紅花黃色素在制備治療和/或預(yù)防急性軟組織損傷藥物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及從中藥紅花中提取制備的紅花黃色素的新用途，即在制備治療和/或 預(yù)防急性軟組織損傷藥物的新用途，上述紅花黃色素組成的藥物組合物。
【背景技術(shù)】：
[0002] 軟組織損傷是臨床常見的運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)損傷，為一常見病多發(fā)病，嚴(yán)重影響著人們的 勞動(dòng)能力和身心健康。軟組織損傷中醫(yī)學(xué)稱為筋傷，是由于損傷之后脈絡(luò)破損，血液離經(jīng) 而成瘀，血瘀則氣滯形成氣滯血瘀，常以活血化瘀、消腫止痛法治療。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為炎癥反 應(yīng)為軟組織損傷的主要病理機(jī)制，創(chuàng)傷后局部可出現(xiàn)腫脹、疼痛、青紫瘀斑和功能障礙等表 現(xiàn)，?？梢娂±w維撕裂、水腫、滲出及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，傷情嚴(yán)重治療不及時(shí)則可引起全身炎 癥反應(yīng)，甚至可發(fā)展為多器官功能障礙綜合癥。創(chuàng)傷造成勞動(dòng)力損失，其救治及康復(fù)等過程 耗費(fèi)巨大，給社會(huì)造成了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。我國(guó)的意外創(chuàng)傷發(fā)病率高，尤其隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的 發(fā)展創(chuàng)傷致殘者驟增，造成了嚴(yán)重的社會(huì)影響。
[0003] 軟細(xì)織損傷的局部病理變化主要是創(chuàng)傷性炎癥和組織修復(fù)過程。軟組織損 傷造成局部組織與小血管受損，血管壁通透性增加，炎癥細(xì)胞滲出進(jìn)入組織間隙，血管 內(nèi)液外滲導(dǎo)致腫脹，局部組織壞死而出現(xiàn)炎癥反應(yīng)、組織變性、滲出及增生。組織中 釋放出大量炎癥介質(zhì)如腫瘤壞死因子-a (tumor necrosis factor_a,TNFa)、白介 素 -I β (Interleukin-1 β，IL-I β )、IL-6、IL-8、IL-12、血管活性胺及花生四烯酸代謝產(chǎn) 物等在軟組織損傷炎癥損傷中起了重要的作用，這些炎癥介質(zhì)可激活絲裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinases, MAPK)和核轉(zhuǎn)錄因子 κ B (Nuclear Factor κΒ, NFk B)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)等引發(fā)更多炎癥介質(zhì)的釋放而進(jìn)一步創(chuàng)傷組織。組織中的細(xì)胞因 子首先由巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生，經(jīng)血管內(nèi)皮細(xì)胞等的放大作用產(chǎn)生更多 的細(xì)胞因子形成瀑布效應(yīng)，它們可作用于靶細(xì)胞引發(fā)進(jìn)一步的炎癥反應(yīng)而加劇組織損傷 [Quintero AJ, Wright VJ,Fu FH, Huard J. Stem cells for the treatment of skeletal muscle injury.Clin Sports Med. 2009,28(I) :1-11. ]〇
[0004] 對(duì)于軟組織損傷目前西醫(yī)常用激素類藥物局部注射抗炎或服用非留體類藥物鎮(zhèn) 痛，但使用激素可見多種不良反應(yīng)其應(yīng)用受到限制，TNFa拮抗劑依那西普、英夫利昔單抗 和阿達(dá)木單抗等藥物則因有副作用和費(fèi)用昂貴而應(yīng)用受到限制。作為中藥的特長(zhǎng)，治療軟 組織損傷中藥常以活血化瘀、消腫止痛為主，上市的中成藥中外用劑型較多，包括膏、散、 擦、洗、氣霧劑等以及一些口服制劑，但治療該疾患的注射劑較少，盡管外用復(fù)方中有些中 藥具有一定的透皮吸收效果，但若損傷部位較深則因藥物滲透慢，治療效果不如表淺部位 好，這種情況下注射劑就可更好地發(fā)揮其作用。目前治療軟組織損傷中藥制劑很多存在劑 型落后、使用不便等缺點(diǎn)，妨礙了其進(jìn)一步的提高與推廣應(yīng)用。目前對(duì)治療軟組織損傷中藥 有效成分和藥物作用機(jī)制的研究較少，這一現(xiàn)狀嚴(yán)重制約了該類中藥的進(jìn)一步發(fā)展，研究 中藥緩解軟組織損傷的活性成分，闡明其作用機(jī)理，對(duì)探索中藥作用的客觀規(guī)律，開發(fā)不良 反應(yīng)較少抑制軟組織損傷的藥物具有重要意義。治療軟組織損傷是中醫(yī)的特長(zhǎng)，研究開發(fā) 中藥有效部位和有效成分緩解軟組織損傷中炎癥反應(yīng)的作用對(duì)改善該病的治療具重要意 義。
[0005] 中藥紅花為菊科植物Cathamus tinctorius L的干燥花，為一活血化瘀代表性藥 物。紅花活血通經(jīng)，散瘀止痛，主要用治跌打損傷、冠心病、腦血栓等多種血液循環(huán)障礙性疾 病。臨床上紅花常以水煎液入藥，紅花黃色素 （Safflor Yellow，SY)為紅花的主要水溶性組 分，為多種查耳酮苷的混合物，研究結(jié)果表明，紅花黃色素為紅花活血化瘀的有效部位[王 會(huì)玲，紅花黃色素的現(xiàn)代研究概述。中國(guó)中醫(yī)藥科技，1998, 5 (5) :333-334.]，羥基紅花黃色 素 A(Hydroxy Safflower yellow A，HSYA，分子結(jié)構(gòu)見附圖1)為紅花黃色素中的主要有效 成分[金鳴，高子淳，李金榮，臧寶霞，吳偉，大孔樹脂色譜法制備羥基紅花黃色素 A及紅花 黃色素，中草藥，2004, 35(1) :25-28。]，該成分為一新的血小板激活因子受體拮抗劑[臧 寶霞，金鳴，司南，張彥，吳偉，樸永哲，HSYA對(duì)血小板活化因子的拮抗作用，藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002， 37(9) :696-699 ;]。近年來雖然關(guān)于紅花黃色素和HSYA藥理作用的研究報(bào)道逐漸增多，但 紅花黃色素和HSYA緩解急性軟組織損傷研究尚未見報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 及有益效果:
[0007] 實(shí)驗(yàn)一、紅花黃色素對(duì)錘擊所致大鼠急性軟組織損傷的緩解作用
[0008] 1.材料與方法
[0009] 1. 1.實(shí)驗(yàn)設(shè)備
[0010] 自制打擊器由有機(jī)玻璃圓管和圓柱形不銹鋼錘組成，不銹鋼錘的外徑稍小于不銹 鋼管的內(nèi)徑，使用時(shí)將有機(jī)玻璃管垂直放置，其下端的圓心對(duì)準(zhǔn)大鼠被打擊部位，不銹鋼 錘從有機(jī)玻璃管內(nèi)上端設(shè)定高度自由落下砸在大鼠被打擊部位造成創(chuàng)傷。多用途低溫 高速離心機(jī)為德國(guó)Eppendorf公司產(chǎn)品；NAN0DR0P微量紫外分光光度計(jì)為美國(guó)Thermo公 司生產(chǎn)；IQ5熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀為美國(guó)BIO-RAD公司產(chǎn)品。全自動(dòng)脫水機(jī)、石蠟切片機(jī)、 DM6000B顯微鏡均為德國(guó)Leica產(chǎn)品；Nikon DS - RIl顯微鏡為日本Nikon產(chǎn)品；Image-Pro Plus多功能真彩色細(xì)胞圖象分析管理系統(tǒng)為美國(guó)Media Cybernetics公司產(chǎn)品。DYY-6電 泳儀為北京六一儀器廠產(chǎn)品；Odyseey雙色紅外激光成像儀為美國(guó)LI-COR公司產(chǎn)品。
[0011] 1.2.試劑與藥品
[0012] 紅花黃色素由我研究室用紅花水提液以本發(fā)明實(shí)施例中的大孔樹脂-Sephadex LH20凝膠柱層析法制備，高效液相色譜分析，面積歸一法測(cè)定HSYA純度> 95 %，該紅花黃 色素配成生理鹽水溶液備用；戊巴比妥鈉（Pentobarbital)為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品；地塞 米松（de XamethaS〇ne，DXM)磷酸鈉注射液為天津藥業(yè)焦作有限公司產(chǎn)品；肝素鈉注射液為 常州千紅生化制藥股份有限公司產(chǎn)品；胞漿胞核蛋白提取試劑盒為南京凱基生物技術(shù)有限 公司產(chǎn)品；辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔抗體（IgG)、BCA蛋白定量試劑盒和ECL plus超敏發(fā) 光液均為江蘇碧云天生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；TRIzol Reagent為L(zhǎng)ife science公司產(chǎn)