索氟布韋倍半水合物膠囊及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本文公開核苷氨基磷酸酯晶體和它們作為用于治療病毒性疾病的藥劑的用途。這 些化合物是RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制的抑制劑，并且可用作HCVNS5B聚合酶的抑制劑、 HCV復(fù)制的抑制劑、以及用于在哺乳動(dòng)物中治療丙型肝炎感染。
【背景技術(shù)】
[0002] 丙型肝炎病毒（HCV)感染是導(dǎo)致慢性肝臟疾病的主要健康問題，例如肝硬化和肝 細(xì)胞癌，在基本上大量感染的個(gè)體中，估計(jì)為2-15%的世界人口。根據(jù)美國(guó)疾病控制中心的 數(shù)據(jù)，單美國(guó)就估計(jì)有450萬(wàn)的感染人口。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的數(shù)據(jù)，全世界有超過2億的 感染人口，并且每年有至少300-400萬(wàn)人口被感染。一旦被感染，約20%的人清除病毒，但 其余的人可能在其余下的生命中將攜帶HCV。10-20%的慢性感染個(gè)體最終發(fā)展為肝破壞性 肝硬化或癌癥。病毒疾病是通過被污染的腸外血液和血液制品，受污染的針頭經(jīng)胃腸外傳 播，或通過性行為和從被感染的母親或攜帶者母親垂直傳播至其后代。HCV感染的現(xiàn)有治療 局限于單用重組干擾素a或聯(lián)合使用核苷類似物利巴韋林的免疫治療，該治療取得有限 的臨床益處。而且，尚未建立用于HCV的疫苗。因此，急切需要一種可有效對(duì)抗慢性HCV感 染的改善的治療藥劑。
[0003]HCV病毒體是具有約9600個(gè)堿基的單寡核糖核苷酸基因序列的有包膜正鏈RNA病 毒，編碼約3010個(gè)氨基酸的多聚蛋白。HCV基因的蛋白產(chǎn)物包括結(jié)構(gòu)蛋白C、El和E2,以 及非結(jié)構(gòu)蛋白NS2、NS3、NS4A與NS4B、NS5A和NS5B。據(jù)信非結(jié)構(gòu)（NS)蛋白提供病毒復(fù)制 的催化作用。NS3蛋白酶釋放NS5B，多聚蛋白鏈的RNA依賴性RNA聚合酶。HCVNS5B聚合 酶是從單鏈病毒RNA合成雙鏈RNA所必需的，單鏈病毒RNA在HCV的復(fù)制循環(huán)中作為模板。 因此，認(rèn)為NS5B聚合酶是HCV復(fù)制復(fù)合體中的必要組分（K.Ishi，等，H印tology(肝臟病 學(xué)），1999,29 :1227-1235 ;V.Lohmann，等?，Virology(病毒學(xué)），1998,249 :108-118)。HCV NS5B聚合酶的抑制防止形成雙鏈HCVRNA，因而構(gòu)成開發(fā)HCV特異性抗病毒療法的具有吸 引力的方法。
[0004]HCV屬于具有許多共性的病毒大科。
[0005] 黃病毒科 病毒的黃病毒科包括至少三種不同的屬：癌病毒屬，它導(dǎo)致牛和豬的疾??；黃病毒屬， 它是導(dǎo)致例如登革熱和黃熱病的疾病的主要原因；和丙型肝炎病毒屬（hepaciviruses)， 其唯一成員是HCV?；谘鍖W(xué)相關(guān)性分組，黃病毒屬包括多于68個(gè)成員（Calisher等.， J.Gen.Virol(遺傳病毒學(xué)雜志），1993, 70, 37-43)。臨床癥狀各不相同，包括發(fā)熱、腦炎和 出血熱（FieldsVirology(費(fèi)氏病毒學(xué)），編輯：Fields，B.N.，Knipe，D.M?，和Howley， P.M. ,Lippincott-RavenPublishers，Philadelphia，PA，1996，Chapter31，931_959)。全 球關(guān)注的與人類疾病相關(guān)的黃病毒屬包括登革出血熱病毒（DHF)、黃熱病病毒、休克綜合癥 和日本腦炎病毒（Halstead，S.B. ,Rev.Infect.Dis.，1984,6, 251-264 ;Halstead，S.B., Science(科學(xué)），239 :476-481,1988 ;Monath，T.P.，NewEng.J.Me工（新英格蘭醫(yī)學(xué) 雜志）1988, 319,641-643)。
[0006]瘟病毒屬包括牛病毒性腹瀉病毒（BVDV)、豬瘟病毒（CSFV，也稱為豬霍亂病毒） 和綿羊瘟病毒（BDV) (Moennig，V?等.Adv.Vir.Res. 1992,41，53-98)。家畜（牛、豬和羊） 的瘟病毒感染造成世界范圍內(nèi)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。BVDV導(dǎo)致牛的粘膜病且對(duì)于家畜產(chǎn)業(yè)具 有顯著的經(jīng)濟(jì)重要性（Meyers，G?和Thiel，H.J.，AdvancesinVirusResearch(病毒研 究進(jìn)展），1996,47, 53-118;MoennigV.，等，Adv.Vir.Res. 1992,41，53-98)。尚未像動(dòng)物瘟 病毒那樣全面了解人瘟病毒。然而，血清學(xué)研究顯示人類中有相當(dāng)多的瘟病毒接觸。
[0007] 瘟病毒和丙型肝炎病毒是黃病毒科內(nèi)密切相關(guān)的病毒屬。該科內(nèi)其它密切相關(guān)的 病毒包括GB病毒A、GB病毒A-類似物、GB病毒-B和GB病毒-C(也稱為G型肝炎病 毒，HGV)。丙型肝炎病毒屬（丙型肝炎病毒；HCV)由許多可感染人體的密切相關(guān)但不同基 因型的病毒組成。至少有6種HCV基因型和大于50種亞型。由于癌病毒和丙型肝炎病毒 的相似性，加上丙型肝炎病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中很難有效生長(zhǎng)，所以，在HCV病毒研究中常常使 用牛病毒性腹瀉病毒（BVDV)作為代用品。
[0008] 瘟病毒和丙型肝炎病毒的遺傳組構(gòu)非常相似。這些正鏈RNA病毒具有單個(gè)大的開 放式讀碼框（0RF)，編碼所有病毒復(fù)制所需的病毒蛋白。這些蛋白表達(dá)為多聚蛋白，多聚蛋 白被細(xì)胞和病毒編碼的蛋白酶同時(shí)翻譯加工或翻譯后加工，產(chǎn)生成熟的病毒蛋白。負(fù)責(zé)病 毒基因組RNA復(fù)制的病毒蛋白位于大致羧基末端之內(nèi)。ORF的三分之二稱為非結(jié)構(gòu)（NS) 蛋白。瘟病毒和丙型肝炎病毒的ORF非結(jié)構(gòu)蛋白部分的基因組構(gòu)和多聚蛋白加工非常相 似。對(duì)于瘟病毒和丙型肝炎病毒，從非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)域的氨基末端到ORF的羧基末端的 連續(xù)順序，成熟非結(jié)構(gòu)（NS)蛋白由p7,NS2,NS3,NS4A，NS4B，NS5A和NS5B組成。
[0009] 瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白共有具有特殊蛋白質(zhì)功能特征的序列結(jié)構(gòu)域。 例如，兩種病毒屬中病毒的NS3蛋白都含有具有絲氨酸蛋白酶和解旋酶特征的氨基酸序列 基序（Gorbalenya等?，Nature(自然），1988, 333, 22;Bazan和FletterickVirology( 病毒學(xué)），1989,171,637-639;Gorbalenya等?，NucleicAcidRes?(核酸研究），1989, 17,3889-3897)。類似地，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都具有以針對(duì)RNA的RNA聚 合酶為特征的基序（Koonin，E.V?和Dolja，V.V. ,Crir.Rev.Biochem.Molec.Biol. 1993， 28,375-430)〇
[0010] 瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白在病毒生命周期中的實(shí)際作用和功能是 直接類似的。在兩種情況下，NS3絲氨酸蛋白酶負(fù)責(zé)ORF中其位置下游的多聚蛋白 前體的所有蛋白水解加工（Wiskerchen和Collett,Virology(病毒學(xué)），1991，184， 341-350;Bartenschlager等.，J.Virol(病毒學(xué)雜志）? 1993,67,3835_3844;Eckart 等.Biochem.Biophys.Res.Comm.生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究評(píng)論1993,192, 399-406 ;Grakoui等?，J.Virol(病毒學(xué)雜志）? 1993,67, 2832-2843;Grakoui等?，Proc. Natl.AcadSci.USA(美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊）1993,90，10583-10587;Hijikata等?， 工￥丨1'〇1.(病毒學(xué)雜志）1993,67,4665-4675;1'〇1116等.，1￥11'〇1.(病毒學(xué)雜志）， 1993,67,4017-4026)。在兩種情況下，NS4A蛋白起NS3絲氨酸蛋白酶的輔因子的作 用（Bartenschlager等?，J.Virol.(病毒學(xué)雜志）1994,68, 5045-5055;Failla等?， J.Virol.(病毒學(xué)雜志）1994,68, 3753-3760;Xu等?，J.Virol.(病毒學(xué)雜志），1997, 71 :5312-5322)。兩種病毒的NS3蛋白還都作為解旋酶起作用（Kim等.，Biochem.Biophys. Res.Comm.(生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究評(píng)論），1995,215，160_166;]111和？6丨618〇11,Arch.Biochem.Biophys. ,1995,323,47-53;Warrener和Collett,J.Virol?(病毒學(xué)雜 志）1995,69，1720-1726)。最后，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都具有預(yù)見的針對(duì) RNA的RNA聚合酶的活性（Behrens等.，EMB0,1996,15,12-22;Lechmann等.，J.Virol. (病毒學(xué)雜志），1997,71，841 6_8428;￥皿11等.，13;[0(3]16111.13;[(^]15^.1^8.(]〇111111(生物化 學(xué)和生物物理學(xué)研究評(píng)論）? 1997, 232, 231-235 ;Hagedorn，PCTW097/12033;Zhong等， J.Virol.(病毒學(xué)雜志），1998, 72,9365-9369)。
[0011]目前，對(duì)于感染丙型肝炎病毒的個(gè)體具有有限的治療選擇。目前批準(zhǔn)的治療選擇 是單用重組干擾素a或聯(lián)合使用核苷類似物利巴韋林的免疫治療。該療法的局限在于其 臨床有效性，并且僅50%的治療的患者對(duì)于療法有反應(yīng)。因此，非常需要更有效和新穎的療 法來解決HCV感染所面臨的未滿足的醫(yī)療需要。
[0012] 現(xiàn)在已經(jīng)鑒定了用于直接作用抗病毒劑的藥物開發(fā)的許多潛在的分子靶作為 抗-HCV療法，包括但不限于NS2-NS3自身蛋白酶、N3蛋白酶、N3解旋酶和NS5B聚合酶。 RNA-依賴性RNA聚合酶是單鏈正義RNA基因組的復(fù)制所絕對(duì)必需的，并且該酶已經(jīng)在藥 物化學(xué)師中引起極大的興趣。
[0013] 作為HCV感染的潛在療法的HCVNS5B抑制劑已經(jīng)在下列文獻(xiàn)中綜述：Tan， S.-L，等?，NatureRev.DrugDiscov.(藥物開發(fā)自然評(píng)論），2002，l，867-881;Walker,M.P.等?，Exp.Opin.InvestigationalDrugs(研究藥物實(shí)驗(yàn)觀點(diǎn)），2003,12， 1269-1280 ;Ni,Z-J?,等.，CurrentOpinioninDrugDiscoveryandDevelopment(現(xiàn) 代藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)觀點(diǎn)），2004,7,446_459 ;Beaulieu，P.L，等?，CurrentOpinionin InvestigationalDrugs(現(xiàn)代研究藥物觀點(diǎn)），2004, 5,838-850 ;Wu，J.，等?，Current DrugTargets-InfectiousDisorders(現(xiàn)代藥物革感染性病癥），2003, 3, 207-219 ; Griffith，R.C.，等，AnnualReportsinMedicinalChemistry(藥物化學(xué)年度報(bào)告），2004, 39,223-237 ;Carrol，S.，等?，InfectiousDisorders-DrugTargets(感染性病癥藥物 靶），2006,6,17-29。出現(xiàn)抗性HCV菌株的可能性和需要鑒定具有廣泛基因型覆蓋度的藥 劑支持繼續(xù)努力來鑒定新穎和更有效的核苷作為HCVNS5B抑制劑的需要。
[0014]NS5B聚合酶的核苷抑制劑可起到導(dǎo)致鏈終止的非天然底物的作用或和核苷酸競(jìng) 爭(zhēng)結(jié)合聚合酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的作用。為了起到鏈終止劑的作用，核苷類似物必須被細(xì)胞 所攝取并且體內(nèi)轉(zhuǎn)化為三磷酸酯以競(jìng)爭(zhēng)聚合酶核苷酸的結(jié)合位點(diǎn)。該轉(zhuǎn)化至三磷酸酯通 常受到細(xì)胞激酶的介導(dǎo)，所述細(xì)胞激酶賦予潛在核苷聚合酶抑制