。
[0032] 圖8.無膽固醇、含有鞘磷脂的脂質(zhì)體和膽固醇：磷脂酰膽堿（1:1 w/w)和僅鞘磷 脂的脂質(zhì)體的混合物保護(hù)單核細(xì)胞免受金黃色葡萄球菌Doppelhof菌株分泌的毒素的影 響。
[0033] A，B) THP-I細(xì)胞在BHI液體培養(yǎng)基存在的情況下增殖（正方形）。金黃色葡萄球 菌（在BHI液體培養(yǎng)基中生長）的培養(yǎng)上清液在脂質(zhì)體不存在的情況下有效殺滅THP-I細(xì) 胞（三角形）。（A) 1200微克（菱形）鞘磷脂脂質(zhì)體提供針對細(xì)菌毒素的顯著保護(hù)。（B) 當(dāng)在600微克使用時(shí)，對于鞘磷脂和鞘磷脂：磷脂酰膽堿（1:1 w/w)的混合物觀察到最有 效的保護(hù)（菱形），而單獨(dú)的鞘磷脂脂質(zhì)體（圓形）和單獨(dú)的鞘磷脂：磷脂酰膽堿（1:1 w/ w)脂質(zhì)體（星號）不那么有效。C)含有膽固醇的脂質(zhì)體和無膽固醇、僅鞘磷脂的脂質(zhì)體 的混合物針對金黃色葡萄球菌Doppelhof菌株分泌的毒素是完全保護(hù)的。該圖顯示由恒定 (400 μ g)量的膽固醇：磷脂酰膽堿（1:1 w/w)脂質(zhì)體和不同量（0 - 1200 Pg)的僅鞘磷 脂的脂質(zhì)體構(gòu)成的脂質(zhì)體混合物的保護(hù)作用。
[0034] IO5C =細(xì)胞數(shù)X 105。t (d)=治療后時(shí)間（天）。c (r.u.)=相對于在上清 液不存在的情況下維持的細(xì)胞數(shù)的在細(xì)菌上清液存在的情況下維持的細(xì)胞數(shù)以相對單位 (r.u.)給出。SmLP (mkg)=僅鞘磷脂的脂質(zhì)體的量（微克）。
[0035] 圖9.膽固醇：鞘磷脂（1:1 w/w)、僅鞘磷脂、鞘磷脂：磷脂酰膽堿（1:1 w/w)和膽 固醇：磷脂酰膽堿（1:1 wt/wt)脂質(zhì)體的4組分混合物保護(hù)單核細(xì)胞免受金黃色葡萄球菌 的Doppelhof和MRSA 2040菌株兩者分泌的毒素的影響。
[0036] THP-I細(xì)胞在BHI液體培養(yǎng)基存在的情況下增殖（正方形）。MRSA 2040 (A)或 Doppelhof (B)金黃色葡萄球菌菌株（在BHI液體培養(yǎng)基中生長）的培養(yǎng)上清液在脂質(zhì) 體不存在的情況下有效殺滅THP-I細(xì)胞（三角形），然而1200微克4組分脂質(zhì)體混合物 (1:1:1:1)完全保護(hù)細(xì)胞免受MRSA 2040(A)或Doppelhof (B)毒素的影響。
[0037] IO5C =細(xì)胞數(shù)X 105。t (d)=治療后時(shí)間（天）。
[0038] 圖10.脂質(zhì)體保護(hù)小鼠免于金黃色葡萄球菌菌血癥，免于肺炎鏈球菌肺炎和免于 肺炎鏈球菌菌血癥。
[0039] A)實(shí)驗(yàn)室小鼠用致死劑量的Doppelhof金黃色葡萄球菌菌株靜脈內(nèi)注射。在注 射細(xì)菌后1、5和24小時(shí)，小鼠用25-50微升生理鹽水（菱形）、或25微升（I mg)膽固醇： 鞘磷脂（I: I w/w)脂質(zhì)體（正方形）或50微升（2 mg)膽固醇：鞘磷脂（I: I w/w)脂質(zhì)體 +僅鞘磷脂的脂質(zhì)體+鞘磷脂：磷脂酰膽堿（3:1 w/w)脂質(zhì)體的1:2:2混合物（三角形） 注射。
[0040] B)小鼠用肺炎鏈球菌菌株D39鼻內(nèi)感染。在注射細(xì)菌后30分鐘，小鼠接受50微 升生理鹽水的一次注射（菱形）或50微升（2 mg)膽固醇：鞘磷脂（1:1 w/w) +膽固醇： 磷脂酰膽堿（I: I w/w) +僅鞘磷脂+鞘磷脂：磷脂酰膽堿（3:1 w/w)脂質(zhì)體的1: 1: 1:1混 合物的單一鼻內(nèi)注射（三角形）。
[0041] C)小鼠用致死劑量的肺炎鏈球菌菌株D39靜脈內(nèi)注射。在注射細(xì)菌后8和12小 時(shí)，小鼠靜脈內(nèi)接受75微升/注射（3 mg)的以下脂質(zhì)體：1)膽固醇：鞘磷脂（1:1 w/w) +僅鞘磷脂的脂質(zhì)體的1:1混合物（三角形）；2)膽固醇：鞘磷脂（I: I w/w)脂質(zhì)體（正 方形）；3)僅鞘磷脂的脂質(zhì)體（圓形）或4)生理鹽水（菱形）。
[0042] S (%)=存活小鼠百分比。t (d)=感染后時(shí)間（天）。
[0043] 發(fā)明詳述 經(jīng)工程改造以具有對于膜靶向毒素更高的體內(nèi)親和力，吸入或靜脈內(nèi)注射或輸注的空 脂質(zhì)體和脂質(zhì)體混合物充當(dāng)居于受感染患者的血液或呼吸道的細(xì)菌毒素的陷阱，這為新型 抗細(xì)菌毒素隔絕（sequestrating)治療鋪平了道路。
[0044] 本發(fā)明涉及定義脂質(zhì)組成的空脂質(zhì)體或定義脂質(zhì)組成的空脂質(zhì)體的混合物用于 治療和預(yù)防細(xì)菌感染，特別是菌血癥、腦膜炎、細(xì)菌性皮膚感染、呼吸道感染諸如肺炎和腹 腔感染諸如腹膜炎的用途。
[0045] 本發(fā)明的脂質(zhì)體是空脂質(zhì)體，即沒有封裝任何抗生素或其他藥物的脂質(zhì)體。如果 需要，它們可以與攜帶藥物的已知或新型脂質(zhì)體組合使用。
[0046] 本研究顯不，精確定義脂質(zhì)組成的人工脂質(zhì)體或精確定義脂質(zhì)組成的脂質(zhì)體的混 合物有效隔絕純化的成孔毒素和磷脂酶C，從而防止它們結(jié)合至靶細(xì)胞。因此，脂質(zhì)體或它 們的混合物的應(yīng)用防止由應(yīng)用肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌和金黃色葡萄球菌的純化毒素或 培養(yǎng)上清液誘導(dǎo)的培養(yǎng)上皮細(xì)胞和單核細(xì)胞的裂解，并且保護(hù)實(shí)驗(yàn)小鼠免于由于實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo) 的菌血癥或肺炎導(dǎo)致的死亡。
[0047] 本發(fā)明涉及定義脂質(zhì)組成的空脂質(zhì)體或定義脂質(zhì)組成的空脂質(zhì)體的混合物用于 治療和預(yù)防細(xì)菌感染的用途。
[0048] 本發(fā)明還涉及覆蓋非脂質(zhì)表面的定義脂質(zhì)組成的脂質(zhì)雙層或脂質(zhì)單層，其用于治 療和預(yù)防細(xì)菌感染。考慮的非脂質(zhì)表面是，例如，醫(yī)療用品、可生物降解的珠粒和納米顆粒。
[0049] 考慮的脂質(zhì)體是20 nm至10 Mm、優(yōu)選20至500 nm的人工脂質(zhì)體，其包含脂質(zhì)或磷 月旨，所述脂質(zhì)或磷脂選自留醇類、鞘脂類和甘油脂類，特別選自膽固醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、 磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、二?；视?、和含有一個(gè)（溶磷脂酸（Iyso-)) 或兩個(gè)（二酰基_)長于4個(gè)碳原子且最多達(dá)28個(gè)碳原子的飽和或不飽和脂肪酸的磷脂酸。
[0050] 考慮的脂質(zhì)雙層或單層脂質(zhì)的組成與所示用于脂質(zhì)體的相同。
[0051] 包含4至28個(gè)碳原子的脂肪酸為，例如，飽和的直鏈鏈烷羧酸，優(yōu)選具有偶數(shù)個(gè)碳 原子，諸如12至26個(gè)碳原子，例如月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、花生酸或山崳酸，或 不飽和的直鏈鏈烯羧酸，優(yōu)選具有12至26的偶數(shù)個(gè)碳原子，和一個(gè)、兩個(gè)或更多個(gè)，優(yōu)選多 達(dá)六個(gè)反式或優(yōu)選順式構(gòu)型的雙鍵，例如油酸、亞油酸、α-亞油酸、花生四烯酸或芥酸。
[0052] 空脂質(zhì)體意指本發(fā)明中考慮的脂質(zhì)體不并入抗生素或其他藥物。如本文所使用的 "并入"意指封裝入脂質(zhì)體的腔中，脂質(zhì)體的可能雙層內(nèi)，或者作為脂質(zhì)體的薄膜層的部分。 如本文所使用的脂質(zhì)體還排除用結(jié)合劑修飾的脂質(zhì)，所述結(jié)合劑諸如抗體和單糖或寡糖， 例如如糖脂中。然而，用聚乙二醇（PEG)修飾的脂質(zhì)體被認(rèn)為是本發(fā)明的部分。已知PEG 改變脂質(zhì)體的循環(huán)時(shí)間。
[0053] 具體而言，本發(fā)明涉及包含膽固醇和鞘磷脂的空脂質(zhì)體，和包含膽固醇和鞘磷脂 或磷脂酰膽堿和鞘磷脂的空脂質(zhì)體與其他定義脂質(zhì)組成的空脂質(zhì)體、諸如包含脂質(zhì)或磷脂 的脂質(zhì)體的混合物用于治療和預(yù)防細(xì)菌感染的用途，所述脂質(zhì)或磷脂選自留醇類、鞘脂類 和甘油脂類，特別選自膽固醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨 酸、二酰基甘油、和含有一個(gè)或兩個(gè)長于4個(gè)碳原子且最多達(dá)28個(gè)碳原子的飽和或不飽和 脂肪酸的磷脂酸。
[0054] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含鞘磷脂和30% (w/w)或更多膽固醇的空脂質(zhì) 體，和包含鞘磷脂和30% (w/w)或更多膽固醇的空脂質(zhì)體與如本文定義的其他空脂質(zhì)體的 混合物用于治療和預(yù)防細(xì)菌感染的用途。具體而言，本發(fā)明涉及由鞘磷脂和30% (w/w)或 更多膽固醇組成的空脂質(zhì)體，和由鞘磷脂和30% (w/w)或更多膽固醇組成的空脂質(zhì)體與如 本文定義的其他空脂質(zhì)體的混合物用于治療和預(yù)防細(xì)菌感染的用途。更具體地，本發(fā)明涉 及由鞘磷脂和35%至65% (w/w)膽固醇、優(yōu)選40%至55% (w/w)膽固醇、特別是45%至55% (w/w)膽固醇、諸如約50% (w/w)膽固醇組成的空脂質(zhì)體，和由鞘磷脂和35%至65%、或40% 至55%、或45%至55%、例如約50% (w/w)膽固醇組成的空脂質(zhì)體與如本文定義的其他空脂 質(zhì)體的混合物用于治療和預(yù)防細(xì)菌感染的用途。
[0055] 在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含膽固醇和鞘磷脂或由其組成的空脂質(zhì)體 與包含鞘磷脂或由其組成的其他空脂質(zhì)體的脂質(zhì)體混合物用于治療和預(yù)防細(xì)菌感染的用 途。
[0056] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含磷脂酰膽堿和鞘磷脂或由其組成的空脂質(zhì) 體與如本文定義的其他空脂質(zhì)體的脂質(zhì)體混合物用于治療和預(yù)防細(xì)菌感染的用途。具體而 言，本發(fā)明涉及包含磷脂酰膽堿和鞘磷脂或由其組成的空脂質(zhì)體與包含鞘磷脂或由其組成 的其他空脂質(zhì)體的脂質(zhì)體混合物用于治療和預(yù)防細(xì)菌感染的用途。
[0057] 在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含膽固醇和鞘磷脂或由其組成的空脂質(zhì)體 與包含磷脂酰膽堿和鞘磷脂或由其組成的其他空脂質(zhì)體與由鞘磷脂組成的空脂質(zhì)體的三 組分脂質(zhì)體混合物用于治療和預(yù)防細(xì)菌感染的用途。
[0058] 在又一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含膽固醇和鞘磷脂或由其組成的空脂質(zhì) 體與包含磷脂酰膽堿和鞘磷脂或由其組成的其他空脂質(zhì)體與由鞘磷脂組成的空脂質(zhì)體與 包含膽固醇和磷脂酰膽堿或由其組成的空脂質(zhì)體的四組分脂質(zhì)體混合物用于治療和預(yù)防 細(xì)菌感染的用途。
[0059] 考慮的脂質(zhì)雙層或單層脂質(zhì)的具體組成與所示用于脂質(zhì)體的相同，優(yōu)選包含膽固 醇和鞘磷脂，和任選地磷脂酰膽堿。
[0060] 理解的是，如上述定義的空脂質(zhì)體，如上述定義的空脂質(zhì)體的混合物和脂質(zhì)雙層 或脂質(zhì)單層可以與其他化合物一起使用。例如，可以添加組分以制備標(biāo)準(zhǔn)藥物組合物。還 考慮添加藥物或藥物樣化合物，或者添加在脂質(zhì)體內(nèi)部并入藥物或藥物樣化合物的其他脂 質(zhì)體。
[0061] 考慮的藥物特別是抗生素。此類抗生素是例如，碳青霉烯類，諸如亞胺培南/西 司他丁，美羅培南，厄他培南和多尼培南；第一代頭孢菌素類，諸如頭孢羥氨芐和頭孢氨芐； 第二代頭孢菌素類，諸如頭孢呋辛，頭孢克洛和頭孢丙烯；第3代頭孢菌素類，諸如頭孢他 啶，頭孢曲松，頭孢克肟，頭孢地尼，頭孢妥侖，頭孢噻肟，頭孢泊肟和頭孢布烯，第四代頭孢 菌素類，諸如頭孢批廂；第5代頭孢菌素類，諸如頭孢洛林（ceftaroline fosamil)和頭 孢吡普；糖肽類，諸如萬古霉素，替考拉寧和特拉萬星；大環(huán)內(nèi)酯類，諸如克拉霉素，阿奇霉 素，地紅霉素，紅霉素，羅紅霉素，醋竹桃霉素，泰利霉素，壯觀霉素和螺旋霉素；青霉素類， 諸如阿莫西林，氟氯西林，苯唑西林（oxacillin),羧節(jié)青霉素（carbenicllin)和哌拉西 林；青霉素組合，諸如阿莫西林/克拉維酸，哌拉西林/三唑巴坦，氨芐青霉素/舒巴坦和 替卡西林/克拉維酸；喹諾酮類，諸如環(huán)丙沙星（例如Aradigm的脂質(zhì)體環(huán)丙沙星）和莫 西沙星；針對分枝桿菌的藥物，諸如利福平（美國的利福平），氯法齊明，氨苯砜，卷曲霉素， 環(huán)絲氨酸，乙胺丁醇，乙硫異煙胺，異煙肼，吡嗪酰胺，利福布汀，利福噴丁和鏈霉素；其他抗 生素，諸如甲硝唑，胂凡納明，氯霉素，磷霉素，夫西地酸，利奈唑胺，莫匹羅星，平板霉素，奎 奴普丁 /達(dá)福普汀，利福昔明，甲砜霉素，替加環(huán)素，和替硝唑；氨基糖甙類，諸如阿米卡星， 慶大霉素，卡那霉素，新霉素，奈替米星，妥布霉素（例如Axentis的fluidosomes?妥布霉 素）和