lmg/ml的溶液A，將牛血清白蛋白溶于超純水中，制成濃度分別為20mg/ml、30mg/ml、 50mg/ml、60mg/ml -種的牛血清白蛋白水溶液B，用0· lmol/L的NaOH溶液調(diào)溶液B pH為 9,并向溶液B中加入溶液B重量的1/5000的表面活性劑Tween-20,以80r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行 攪拌，攪拌5分鐘后，將溶液A用恒流泵控制流速為lml/min加入到溶液B中，溶液A和溶 液B的體積比為2 : I，成混合溶液C，在混合溶液C中緩慢滴加質(zhì)量濃度為8%的戊二醛水 溶液，混合溶液C與質(zhì)量濃度為8%的戊二醛水溶液體積比為100 : 1，用磁力攪拌器攪拌均 勻，固化12h，得固化制劑，將固化制劑40°C旋蒸去除無水乙醇，成納米溶液D，在納米溶液D 中加入凍干保護(hù)劑，凍干保護(hù)劑與納米溶液D的重量比為20 : 1，冷凍干燥去除水分，即得 2-甲氧基雌二醇白蛋白納米凍干劑。
[0017] 實(shí)施例2 本發(fā)明在具體實(shí)施是，也可由以下方法實(shí)現(xiàn)，取2-甲氧基雌二醇溶于乙醇中，配制成 濃度為lmg/ml、2mg/ml、4mg/ml、5mg/ml的一種2-甲氧基雌二醇的乙醇溶液，取牛血清白蛋 白溶于超純水中，制成濃度為30mg/ml的白蛋白水溶液，超聲充分溶解，用0. lmol/L的NaOH 溶液將白蛋白溶液調(diào)節(jié)到pH為9,并向白蛋白水溶液中加入白蛋白水溶液重量1/2000的表 面活性劑PEG-200,以80r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行攪拌，攪拌5分鐘后，將2-甲氧基雌二醇的乙醇 溶液用恒流泵控制流速為lml/min加入到白蛋白水溶液中，2-甲氧基雌二醇的乙醇溶液和 白蛋白水溶液的體積比為3 : 1，成混合溶液，然后將質(zhì)量濃度為8%的戊二醛水溶液緩慢滴 加至混合溶液中，混合溶液與質(zhì)量濃度為8%的戊二醛水溶液體積比為50