用于腸道疾病藥物中的乳酸菌微生態(tài)制劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及人用或飼用微生態(tài)制劑領(lǐng)域，尤其涉及一種用于腸道疾病藥物中的乳 酸菌微生態(tài)制劑的制備方法。 技術(shù)背景：
[0002] 規(guī)?；?、高密度畜禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖的迅速發(fā)展，使養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境遭到嚴(yán)重沖擊，致使 傳染性高、致死性強(qiáng)的疾病頻發(fā)，使用傳統(tǒng)的消毒劑和抗生素已不能有效地防止疾病發(fā)生。 隨著人們對食品安全和個人健康關(guān)注度提高，已意識到長期接觸抗生素或在飼料中添加抗 生素添加劑帶來的種種弊端：（I)長期使用抗生素導(dǎo)致抗藥性菌株的出現(xiàn)；（2)造成人或畜 禽、水產(chǎn)機(jī)體免疫機(jī)能下降?？股乇粰C(jī)體攝入后，會隨著血液循環(huán)分布到各個免疫組織器 官，動物免疫能力會逐步削弱?？股剡€會導(dǎo)致抗原質(zhì)量降低，會對疫苗的接種造成不良的 影響；（3)可能引起人或畜禽、水產(chǎn)內(nèi)源性感染和二重感染。
[0003] 微生態(tài)制劑是一種由活的有益的微生物制成，其改善人和動物腸道微生態(tài)平衡， 預(yù)防腸道致病菌的感染，提高人和動物的免疫力等性能已得到了充分的證明和認(rèn)可，是一 種極具潛力的抗生素替代品。目前微生態(tài)制劑已廣泛應(yīng)用于人或動物腸道疾病的預(yù)防與輔 助治療。
[0004] 微生態(tài)制劑的作用機(jī)制主要包括：（I)競爭性粘附。通過在腸道結(jié)合位阻效應(yīng)，形 成生物保護(hù)膜，保護(hù)人和動物免受致病微生物的侵害。（2)抗菌效應(yīng)。乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生的乳 酸降低腸道PH，阻止病原菌生長，產(chǎn)生類細(xì)菌素能夠滅殺致病菌。（3)激活免疫功能。微生 態(tài)制劑菌株能影響宿主天然免疫、體液和細(xì)胞免疫系統(tǒng)，提高腸道抗體水平和巨噬細(xì)胞活 性，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能；(4)改善消化能力，提高食物或飼料消化水平。有益的微生物在人 或動物腸道分泌一些酶類物質(zhì)，可促進(jìn)食物或飼料中營養(yǎng)成分的分解，更有利于人或動物 對營養(yǎng)的消化吸收；微生態(tài)制劑菌株可以刺激小腸絨毛的生長，增大營養(yǎng)吸收面積。
[0005] 盡管微生態(tài)制劑的功效已經(jīng)被廣泛證明和接受，但是，這類活菌體微生態(tài)制劑仍 然存在以下幾個問題：（I)受環(huán)境條件(溫度、水分、酸堿度等）的影響，其有效成份易失活， 從而降低使用效果；（2)飼料調(diào)制和造粒的高溫過程使大量的活菌致死；（3)飼料中添加的 或在治療過程使用的抗生素和化學(xué)合成抗菌劑，對微生態(tài)制劑同樣具有殺滅或抑制作用； (4)不能有效抵抗人或動物消化道中的鹽酸或膽汁等的作用，在腸道的定植能力差。
[0006] 在同一生境中長期使用同一活菌制劑，導(dǎo)致噬菌體感染與暴發(fā)的風(fēng)險增加。這些 問題極大地限制了活菌類微生態(tài)制劑應(yīng)用推廣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有活菌類微生態(tài)制劑的不足，提供了一種全新、穩(wěn)定、高 效的滅活乳酸菌微生態(tài)制劑，以滅活的乳酸菌細(xì)胞及其發(fā)酵代謝產(chǎn)物為主要有效成分。
[0008] 本發(fā)明的第二個目的在于提供一種用于腸道疾病藥物中的乳酸菌微生態(tài)制劑的 制備方法。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0010] 用于腸道疾病藥物中的乳酸菌微生態(tài)制劑的制備方法，包括如下質(zhì)量配比的組 分：滅活乳酸菌細(xì)胞及乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)物10-60份，其中滅活乳酸菌細(xì)胞108-109個/克，賦 形劑30-50份。所述滅活的乳酸菌微生態(tài)制劑還包括速效能量物質(zhì)10-50份。所述乳酸菌 選自嗜酸乳桿菌、乳酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌、戊糖片球菌、乳酸片球菌、保加利亞乳桿菌、雙 歧桿菌中的一種或一種以上。所述賦形劑是60-100目玉米芯粉和沉淀二氧化硅的混合 物、玉米淀粉和沉淀二氧化硅的混合物、或者玉米芯粉、玉米淀粉和沉淀二氧化硅三者的混 合物。
[0011] 優(yōu)選地，所述速效能量物質(zhì)為葡萄糖或乳糖。
[0012] 用于腸道疾病藥物中的乳酸菌微生態(tài)制劑的制備方法，包括以下步驟：
[0013]I)選取乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)；
[0014] 2)發(fā)酵結(jié)束后在發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1-0. 5%的保護(hù)劑；
[0015] 3)滅活，離心收集菌體；
[0016] 4)濃縮上清液，加入賦形劑，干燥，使殘留水分小于15%;
[0017] 5)將步驟3)獲得的菌體與步驟4)的產(chǎn)物混合。
[0018] 優(yōu)選地，所述步驟4)中，還可以加入速效能量物質(zhì)。
[0019] 優(yōu)選地，所述速效能量物質(zhì)為葡萄糖或乳糖。
[0020] 優(yōu)選地，所述保護(hù)劑為海藻酸鈉和甘油的混合物，或者脫脂牛奶。
[0021] 優(yōu)選地，所述海藻酸鈉和甘油的質(zhì)量比是1:1。
[0022] 優(yōu)選地，所述滅活方法可以是冷凍滅活、熱滅活或者化學(xué)滅活。
[0023] 本發(fā)明所述滅活的乳酸菌微生態(tài)制劑擁有與活的微生態(tài)制劑相同的功效，盡管乳 酸菌發(fā)酵后經(jīng)過滅活處理，滅活的乳酸菌細(xì)胞不僅能高效粘附到人和動物的腸道上皮細(xì) 胞，發(fā)揮保護(hù)作用，而且還具有活的微生態(tài)制劑沒有的優(yōu)點(diǎn)：滅活的乳酸菌細(xì)胞耐高溫、耐 胃酸和耐膽汁，可與抗生素協(xié)同作用；另外，乳酸菌發(fā)酵過程產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物如乳酸、類細(xì) 菌素等能有效地抑制或殺滅人或動物的腸道致病菌；本發(fā)明所述的滅活乳酸菌微生態(tài)制劑 有效、經(jīng)濟(jì)地解決了目前困擾活菌類微生態(tài)制劑的問題。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 實(shí)施例1
[0025] 用于腸道疾病藥物中的乳酸菌微生態(tài)制劑，其組分為每公斤滅活的嗜酸乳桿菌微 生態(tài)制劑含有：滅活的嗜酸乳桿菌及其發(fā)酵產(chǎn)物550克，其中滅活的乳桿菌細(xì)胞含量為108 個/g，規(guī)格為80目的玉米芯粉和沉淀二氧化硅共450克，其中玉米芯粉和沉淀二氧化硅各 225克。在一噸全價料中的用量為2公斤。此組分比例和添加量可以用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。
[0026] 實(shí)施例2
[0027]實(shí)施例1所述用于腸道疾病藥物中的乳酸菌微生態(tài)制劑的制備方法，包括如下步 驟：
[0028]I)嗜酸乳桿菌先進(jìn)行菌種制備，菌種篩選培養(yǎng)基是以固體MRS培養(yǎng)基作為基本培 養(yǎng)基，加入0.l%CaC03，pH值為6.4。121°C滅菌20-30分鐘，冷卻至37°C，備用。2)嗜酸乳 桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)基是以液體MRS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，pH值為6. 4。121°C滅 菌20-30分鐘，冷卻至37°C，備用。種子菌齡12-18小時，接種量為3%-5%(V/V或V/W)。發(fā) 酵時間36-48小時，發(fā)酵溫度37°C，pH值維持在5. 5左右。
[0029] 3)在發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0. 1-0