一種酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及制劑領(lǐng)域，具體涉及一種酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，對于具有抗氧化、清除自由基功能的酶正在被越來越多地應(yīng)用到化妝品領(lǐng) 域。超氧化物歧化酶是一類廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶，是生物體重要的細胞防御系統(tǒng) 之一，它能催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，從而能有效清除機體內(nèi)超氧陰離子自由 基，具有抗輻射、抗腫瘤及延緩機體衰老等功能，在保健品、醫(yī)藥和化妝品行業(yè)中有重要的 應(yīng)用價值。同多數(shù)蛋白質(zhì)一樣，SOD穩(wěn)定性差，易失活。
[0003] 研宄人員通過化學(xué)修飾等手段，以期獲得穩(wěn)定性好的S0D，用于化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng) 域。但是，超氧化物歧化酶的化學(xué)修飾過程復(fù)雜，成本高，并且其潛在的安全性問題，亟需提 供一種活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑，以解決其在實際應(yīng)用中存在的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對超氧化物歧化酶易被降解的缺陷，提供一種酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧 化酶制劑，從而充分保證其在實際應(yīng)用中的穩(wěn)定性以及活性。
[0005] 本發(fā)明提供了一種酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑。
[0006] 本發(fā)明所述超氧化物歧化酶可以是任意一種亞型，優(yōu)選為生物技術(shù)領(lǐng)域常用的含 銅鋅輔基的亞型CuZn-SOD。在本發(fā)明所述制劑中，為了維持超氧化物歧化酶的活性，還可以 根據(jù)其它原料的選擇和體系的酸堿性加入適量的PH值調(diào)節(jié)劑，使體系的pH值處在可以保 持超氧化物歧化酶活性的范圍內(nèi)。
[0007] 具體的，本發(fā)明提供的酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑，由包括如下步驟的方 法制備而成：
[0008] 1)將0. 01?10份超氧化物歧化酶與1?20份醇類溶劑混合，在100?500rpm 條件下攪拌，形成透明溶液；
[0009] 2)將1?30份乳化劑與40?95份油混合，在20?50°C、200?8000rpm條件下 攪拌，形成透明液體；
[0010] 3)將步驟1)和步驟2)所得液體混合，在室溫、200?800rpm條件下攪拌，形成均 一、透明的液體，即得酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑。
[0011] 本發(fā)明所述份數(shù)均為重量份，單位可以是本領(lǐng)域的任意重量單位，如kg、g、mg等。
[0012] 其中，步驟1)所述超氧化物歧化酶優(yōu)選為0. 1?1份；
[0013] 步驟1)所述醇類溶劑優(yōu)選為5?10份；所述醇類溶劑作為親水性的分散介質(zhì)，可 以使超氧化物歧化酶充分地分散其中。所述醇類溶劑選自乙醇、丙二醇或甘油中的一種或 幾種，優(yōu)選為甘油或丙二醇。
[0014] 步驟2)所述乳化劑優(yōu)選為5?10份；所述乳化劑可以使親水性介質(zhì)均勻懸浮于 油相之中。所述乳化劑選自大豆磷脂、蛋黃磷脂、司盤80、聚甘油油酸酯中的一種或幾種，優(yōu) 選為大豆磷脂或大豆磷脂與司盤80或/和聚甘油油酸酯的組合物。
[0015] 步驟2)所述油優(yōu)選為80?90份；作為連續(xù)相包裹在溶解了超氧化物歧化酶的醇 類溶劑之外，從而避免了超氧化物歧化酶的降解。所述油選自辛酸/癸酸甘油酯、橄欖油、 大豆油、花生油、紅花油或油酸中的一種或幾種，優(yōu)選為辛酸/癸酸甘油酯或橄欖油。
[0016] 作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述制劑由包括以下步驟的方法制備而成：
[0017] 1)將0. 1?1份超氧化物歧化酶與5?10份丙二醇或甘油混合，在100?500rpm 條件下攪拌，形成透明溶液；
[0018] 2)將5?7份大豆磷脂和0?1. 5份司盤80或/和聚甘油油酸酯與80?90份 辛酸/癸酸甘油酯或橄欖油混合，在20?50°C、200?SOOOrpm條件下攪拌，形成透明液 體；
[0019] 3)將步驟1)和步驟2)所得液體混合，在室溫、200?800rpm條件下攪拌，形成均 一、透明的液體，即得超氧化物歧化酶油包醇制劑。
[0020] 進一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述制劑由包括如下步驟的方法制備而成：
[0021] 1)將0. 1?1份超氧化物歧化酶與5?10份甘油混合，在100?500rpm條件下 攪拌，形成透明溶液；
[0022] 2)將5?7份大豆磷脂和0. 5?1. 5份司盤80與80?90份橄欖油混合，在20? 50°C、200?8000rpm條件下攪拌，形成透明液體；
[0023] 3)將步驟1)和步驟2)所得液體混合，在室溫、200?800rpm條件下攪拌，形成均 一、透明的液體，即得酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑。
[0024] 本發(fā)明所述步驟1)中，還可以包括將所得溶液的pH值調(diào)節(jié)至可以保持超氧化物 歧化酶活性的范圍內(nèi)，具體為：使用pH調(diào)節(jié)劑將溶液pH值調(diào)節(jié)至4?5。
[0025] 本發(fā)明所述pH值調(diào)節(jié)劑為不影響超氧化物歧化酶活性的任意酸、堿或鹽，包括鹽 酸、硫酸、乳酸、醋酸、枸櫞酸、磷酸、三乙胺、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉中的一種 或幾種。在加入pH值調(diào)節(jié)劑之前，當(dāng)溶液pH值小于4時，使用堿性pH值調(diào)節(jié)劑將pH值調(diào) 節(jié)至4?5 ;當(dāng)溶液pH值大于5時，使用酸性pH值調(diào)節(jié)劑將pH值調(diào)節(jié)至4?5,所述酸性 調(diào)節(jié)劑優(yōu)選為lmol/L鹽酸。本發(fā)明所述pH值優(yōu)選為4. 5。
[0026] 作為一種優(yōu)選方案，本發(fā)明所述制劑由包括以下步驟的方法制備而成：
[0027] 1)將0. 1份超氧化物歧化酶與5份甘油混合，在400rpm條件下攪拌，形成透明溶 液，用pH值調(diào)節(jié)劑將溶液pH值調(diào)節(jié)至4. 5 ;
[0028] 2)將5份大豆磷脂和0. 5份司盤80與89. 4份橄欖油混合，在50 °C、8000rpm條件 下攪拌，形成透明液體；
[0029] 3)將步驟1)和步驟2)所得液體混合，在室溫、SOOrpm條件下攪拌，形成均一、透 明的液體，即得酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑。
[0030] 本發(fā)明進一步保護所述制劑在食品、保健品、化妝品以及藥品領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0031] 本發(fā)明提供的制劑穩(wěn)定性好，且酶的活性穩(wěn)定，制備方法簡單。具體的，本發(fā)明提 供的技術(shù)方案借助乳化劑的作用，使分散于醇類溶劑中的超氧化物歧化酶被包裹于油相 內(nèi)，由此獲得單相、透明的超氧化物歧化酶油包醇制劑，從而避免了超氧化物歧化酶的降 解，利于超氧化物歧化酶在食品、保健品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用。
【具體實施方式】
[0032] 以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0033] 實施例1
[0034] 按照以下步驟制備酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑：
[0035] 1)將0,1g超氧化物歧化酶與5g甘油混合，在400rpm條件下攪拌，形成透明溶液， 用lmol/L鹽酸將溶液pH值調(diào)解至4. 5 ;
[0036] 2)將5g大豆磷脂、0.5g司盤80與89.4g橄欖油混合，在50°C、8000rpm條件下攪 拌，形成透明液體；
[0037] 3)將步驟1)和步驟2)所得液體混合，在室溫、SOOrpm條件下攪拌，形成均一、透 明的液體，即得酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑。
[0038] 實施例2
[0039] 按照以下步驟制備酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑：
[0040] 1)將0. 3g超氧化物歧化酶與5. 5g甘油混合，在500rpm條件下攪拌，形成透明溶 液，用lmol/L鹽酸將溶液pH值調(diào)解至4. 5 ;
[0041] 2)將7g大豆磷脂與87. 2g橄欖油混合，在20°C、3000rpm條件下攪拌，形成透明液 體；
[0042] 3)將步驟1)和步驟2)所得液體混合，在室溫、200rpm條件下攪拌，形成均一、透 明的液體，即得酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑。
[0043] 實施例3
[0044] 按照以下步驟制備酶活性穩(wěn)定的超氧化物歧化酶制劑：
[0045] 1)將Ig超氧化物歧化酶與IOg