一種光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及木瓜中功能成分的提取方法，特別是一種光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]木瓜(Chaenomeles sinensis)是薔薇科(Rosaceae)木瓜屬植物，因其果實(shí)干燥后果皮仍光滑、不皺縮，又名光皮木瓜。其果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，含有豐富的有機(jī)酸、氨基酸、多糖、黃酮、三萜及其苷類等化合物，具有抗菌、消炎、抗腫瘤等功效，是集食用、藥用和觀賞于一體，極具開(kāi)發(fā)價(jià)值的新型經(jīng)濟(jì)樹種之一，市場(chǎng)前景廣闊。目前，木瓜已成為山東菏澤、湖北鄖縣、陜西白河、河南桐柏等許多地方的特色藥材、加工食用水果。
[0003]長(zhǎng)期以來(lái)，光皮木瓜栽培采用實(shí)生苗營(yíng)建果園，產(chǎn)量參差不齊。同時(shí)，木瓜產(chǎn)品加工利用基礎(chǔ)薄弱，再加上受國(guó)內(nèi)中藥市場(chǎng)低迷影響，效益低下，致使光皮木瓜利用主要以觀賞價(jià)值為主。但是光皮木瓜中含有大量的黃酮類化合物，其中長(zhǎng)沙產(chǎn)地的光皮木瓜中黃酮類化合物最高含量可達(dá)34.30g/kg，遠(yuǎn)高于柿子、蘋果、桃、梨等水果，具有重要開(kāi)發(fā)利用前景，對(duì)其果實(shí)黃酮提取可以大大增加木瓜果實(shí)的產(chǎn)品附加值，對(duì)林農(nóng)脫貧致富具有重要的意義。而現(xiàn)有技術(shù)中針對(duì)黃酮類化合物主要采取如下幾種提取方法:熱水浸提法、有機(jī)溶劑浸提法、酶解法、超聲波輔助提取法、微波法和超臨界流體萃取技術(shù)等。但是，目前光皮木瓜黃酮類物質(zhì)提取方法存在如下技術(shù)缺陷:提取率低且提取物中的總黃酮含量偏低，并且純化后的純度較低。另外，光皮木瓜的硬度比較大，難以充分粉碎，這也會(huì)造成光皮木瓜中的黃酮類物質(zhì)不能更加徹底地提取出來(lái)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種提取率高、且經(jīng)純化后的提取物中光皮木瓜黃酮類物質(zhì)含量高的光皮木瓜黃酮類物質(zhì)提取方法。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的:一種光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，包括如下步驟:
[0006](I)摘取光皮木瓜鮮果，洗凈，分切去籽得果肉，將果肉和水加入到組織搗碎機(jī)搗碎；
[0007](2)將搗碎后的得到物料加入到打漿機(jī)中打漿；
[0008](3)將步驟⑵中得到的漿料風(fēng)干；
[0009](4)將步驟(3)中風(fēng)干后的產(chǎn)物碾碎，然后用磨粉機(jī)磨粉出料，得光皮木瓜粉；
[0010](5)將光皮木瓜粉加入到水中，浸泡，得中間產(chǎn)物A ;
[0011](6)向中間產(chǎn)物A中加入有機(jī)溶劑，攪拌；
[0012](7)靜置分層，分離出有機(jī)相，水相再用相同量的有機(jī)溶劑分別萃取兩次，合并三次得到的有機(jī)相；
[0013](8)向有機(jī)相中加入固體干燥劑，除去固體干燥劑，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑；
[0014](9)將步驟⑶中得到的產(chǎn)物用D140大孔樹脂吸附純化。
[0015]上述光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，在步驟(I)中:果肉和水的質(zhì)量比為1:0.5-1 ο
[0016]上述光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，在步驟(2)中:打漿機(jī)篩孔直徑為0.4-1.0mnin
[0017]上述光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，在步驟(3)中:將步驟(2)中得到的漿料在15-40 °C時(shí)自然風(fēng)干。
[0018]上述光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，在步驟(4)中:用超微粉碎磨粉機(jī)磨粉出料。
[0019]上述光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，在步驟(5)中:按照光皮木瓜粉與水的質(zhì)量比為1:3-5，將光皮木瓜粉加入到水中，浸泡24小時(shí)以上。
[0020]上述光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，在步驟￠)中:在5_15°C時(shí)，按照光皮木瓜粉與有機(jī)溶劑的質(zhì)量比為1:2-3，向中間產(chǎn)物A中加入有機(jī)溶劑，攪拌0.5小時(shí)以上。
[0021]上述光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，所述有機(jī)溶劑為:乙醇，乙酸乙酯，乙醇和乙酸乙酯的混合溶液，乙醇和環(huán)戊醇的混合溶液，乙酸乙酯和環(huán)戊醇的混合溶液，乙醇和乙二醇二乙醚的混合溶液，乙酸乙酯和乙二醇二乙醚的混合溶液，環(huán)戊醇和乙二醇二乙醚的混合溶液。
[0022]上述光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，在步驟(8)中:所述固體干燥劑為無(wú)水硫酸鈉、無(wú)水硫酸鎂或無(wú)水氯化鈣。
[0023]上述光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，在步驟(9)中:先用水洗至流出液色淡或無(wú)色，再用體積分?jǐn)?shù)為30-65 %的乙醇溶液洗脫，得光皮木瓜黃酮類化合物。
[0024]本發(fā)明的有益效果是:(I)本發(fā)明光皮木瓜黃酮類物質(zhì)提取方法的操作工藝簡(jiǎn)單、成本低廉，并且提取方法要求的條件不苛刻，適宜大規(guī)模推廣應(yīng)用。(2)與現(xiàn)有技術(shù)的提取方法相比，萃取的選擇性好，萃取率最高可達(dá)98%，萃取之后得到的光皮木瓜黃酮的純度較高。(3)與現(xiàn)有技術(shù)得到的木瓜黃酮相比，最終得到的光皮木瓜總黃酮的純度較高。(4)光皮木瓜的硬度較大，如果不能將木瓜果肉徹底粉碎，將不能充分地將光皮木瓜黃酮提取出來(lái)；本發(fā)明專利申請(qǐng)中采用先將鮮木瓜搗碎、打漿，再進(jìn)行風(fēng)干及磨粉的工藝，使得光皮木瓜果實(shí)能夠非常容易地被粉碎成細(xì)小顆粒，優(yōu)選萃取溶劑，確保在不加熱回流的條件下就能將光皮木瓜黃酮類物質(zhì)萃取出來(lái)。
【具體實(shí)施方式】
[0025]實(shí)施例1
[0026]一種光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，包括如下步驟:
[0027](I)摘取光皮木瓜鮮果，洗凈，分切去籽得果肉，將果肉和水加入到組織搗碎機(jī)搗碎，果肉和水的質(zhì)量比為1:0.5。
[0028](2)將搗碎后的得到物料加入到打漿機(jī)中打漿，打漿機(jī)篩孔直徑為0.4mm。
[0029](3)將步驟⑵中得到的漿料在15 °C時(shí)自然風(fēng)干。
[0030](4)將步驟(3)中風(fēng)干后的產(chǎn)物碾碎，然后用超微粉碎磨粉機(jī)磨粉出料，得光皮木瓜粉。
[0031](5)按照光皮木瓜粉與水的質(zhì)量比為1:3，將100克光皮木瓜粉加入到300克水中，浸泡24小時(shí)，得中間產(chǎn)物A ;用現(xiàn)有技術(shù)的高效液相色譜法測(cè)定中間產(chǎn)物A中的黃酮類物質(zhì)的總量為2876mg。
[0032](6)在5°C時(shí)，按照光皮木瓜粉與乙酸乙酯的質(zhì)量比為1:2，向中間產(chǎn)物A中加入200克乙酸乙酯，攪拌0.5小時(shí)。
[0033](7)靜置分層，分離出有機(jī)相，水相再用相同量的乙酸乙酯分別萃取兩次，合并三次得到的有機(jī)相；用現(xiàn)有技術(shù)的高效液相色譜法測(cè)定水相中的黃酮類物質(zhì)的總量為949毫克，即水相中的黃酮類物質(zhì)有1927毫克轉(zhuǎn)移到乙酸乙酯中。
[0034](8)向有機(jī)相中加入無(wú)水硫酸鈉，干燥24小時(shí)，除去無(wú)水硫酸鈉，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去乙酸乙酯。
[0035](9)將步驟(8)中得到的產(chǎn)物用乙醇溶解，然后用D140大孔樹脂吸附純化；先用水洗至流出液無(wú)色，再用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，用現(xiàn)有技術(shù)的高效液相色譜法測(cè)定洗脫液中的黃酮類物質(zhì)的總量為1638毫克。
[0036]本實(shí)施例按照現(xiàn)有技術(shù)中的方法對(duì)光皮木瓜總黃酮抗氧化性進(jìn)行測(cè)試:以抗壞血酸為對(duì)照，分別測(cè)定總黃酮濃度均為5 μ g/mL時(shí)光皮木瓜總黃酮純化前后的還原能力，純化前的A700值為0.4，純化后的A700值為0.8。以抗壞血酸為對(duì)照，分別測(cè)定總黃酮濃度均為40 μ g/mL時(shí)光皮木瓜總黃酮純化前后對(duì)羥基自由基的清除能力，純化前的清除率為60%，純化后的清除率為80%。由于光皮木瓜總黃酮的純度越高，其還原能力和清除羥基自由基的能力越強(qiáng)，這說(shuō)明本發(fā)明光皮木瓜黃酮類物質(zhì)提取方法最終得到的光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的純度提高了很多。
[0037]實(shí)施例2
[0038]一種光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，包括如下步驟:
[0039](I)摘取光皮木瓜鮮果，洗凈，分切去籽得果肉，將果肉和水加入到組織搗碎機(jī)搗碎，果肉和水的質(zhì)量比為1:1。
[0040](2)將搗碎后的得到物料加入到打漿機(jī)中打漿，打漿機(jī)篩孔直徑為0.4mm。
[0041](3)將步驟⑵中得到的漿料在25 °C時(shí)自然風(fēng)干。
[0042](4)將步驟(3)中風(fēng)干后的產(chǎn)物碾碎，然后用超微粉碎磨粉機(jī)磨粉出料，得光皮木瓜粉。
[0043](5)按照光皮木瓜粉與水的質(zhì)量比為1:4，將100克光皮木瓜粉加入到400克水中，浸泡48小時(shí)，得中間產(chǎn)物A ;用現(xiàn)有技術(shù)的高效液相色譜法測(cè)定中間產(chǎn)物A中的黃酮類物質(zhì)的總量為2768mg。
[0044](6)在5°C時(shí)，按照光皮木瓜粉與乙醇和乙酸乙酯的混合溶液的質(zhì)量比為1:2.5，乙醇和乙酸乙酯的混合溶液中乙醇和乙酸乙酯的體積比為1:5，向中間產(chǎn)物A中加入250克乙醇和乙酸乙酯的混合溶液，攪拌I小時(shí)。
[0045](7)靜置分層，分離出有機(jī)相，水相再用相同量的乙醇和乙酸乙酯的混合溶液分別萃取兩次，合并三次得到的有機(jī)相；用現(xiàn)有技術(shù)的高效液相色譜法測(cè)定水相中的黃酮類物質(zhì)的總量為941毫克，即水相中的黃酮類物質(zhì)有1827毫克轉(zhuǎn)移到乙醇和乙酸乙酯的混合溶液中。
[0046](8)向有機(jī)相中加入無(wú)水硫酸鈉，干燥24小時(shí)，除去無(wú)水硫酸鈉，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去乙醇和乙酸乙酯。
[0047](9)將步驟⑶中得到的產(chǎn)物用乙醇溶解，然后用D140大孔樹脂吸附純化；先用水洗至流出液無(wú)色，再用體積分?jǐn)?shù)為45%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，用現(xiàn)有技術(shù)的高效液相色譜法測(cè)定洗脫液中的黃酮類物質(zhì)的總量為1535毫克。
[0048]本實(shí)施例按照現(xiàn)有技術(shù)中的方法對(duì)光皮木瓜總黃酮抗氧化性進(jìn)行測(cè)試:以抗壞血酸為對(duì)照，分別測(cè)定總黃酮濃度均為5 μ g/mL時(shí)光皮木瓜總黃酮純化前后的還原能力，純化前的A700值為0.5，純化后的A700值為0.85。以抗壞血酸為對(duì)照，分別測(cè)定總黃酮濃度均為40 μ g/mL時(shí)光皮木瓜總黃酮純化前后對(duì)羥基自由基的清除能力，純化前的清除率為63%,純化后的清除率為84%。由于光皮木瓜總黃酮的純度越高，其還原能力和清除羥基自由基的能力越強(qiáng)，這說(shuō)明本發(fā)明光皮木瓜黃酮類物質(zhì)提取方法最終得到的光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的純度很高。
[0049]實(shí)施例3
[0050]一種光皮木瓜黃酮類物質(zhì)的提取方法，包括如下步驟:
[0051](I)摘取光皮木瓜鮮果，洗凈，分切去籽得果肉，將果肉和水加入到組織搗碎機(jī)搗碎，果肉和水的質(zhì)量比為1:0.8。
[0052](2)將搗碎后的得到物料加入到打漿機(jī)中打漿，打漿機(jī)篩孔直徑為0.5mm。
[0053](3)將步驟⑵中得到的漿料在20°C時(shí)自然風(fēng)干。
[0054](4)將步驟(3)中風(fēng)干后的產(chǎn)物碾碎，然后用超微粉碎磨粉機(jī)磨粉出料，得光皮木瓜粉。
[0055](5)按照光皮木瓜粉與水的質(zhì)量比為1:3.5，將100克光皮木瓜粉加入到350克水中，浸泡48小時(shí)，得中間產(chǎn)物A ;用現(xiàn)有技術(shù)的高效液相色譜法測(cè)定中間產(chǎn)物A中的黃酮類物質(zhì)的總量為2905mg。
[0056](6)在5_10°C時(shí)，按照光皮木