一種甘木通總黃酮的制備方法及其在抗心肌缺血藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種抗心肌缺血的藥物，用于隱匿性冠心病、心絞痛、 心肌梗死、缺血性心肌病等心肌缺血性疾病的防治，具體地說(shuō)是一種甘木通總黃酮的制備 方法及其在抗心肌缺血藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。╟oronaryarterydisease,CAD)多為因冠狀動(dòng)脈病 變引起冠脈血流量減少與心肌需求不平衡，即心肌缺血，從而導(dǎo)致的心肌損害，臨床表現(xiàn)為 心絞痛、心肌梗死（myocardialinfarction,MI)、心律失常、粹死或心力衰竭，由此引起的 心臟病就是常說(shuō)的"冠心病"。冠心病不僅發(fā)病率高，還將導(dǎo)致的高致殘率和高病死率，是美 國(guó)死亡的頭號(hào)病因，在中國(guó)也是第三位致死性疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球死于心血管 疾病的人數(shù)將從2004年的1180萬(wàn)增加到2030年的1710萬(wàn)，而冠心病占所有疾病死因的 第一位，預(yù)計(jì)到2030年仍將占第一位，大約占14. 2%。
[0003]冠心病的治療在某種程度上取決于存活心肌細(xì)胞的多少，及缺血心肌血供的改 善。近年來(lái)，動(dòng)脈搭橋術(shù)、溶栓療法、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈血管成形術(shù)、體外循環(huán)心臟外科手術(shù)和心 肺腦復(fù)蘇術(shù)等手段的建立和推廣應(yīng)用，使得缺血心臟能在短時(shí)間內(nèi)重新獲得血液灌注并恢 復(fù)氧供應(yīng)。多數(shù)情況下，缺血后再灌注可使損傷的結(jié)構(gòu)得到修復(fù)，心功能恢復(fù)，病情好轉(zhuǎn)； 但有時(shí)不僅不能使心功能恢復(fù)，反而會(huì)加重心臟功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷。這種在心肌缺血基 礎(chǔ)上恢復(fù)血流后組織損傷加重、甚至發(fā)生不可逆性損傷的現(xiàn)象稱(chēng)為心肌缺血再灌注損傷 (myocardialischemia-reperfusioninjury，MIRI)。目前，如何減少M(fèi)IRI已經(jīng)成為心臟 血運(yùn)重建治療領(lǐng)域的一個(gè)新的挑戰(zhàn)，研發(fā)抗心肌缺血藥物也成為冠心病治療的研究熱點(diǎn)。
[0004] 甘木通ClematisfilamentosaDunn又名絲鐵線(xiàn)蓮，民間俗稱(chēng)"眼蛇藥"，為毛茛科 絲鐵線(xiàn)蓮屬植物。甘木通喜生于海拔500-1600m的溪邊、山谷的灌木叢中或密林，常攀緣于 其他植物之上，主要分布在廣東、廣西、福建、臺(tái)灣、云南、海南等地。
[0005] 甘木通以葉、莖入藥，味甘、性微寒，歸肝經(jīng)，具清肝火、寧心神、降血壓、通絡(luò)止痛 之功效。關(guān)于甘木通在心血管方面的藥理作用，已有相關(guān)報(bào)道：一、甘木通乙醇提取物不僅 能防止家兔實(shí)驗(yàn)性高脂血癥的形成，還能抑制動(dòng)脈粥樣硬化的形成；二、甘木通水煎劑對(duì)麻 醉狗急性降壓率為25. 6~40. 2%，麻醉大鼠降壓率21. 85%，增加離體兔心冠脈灌流量、提 高小鼠減壓缺氧耐力，對(duì)正常大鼠有顯著降甘油三酯作用；三、甘木通提取物通過(guò)提高自 由基清除能力對(duì)結(jié)扎家兔冠脈致心肌缺血發(fā)揮保護(hù)作用，通過(guò)提高抗氧化能力和抑制細(xì)胞 凋亡發(fā)揮抗心肌缺血作用等。甘木通廣泛分布于我國(guó)南方地區(qū)，在防治心血管方面的作用 確切，被認(rèn)為是一種無(wú)毒性，安全度大，及藥源豐富的防治冠心病和高血壓的植物藥。
[0006]以甘木通的水提取醇沉物為原料，生產(chǎn)的純中藥制劑冠心康片，是臨床應(yīng)用較廣 的心血管治療藥物。冠心康片具有清熱平肝，活血通脈之功效，用于肝經(jīng)有熱、肝陽(yáng)上亢、脈 絡(luò)瘀阻所致之頭痛眩暈、胸痹心痛，肢體麻木等癥，臨床多用于治療冠心病心絞痛、高血壓 等癥。臨床研究顯示，冠心康片治療冠心病心絞痛安全，臨床總有效率達(dá)78. 3%，能有效減 少減輕心肌缺血發(fā)作和改善缺血性心電圖改變。
[0007] 目前，關(guān)于甘木通在心血管方面作用的研究和臨床應(yīng)用，均為其提取物，其確切的 有效成分尚不清楚。甘木通的水提取物和醇提物，經(jīng)鹽酸鎂粉反應(yīng)、硝酸鋁反應(yīng)均呈陽(yáng)性， 提示甘木通含有黃酮類(lèi)成分。大量研究證實(shí)黃酮類(lèi)化合物具有抗心肌缺血、降血壓、抗心律 失常等功效，結(jié)合甘木通及其制劑的臨床應(yīng)用，甘木通中黃酮類(lèi)化合物是其有效成分之一。
[0008] 檢索中國(guó)期刊網(wǎng)，文獻(xiàn)報(bào)道的主要集中在甘木通提取物的藥理作用、提取方法及 提取物中黃酮的含量測(cè)定三方面。中國(guó)專(zhuān)利檢索有兩項(xiàng)報(bào)道。專(zhuān)利CN102389468A描述了 一種含甘木通冠心康制劑及其制備方法，以甘木通水提取醇沉的稠膏，或乙醇提取的稠膏 為原料，加輔料制備成藥物制劑，并采用高效液相法建立了制劑中山奈素的含量測(cè)定方法。 專(zhuān)利CN102426207A描述了一種甘木通黃酮類(lèi)成分的檢測(cè)方法及應(yīng)用，以含山柰素為對(duì)照 品溶液，采用高效液相色譜法對(duì)甘木通黃酮類(lèi)成分進(jìn)行定性和/或定量分析。而市售的甘 木通單方制劑"冠心康片"，執(zhí)行《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十四冊(cè)》WS3-B-2759-97 標(biāo)準(zhǔn)，采用甘木通的水提取醇沉物為原料。
[0009] 甘木通在治療冠心病、高血壓等方面有著良好的藥效作用，但目前關(guān)于甘木通的 研究和臨床應(yīng)用，均停留在其粗提取物上，其重要的藥效成分甘木通總黃酮，在提取物中含 量也不超過(guò)1. 〇%，含量低，既不利于其藥效的充分發(fā)揮，也不利益于其新藥新劑型的開(kāi)發(fā)。 本發(fā)明采用乙醇提取、層析分離、純化等工序，從甘木通藥材中制備高純度的甘木通總黃 酮，藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有良好的抗心肌缺血作用，可用于缺血性心血管藥物的開(kāi)發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0010] 本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究，提供一種甘木通總 黃酮的制備方法及其在抗心肌缺血藥物中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明針對(duì)當(dāng)前甘木通在的研究和臨床應(yīng)用中，均為其粗提取物的現(xiàn)狀，以甘木 通藥材為原料，利用大孔樹(shù)脂-硅膠層析耦合法富集作用，制得高純度的甘木通總黃酮。 為實(shí)現(xiàn)研究目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0012] 一種采用醇提水沉提取，或協(xié)同超聲波、微波、酶解提取，經(jīng)大孔樹(shù)脂-硅膠層析 二級(jí)分離技術(shù)，制得甘木通總黃酮的方法，其步驟如下：
[0013] (1)取甘木通地上部分，陰干，粉碎成粗粉，加入60%~90%乙醇，加熱回流提取 1~3次，過(guò)濾，合并濾液，濃縮至比重1. 13~1. 17,得甘木通浸膏；
[0014] (2)將甘木通浸膏以10~20倍量水分散均勻，放置沉淀Ih~12h，濾過(guò)，濾液濃 縮至比重1. 10~1. 15,得甘木通醇提水沉液；
[0015] (3)將所得甘木通醇提水沉液上大孔樹(shù)脂吸附柱，用水洗雜質(zhì)，再用5%~20%乙 醇洗雜質(zhì)，然后用50 %~80%乙醇洗脫，得甘木通總黃酮半成品洗脫液；
[0016] (4)將所得甘木通總黃酮半成品洗脫液上硅膠層析柱，用丙酮與甲醇的體積比為 1~3 : 1的混合物洗雜質(zhì)，再用丙酮與甲醇的體積比為5~7 : 1洗脫，得甘木通總黃酮 洗脫液；
[0017] (5)將所得總黃酮洗脫液經(jīng)純化處理，濃縮，減壓干燥，得甘木通總黃酮成品。
[0018] 所述的加熱回流提取為直接加熱回流提取，或協(xié)同超聲波、微波、酶解提取中的一 種，優(yōu)選協(xié)同提取法。所述的大孔樹(shù)脂選自HPD400、HPD100、DM-13、AB-8或DlOl等廣譜型 大孔樹(shù)脂中的一種，優(yōu)選DlOl型。樹(shù)脂吸附步驟采用濕法裝柱，保留液面，將甘木通醇提水 沉液通過(guò)吸附柱，收集洗脫液。所述的硅膠層析步驟采用濕法裝柱，保留液面，將半成品按 重量I: 1拌活化后硅膠，并將拌好的混合物移入硅膠柱，加洗脫機(jī)，收集洗脫液。硅膠活 化條件為110°c持續(xù)30min。所述的純化處理采用活性炭脫色、重結(jié)晶等步驟，按4g/100mL 總黃酮洗脫液加入活性炭，于25~40°C攪拌10~60分鐘，濾過(guò)；濾液回收混合溶劑后，濃 縮干燥得中間體；中間體用5~10倍乙醇熱溶，濾過(guò)；濾液放涼析出結(jié)晶，抽濾得甘木通總 黃酮成品。