用于獲得植物提取物和級分的方法、藥物組合物及其用圖
【專利說明】用于獲得植物提取物和級分的方法、藥物組合物及其用途 發(fā)明領域
[0001] 本發(fā)明描述一種用于獲得提取物和植物級分的方法。更具體地，來自紅蔥 (Eleutherine plicata)的乙醇提取物中的富含萘醌的二氯甲焼級分^本發(fā)明包括這種級 分的獲得方法以及一種萘醌的鑒定。分析所述萘醌并且它展示抗瘧原蟲活性、特別地對抗 耐氯喹的惡性皰原蟲（Plasmodium falciparum)(克隆W2) 〇 現有技術
[0002] 紅蔥（E. Plicata)是美洲（包括巴西亞馬遜的干旱田野）熱帶天然植物，俗稱 瑪魯巴茲諾（marupazinho)、瑪魯巴利（marupari)、巴姆梅林亞（palmeirinha)、扣奎因 紐（coquinho)、瑪魯派伊（marupai)、瑪魯博（marupaii)、瑪魯巴比蘭戈（marupdi-piranga) 和麗魯福里阿德巴姆梅拉（lirio-folha-de-palmeira) D沿途植物調查在美里河口 縣（PA，巴西）通過半結構化采訪進行并證實紅蔥（marupazinho)的用途D來自這 個地區(qū)的人使用由其鱗莖制成的茶治療腹瀉、阿米巴病、腸道感染、肝病、出血和貧 血(PINTO, L. N. Plantas medicinais utilizadas em comunidades do municlpio de Igarape-Miri/PA:etnofarmacia do Municlpio de Igarape-Miri/PA. 2008. 98f. Master thesis-Programa de Pos- graduagSo em Ciencias Farmaceuticasj Universidade Federal do Pardi，Par02008(PINT0，LN.在 Igarap6_Miri/PA 用于市政社區(qū)的藥用植物： etnofarmdicia城市Igarap6，Miri/PA. 2008. 98f.碩士論文-醫(yī)藥科學研究生項目，帕拉州 聯邦大學，帕拉州2008年））。
[0003] 從紅蔥屬（Eleutherine)諸物種分離萘醌，其中來自這個類別的物質已經展 示抗瘧活性。有效抗瘧原蟲的活性萘醌的例子是阿托伐醌（atovacona)，結構上與黃 鐘花醌（一種在黃鐘木屬（Tabebuia)(包括ipgs的屬，南美洲存在的樹）諸物種中常 見的異戊烯基萘醌）相關的合成萘醌（MIRAGLIA，M.C.M. Estudo quimico de Tabebuia serratifolia(Vahl.) Nichols (Bignoniaceae) e slntese de piranonaftoquinonas, fura nonaftoquinonas e antraquinonas.1991.326p. (MIRAGLIA，M.C.M.尼科爾斯（紫葳科） 的Tabebuia serratifolia(Vahl.)的化學研究以及吡喃萘醌、咲喃萘醌和蒽醌的合成 1991 第 326 頁）Tese (Doutorado. Departamento de Quimica), Universidade Federal de Minas Gerais，Minas Gerais.，1991(博士論文，化學系，米納斯吉拉斯州聯邦大學，巴西， 1991))。阿托伐醌抑制在寄生蟲中催化尿苷單磷酸合成的二氫乳酸脫氫酶（diidroorotate desidrogenase)〇
[0004] 值得注意的是許多萘醌，例如從紅蔥分離的一種萘醌，尚未在惡性瘧原蟲中評 價D已經從紅蔥分離紅蔥甲素（eleuterol)和紅蔥丙素（isoeleutherine) (MALHEIR0S，L C. S. Isoeleutherol and Isoeleutherine:oeleuteroI e IsoeIeuterina:Potenciais marcadores qulmicos da tintura de Eleutherine plicata Herb. (Iridaceae) e atividades microbiologica e antioxidante Master thesis-Programa de Pos- gradua^So em Ciencias Farmaceuticasj Universidade Federal do Pardi，Par02008(MALHEIR0S，L.C.S·異艾植腦和紅蔥丙素：對紅蔥 Eleutherine plicata Herb.浸提物（鳶尾科）潛在的化學指標以及微生物活性和抗氧化活性碩士論文-醫(yī)藥科 學的研宄生項目，帕拉州聯邦大學，2008年帕拉））。然而，乙醇提取物和其級分的抗瘧原蟲 活性首次由Edinilza Borges的碩士論文評價，并且它非常有前景。
[0005] 從紅蔥鱗莖獲得的乙醇提取物及其級分通過HRP-II技術（N0EDL等人，2002)接 受抗瘧原蟲活性檢驗。在瓊脂上的擴散分析中，濃度500 μ g/mL的乙醇提取物和二氯甲 烷級分及乙酸乙酯級分在金黃色葡萄球菌（S. aureus)中有活性。在另一方面，甲醇級分 在任何細菌（金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa)和大腸桿菌 (Escherichia coli))以及真菌（白假絲酵母（Candida albicans))中沒有活性。活性提 取物和級分接受微量稀釋檢驗，乙醇提取物的抑制濃度（MIC)是500 μ g/ml，乙酸乙酯級分 的MIC是250 μ g/ml并且二氯甲烷級分的MIC是125 μ g/ml。因此，分級改善抗微生物活 性，二氯甲烷級分是最有有活性的級分并富含萘醌。為了評估潛在殺細菌劑，提取物和級分 接受微量稀釋檢驗，隨后進行傳代培養(yǎng)，其中最低殺細菌濃度（MBC)高于1000 μ g/ml，顯示 其抗微生物活性屬于抑菌類型。
[0006] 從紅蔥鱗莖獲得的乙醇提取物接受鹵蟲（A. salina)毒性測定法，計數活動物和 死動物。在24小時后，Probitos分析法用來獲得LD5tl值及其置信區(qū)間（MEYER等人，1982)， 產生以下結果（1000 μ g/mL>LD5(l)，這表明這種提取物在鹵蟲中具有低毒性。鹵蟲中的毒性 檢驗是一項廣泛使用的生物檢驗，因為它快速、可靠、成本低并且顯示與多種生物活性的良 好相關性（MEYER等人，1982)。
[0007] 專利申請 JP20080020163 20080131 (A61K31/708 ;國際分類：A61P35/00 ; C07H1704 ;A61K36/18)描述了分離紅蔥狗尾草（Eleutherine palmifolia)(鸞尾科 (Iridaceae))的甲醇提取物的刺五加苷A。該化合物可用于治療癌癥。
[0008] 專利申請 CN20051119690 20051128(國際分類：A61K36/28 ;A61K36/748 ; A61P19/00 ;A61P29/00 ;C12G3/02)描述了紅蔥對類風濕性關節(jié)炎、風濕性關節(jié)炎、風濕性 休眠 （rheumatic dormancy)和肌痛、軟組織挫傷和創(chuàng)傷損傷的活性。
[0009] 專利申請 JP20050153747 20050526(國際分類：A23L1/30 ;A61K36/00 ; A61K36/18 ;A61K36/81 ;A61P25/00 ;A61P3/02)提供一種新的疲勞恢復劑，其特征在于 存在至少一個紅蔥屬植物物種（鸞尾科（Iridaceae))、前屬（Solanum)植物物種（前 科（Solanaceae))、桉屬（Eucalyptus)植物物種（桃金娘科（Myrtaceae))、黃鐘木屬 (Tabebuia)植物物種（紫葳科（Bignoniaceae))和/或該植物的提取物作為有效成分。
[0010] 專利申請 JP20040071888 20040315/ 申請 TO 2005JP04415 20050314(國際分 類：A23L1/30 ;A61K36/00 ;A61K36/185 ;A61K36/47 ;A61K36/48 ;A61K36/53 ;A61K36/77 ; A61K36/85 ；A61K36/88 ；A61P13/08 ；A61P43/00 ；C12N9/99 ； (IPC1-7) ：A23Ll/30 ； A61K35/78 ;A61P13/08 ;A61P43/00 ;C12N9/99 以及歐洲分類：A23L1/30B ;A61K36/185 ; A61K36/47 ;A61K36/48 ;A61K36/53 ;A61K36/77 ;A61K36/85 ;A61K36/88)意在提供一種新 的睪酮5-α -還原酶抑制劑和一種用于抑制前列腺肥大的組合物。這種產品必須含有一 種或多種屬于以下屬的植物：異木患屬（Allophylus)、猴耳環(huán)屬（Archidendron)、紫礦屬 (Butea)、山菅屬（Dianella)、紅蔥屬、風吹楠屬（Horsfieldia)、泡花樹屬（Meliosma)、雞 腳參屬（Orthosiphon)、葉下珠屬（Phyllanthus)、五層龍屬（Salacia)和牡荊屬（Vitex)。
[0011] 專利申請 JP20020266273 20020912(國際分類：A23L1/30 ;A23L2/38 ;A23L2/52 ; A61K36/00 ；A61K36/02 ；A61K36/18 ；A61K36/81 ；A61P3/04 ； (IPC1-7) ：A23Ll/30 ； A23L2/38 ;A23L2/52 ;A61K35/78 ;A61K35/80 ;A61P3/04)旨在提供一種用于減少植物脂肪 的有效預防和治療肥胖癥和相關疾病的食品和飲料。這種食品由藻類、植物或提取物（黃 鐘木屬、紅蔥屬、茄屬、桃金娘科和桉屬）組成。
[0012] 除這些文獻之外，還值得提到的是，紅蔥位列國家公共衛(wèi)生體系（巴西）藥用植物 名錄中，但是不存在常規(guī)用于瘧疾和發(fā)熱疾病的主張。
[0013] 來自現有技術的問題
[0014] 惡性瘧原蟲已經迅速獲得針對可用藥物的抗性。氯喹廣泛用于治療惡性瘧疾并且 使用氯喹的理由是：該藥物具有低毒性并且是經濟可行的。
[0015] 歸因于寄生體對氯喹的抗性日益增長，必需引入新藥物，如青蒿