對cd22有特異性的抗體及其使用方法
【專利說明】對CD22有特異性的抗體及其使用方法
[0001] 相關申請的交叉引用
[0002] 本申請要求2012年7月19日提交的美國臨時申請系列no. 61/673,630的優(yōu)先權 權益，該申請W其整體通過引用并入本文。
[0003] 前言
[0004] CD22, 一種屬于Ig超家族的譜系限制性B細胞抗原，在許多類型的惡性B細胞W 及正常成熟B淋己細胞的表面上表達。
[000引發(fā)明概述
[0006] 本公開提供對CD22有特異性的抗體。所述抗體可用于多種治療、診斷和監(jiān)測應 用，其也一并提供。
[0007] 附圖簡述
[000引 圖1A和1B示出編碼嵌合或人源化抗-CD22抗體重鏈（圖1A)和輕鏈（圖1B)的 構建體。
[0009] 圖2A-E為示出人源化抗-CD22抗體與生物素化親本嵌合抗-CD22抗體競爭結合 固定的CD22的圖。
[0010] 圖3A-D示出健康供體T細胞對測試抗體的增殖應答。
[0011] 圖4示出人源化抗-CD22抗體與Raji細胞的結合，W及所述抗體被所述Raji細 胞的內(nèi)化。
[0012] 圖5示出變體抗體對人CD22的結合親和力。
[0013] 圖6A-抓示出人源化抗-CD22變體的聚集。
[0014] 圖7A和7B提供抗-CD22重鏈（圖7A)和輕鏈（圖7B)可變區(qū)的氨基酸序列。
[0015] 圖8A-E提供抗-CD22抗體的變體抗體9-20的氨基酸序列。
[0016] 圖9A-C提供CD22同種型（isoform)的氨基酸序列（上至下；SEQ ID N0:35-38)。
[0017] 定義
[001引術語"抗體"和"免疫球蛋白"包括任何同種型的抗體或免疫球蛋白，保留與抗 原的特異性結合的抗體片段，（包括但不限于Fab、Fv、scFv、和Fd片段），嵌合抗體，人源化 抗體，單鏈抗體，及包含抗體的抗原結合部分和非抗體蛋白的融合抗體?？贵w可W例如用放 射性同位素、產(chǎn)生可檢測產(chǎn)物的酶、巧光蛋白等可檢測地標記。抗體可W進一步與其它部分 綴合，例如特異性結合對的成員，如生物素（生物素-親和素特異性結合對的成員）等?？?體也可W與固體支持物結合，包括但不限于，聚苯己締板或珠等。該術語還涵蓋的是F油'、 Fv、F(ab')2,和或其它保留與抗原特異性結合的抗體片段，W及單克隆抗體?？贵w可W是單 價或二價的。
[0019]"抗體片段"包含完整抗體的一部分，例如，完整抗體的抗原結合區(qū)或可變區(qū)。抗體 片段的實例包括F油、F油'、F (油'）2和Fv片段；雙抗體；線性抗體狂apata等人，Protein 化g. 8 (10): 1057-1062 (1995));單鏈抗體分子；和由抗體片段形成的多特異性抗體?？贵w 的木瓜蛋白酶消化產(chǎn)生兩個相同的稱作"Fab"片段的抗原結合片段，所述"Fab"片段各自 具有單一抗原結合位點W及剩余的"Fc"片段（該名稱反映了容易結晶的能力）。胃蛋白酶 處理產(chǎn)生了具有兩個抗原結合位點并且仍然能夠交聯(lián)抗原的F(ab'）2片段。
[0020] "Fv"是最小的抗體片段，其含有完整的抗原識別位點和結合位點。該區(qū)域由緊密 非共價連接的一個重鏈可變結構域和一個輕鏈可變結構域的二聚體組成。在該構型中，各 可變結構域的S個CDR相互作用W在所述Vh-Vl二聚體表面上限定抗原結合位點。共同地， 該六個CDR賦予所述抗體抗原結合特異性。然而，即使單一可變結構域（或抗原特異性的 僅包含S個CDR的Fv的一半）也具有識別和結合抗原的能力，不過親和力低于整個結合位 點。
[0021] "F油"片段還含有輕鏈的恒定結構域和重鏈的第一恒定結構域（CHi)。F油片段與 Fab'片段的不同在于其重鏈CHi結構域的駿基端添加了若干殘基，包括來自抗體較鏈區(qū)的 一或多個半脫氨酸。本文中Fab' -SH是其中恒定結構域的半脫氨酸殘基攜帶游離硫醇基的 F油'的名稱。F(油'）2抗體片段原來是作為F油'片段對產(chǎn)生的，其中F油'片段之間具有 較鏈半脫氨酸。也已知抗體片段的其它化學偶聯(lián)。
[0022] 來自任何脊椎動物物種的抗體（免疫球蛋白）的"輕鏈"，基于它們的恒定結構域 的氨基酸序列，可被分至兩種明顯不同類型（稱作K和A)中的一種?；谒鼈兊闹劓満?定結構域的氨基酸序列，免疫球蛋白可W被分為不同類型。有五種主要類型的免疫球蛋白： IgA、I曲、I班、IgG、和IgM，并且該些中的幾種可W被進一步劃分為亞類（同種型），例如， IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA 和 IgA2。
[002引"單鏈Fv"或"sFv"抗體片段包括抗體的Vh和V為構域，其中該些結構域存在于單 一多膚鏈中。在一些實施方案中，F(xiàn)v多膚還包括在Vh和V苗吉構域之間的多膚接頭，其使得 sFv形成抗原結合所需的結構。針對sFv的綜述，請參見Pluckthun in The化armacology of Monoclonal Antibodies,第 113 卷，Rosenburg and Moore 編車茸，Springer-Verlag, New York,第 269-315 頁（1994)。
[0024] 術語"雙抗體"指的是具有兩個抗原結合位點的小的抗體片段，其片段包含在同 一多膚鏈（Vh-Vl)中與輕鏈可變結構域（VJ連接的重鏈可變結構域（Vh)。通過使用太短 而不能使得同一鏈上的兩個結構域配對的接頭，迫使所述結構域與另一鏈的互補結構域配 對并產(chǎn)生兩個抗原結合位點。雙抗體更全面地描述于例如EP 404, 097、W0 93/11161、和 Hollinger 等人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448(1993)。
[0025] 如本文所用，術語"親和力"指的是兩種試劑可逆結合的平衡常數(shù)，并且表達為解 離常數(shù)化d)。親和力可W比抗體對不相關氨基酸序列的親和力高至少1倍、高至少2倍、高 至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高 至少10倍、高至少20倍、高至少30倍、高至少40倍、高至少50倍、高至少60倍、高至少70 倍、高至少80倍、高至少90倍、高至少100倍、或高至少1000倍、或更高?？贵w對祀蛋白的 親和力可W是例如約100納摩爾（nM)至約0. InM，約lOOnM至約1皮摩爾（pM)，或約lOOnM 至約1飛摩爾（fM)或更高。如本文所用，術語"親合力（avidity)"指的是兩種或更多種試 劑的復合物在稀釋后對解離的抗性。就抗體和/或抗原結合片段而言，術語"免疫反應性" 和"優(yōu)先結合"在本文中可互換使用。
[0026] 術語"結合"指的是由于例如共價、靜電、疏水、和離子和/或氨鍵相互作用（包括 例如鹽橋和水橋相互作用）兩個分子間的直接連接其。主題抗-CD22抗體特異性結合CD-22 多膚內(nèi)的表位。非特異性結合將指的是具有小于約ICTm的親和力的結合，例如具有i〇-6m、 i(r5M、i(r4M等親和力的結合。
[0027] 如本文所用，術語"CDR"或"互補決定區(qū)"意指在重鏈和輕鏈多膚兩者的可變區(qū)內(nèi) 發(fā)現(xiàn)的非連續(xù)抗原結合位點。CDR描述于K油at等人，J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Rabat 等人，U. S. Dept, of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" (1991) ;Qiothia 等人，J. Mol. Biol. 196:901-917(1987);和 MacCallum等人，J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)，其中所述定義包括當相互比較時重疊的 氨基酸殘基或氨基酸殘基的子集。然而，應用兩種定義之一來指代抗體或接枝的抗體或其 變體的CDR意在屬于如本文定義和所用的該術語的范圍內(nèi)。涵蓋