置于工作臺上，用燙傷模具13對準動物擬燙傷點并適當施力按壓固定，將蒸汽噴頭1上的 通汽孔10對準燙傷模具13上的空心管16,按下時間控制器開關11，開始實驗。
[0033] 2. EngStAm Carestation呼吸機購自美國GE公司，i-SATA血氣分析儀購自美 國雅培公司，邁瑞T5監(jiān)護儀購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，5mm三叉氣管切開 套管購自中國杭州啟辰醫(yī)療器械廠，GX-40型恒溫干燥箱購自廣州市康恒儀器有限公司， BX51型奧林巴斯顯微鏡購自日本奧林巴斯公司，BSA224S微量電子天平購自德國賽多利斯 集團，RM2016型LEICA石蠟切片機購自德國萊卡公司，SK-600I輸液泵購自深圳深科醫(yī)療器 械技術開發(fā)有限公司，戊巴比妥鈉購自德國Merck公司，維庫溴銨購自成都天臺山制藥有 限公司，肝素鈉注射液購自上海第一生化藥業(yè)有限公司，乳酸鈉林格氏液購自湖南科倫制 藥有限公司。
[0034] 二、實驗動物分組及模型建立
[0035] 6月齡健康雄性新西蘭大白兔136只，體質(zhì)量2400?2600g，由中國人民解放軍第 一八一醫(yī)院動物實驗中心提供。動物于溫度21?24°C、濕度50 %?60 %環(huán)境中飼養(yǎng)，晝夜 12h節(jié)律，自由進食、飲水。致傷及假傷前檢查一般狀況和血氣分析。實驗經(jīng)中國人民解放 軍第一八一醫(yī)院倫理委員會審核同意，實驗中動物處置方法均符合動物倫理學標準。
[0036] 將動物隨機分為假傷組（氣管切開、動靜脈置管但不致傷）34只與致傷組102只， 致傷組按致傷時間分為0. 25、0. 5、Is組，各致傷組動物均為34只。假傷組及致傷組中的24 只動物用于監(jiān)測傷后動脈血氣、肺組織病理、肺含水量變化，其余10只動物用來記錄其死 亡率。
[0037] 致傷及假傷前所有動物禁食12h、不禁水，40mg/kg戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉 后，將假傷組及致傷組動物仰臥位并固定于手術臺上，解剖并顯露右頸內(nèi)靜脈、右股動脈， 分別置入5F雙腔中心靜脈導管與3F動脈導管，然后將中心靜脈導管和動脈導管分別通過 壓力換能器與監(jiān)護儀連接。致傷組在動物頸正中、環(huán)狀軟骨下行氣管切開并插入內(nèi)徑為 5mm金屬氣管導管。手術操作同時預熱汽燙儀使高壓鍋內(nèi)蒸氣壓力與溫度穩(wěn)定在0. 02MPa/ cm2、105°C，動物右頸內(nèi)靜脈注射維庫溴銨（0. 04mg/kg)，此時開始用輸液泵按50ml/h輸注 乳酸鈉林格氏液lh，動物呼吸停止后致傷組按照分組分別吸入不同時間的蒸汽致傷動物， 假傷組則不吸入蒸汽，致傷或假傷后立即接呼吸機控制呼吸20min(容量控制模式：潮氣量 10mL/kg，通氣頻率50次/min，吸呼比1:1. 5,吸氧濃度分數(shù)50% )，輸液Ih后按15mL/h繼 續(xù)輸注乳酸鈉林格氏液。
[0038] 三、觀察指標與方法
[0039] 1.動脈血氣分析：傷后1、4、12、24h抽動脈血行血氣分析，記錄氧分壓（PaO2)、二 氧化碳分壓（PaCO 2)。
[0040] 2.肺含水量：傷后l、4、12、24h分別放血處死6只動物后取右肺尖葉用濾紙拭干 表面血液，以微量電子天平稱重后放入80°C恒溫干燥箱72h后稱干重，肺含水量=[(濕 重一干重）/濕重]X 100%。
[0041] 3.肺組織病理觀察：傷后l、4、12、24h同時取上述處死動物右肺膈葉并用手術刀 沿垂直于進入右肺膈葉的葉支氣管方向切6等份肺組織塊，浸入4%中性甲醛溶液中48h后 石蠟包埋，4um連續(xù)切片，常規(guī)蘇木精-伊紅染色，觀察肺充血水腫與出血、炎性細胞浸潤情 況。
[0042] 4.動物死亡率：計算各組中用于觀察死亡率的10只動物在傷后6、12、24h的死亡 率。
[0043] 四、統(tǒng)計學處理
[0044] 以SPSS 19. 0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理。Pa02、PaCO2、肺含水量以均數(shù)土標 準差（s )表示，均進行方差齊性檢驗，組間比較：方差齊性時采用獨立樣本T檢驗進行 分析；方差不齊時采用q檢驗進行分析。組內(nèi)比較：〇. 25s組、0. 5s組與假傷組采用Tukey 檢驗方法進行分析，Is組采用SchefTe檢驗方法進行分析，P < 0. 05表示差異具有統(tǒng)計學 意義，P < 0. 01表示差異具有顯著性統(tǒng)計學意義。
[0045] 結(jié)果
[0046] 一、動脈血氣
[0047] I. PaO2:假傷組PaO 2各觀察時間點有所變化但均在正常范圍（PaO 2均> 70mmHg)。 致傷組各時間點？&02與假傷組同時間點比較均降低且差異有顯著性統(tǒng)計學意義（P < 0. 01)。致傷組組間同時間點PaO2比較，傷后12h 0. 5s組與0. 25s組PaO 2比較差異有 統(tǒng)計學意義（P < 0. 05)，傷后lh、4h同時間點0. 25、0. 5、ls組組間比較PaO2均降低且差異 有顯著性統(tǒng)計學意義（P < 0. 01)。0. 25s組傷后4h PaO2明顯下降且與傷后Ih比較差異 有顯著性統(tǒng)計學意義（P < 0. 01)。傷后 lh，0. 5s 組 50mmHg < Pa02< 60mmHg，Is 組 PaO 2 < 50mmHg，二組PaO2傷后4h與Ih比較均呈下降趨勢，傷后l、4h二組間比較，Is組PaO 2均 低于0· 5s組（P < 0· 01)。見表1。
[0048] 2. PaCO2:假傷組與致傷各組Ih組間PaCO 2比較差異無統(tǒng)計學意義（P >0· 05); 0. 25、0. 5s組較假傷組在傷后4、12h時PaCO2均明顯降低（P < 0. 01)，0. 25s組傷后24h 卩&0)2略高于假傷組但無統(tǒng)計學意義（P > 0. 05)，Is組傷后4h時PaCO 2較假傷組明顯升高 (P < 0. 01)。致傷組組間比較，傷后4、12h時0. 5s與0. 25s組比較？&0)2隨致傷時吸入蒸 汽時間的延長均降低并有顯著性統(tǒng)計學意義（P < 0. 01);傷后4h Is組與0. 25s、0. 5s組 比較，PaCO2升高且差異有顯著性統(tǒng)計學意義（P < 0. 01)。假傷組內(nèi)隨觀察時間延長PaCO2 呈下降趨勢，其中傷后12、24h與Ih比較PaCO2降低且差異有顯著性統(tǒng)計學意義（P〈0. 01)， 12、24h與4h三者間以及4h與Ih間PaCO2比較差異均無統(tǒng)計學意義（P > 0. 05)。各致傷 組組內(nèi)比較，傷后4、12h時0. 25、0. 5s組PaCO2與同組Ih比較均呈現(xiàn)下降趨勢且差異有顯 著性統(tǒng)計學意義（P〈〇. 01)，0. 25s組傷后24h時PaCO2與同組4、12h時比較有所升高，與12h 比較差異有統(tǒng)計學意義（P〈〇. 05)，0. 25s、0. 5s組傷后4h與12h各自組內(nèi)PaCO2K較差異 無統(tǒng)計學意義（P > 0. 05) ;ls組傷后4h時？&0)2較Ih明顯升高（P〈0. 01)。見表2。
[0049] 表1 :各組大白兔傷后不同時間點氧分壓（PaO2)的比較（mmHg，無±5，η = 6)
[0050]
【主權(quán)項】
1. 不同層級嚴重吸入性損傷動物模型的建立方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 麻醉動物，將動物固定于手術臺上，解剖并顯露右頸內(nèi)靜脈或左頸內(nèi)靜脈以及右股 動脈或左股動脈，分別置入中心靜脈導管和動脈導管，然后將中心靜脈導管和動脈導管分 別與監(jiān)護儀連接； 2) 在動物頸正中、環(huán)狀軟骨下行氣管切開，插入氣管導管； 3) 在動物右頸內(nèi)靜脈或左頸內(nèi)靜脈注射維庫溴銨，并按48?52ml/h輸注乳酸鈉林格 氏液，待動物呼吸停止后，采用燙傷儀向動物氣管內(nèi)通入壓力與溫度分別為〇.〇2MPa/cm 2、 l〇5°C的蒸氣，并按照0. 25s、0. 5s、Is的燙傷時間分別致傷動物，致傷后立即接呼吸機控制 呼吸20min ;在按48?52ml/h的量輸注乳酸鈉林格氏液Ih后改按13?17ml/h的量繼續(xù) 輸注乳酸鈉林格氏液，即建立得到嚴重、危重與極危重三個不同層級嚴重吸入性損傷動物 模型。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的不同層級嚴重吸入性損傷動物模型的建立方法，其特征在 于：步驟1)中，所述的中心靜脈導管和動脈導管分別直接與監(jiān)護儀連接，或者是分別通過 壓力換能器與監(jiān)護儀連接。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的不同層級嚴重吸入性損傷動物模型的建立方法，其特征在 于：步驟3)中，所述呼吸機采用容量控制模式，設置呼吸機參數(shù)為：潮氣量10mL/kg，通氣頻 率50次/min，吸呼比I :1. 5,吸氧濃度分數(shù)50%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1?3中任一項所述的不同層級嚴重吸入性損傷動物模型的建立方 法，其特征在于：所述的動物為兔。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1?3中任一項所述的不同層級嚴重吸入性損傷動物模型的建立方 法，其特征在于：所述的動物為新西蘭大白兔。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1?3中任一項所述的不同層級嚴重吸入性損傷動物模型的建立方 法，其特征在于：步驟3)中，所述的燙傷儀為自動控時調(diào)壓燙傷儀。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種不同層級嚴重吸入性損傷動物模型的建立方法，包括以下步驟：1)麻醉動物，將動物固定于手術臺上，解剖并顯露右頸內(nèi)靜脈或左頸內(nèi)靜脈以及右股動脈或左股動脈，分別置入中心靜脈導管和動脈導管并將它們分別與監(jiān)護儀連接；2)將動物氣管切開，插入氣管導管；3)在動物右頸內(nèi)靜脈或左頸內(nèi)靜脈注射維庫溴銨，并按48～52ml/h輸注乳酸鈉林格氏液，待動物呼吸停止后，采用燙傷儀向動物氣管內(nèi)通入壓力與溫度分別為0.02MPa/cm2、105℃的蒸氣致傷動物，致傷后立即接呼吸機控制呼吸20min；在按48～52ml/h的量輸注乳酸鈉林格氏液1h后改按13～17ml/h的量繼續(xù)輸注乳酸鈉林格氏液，即得。
【IPC分類】A61D1-00
【公開號】CN104605956
【申請?zhí)枴緾N201510076612
【發(fā)明人】童亞林, 朱富軍, 詹球, 龔震宇, 馮小艷, 劉亮, 梁靜, 陽齊瓊, 李 泳, 呂璐, 莫永亮
【申請人】童亞林
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2015年2月12日