[0030] 2.凝膠劑的制備： 主藥配方： L 00%ΑΖΜ 凝膠配方 100.0 mg AZM 0· 50%AB 凝膠配方 50.0 mg AB 0· 16%LMWH-Na 凝膠配方 16. Omg LMWH-Na 防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑配方100. 〇mg AZM+50.0 mg AB+16. Omg LMWH-Na 按上述配方分別精密稱取主藥，量取300.0 mg氮酮、200.0 mg丙二醇置于25ml燒杯中 加無水乙醇至2g溶解后加入8g凝膠基質(zhì)中，攪勻，分別制成1. 00%ΑΖΜ凝膠、0. 50%AB凝膠、 0. 16%LMWH-Na 凝膠、I. 00%AZM+0. 50%AB+0. 16%LMWH-Na 凝膠(透皮制劑）。
[0031] 實施例二隨意缺血感染皮瓣模型的制備 術(shù)前三天鼠背部用8%硫化鈉脫毛。戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉腹腔注射麻醉后 (0· 3ml/100g體重），大鼠俯臥位固定于手術(shù)臺上，設(shè)計10. 0mmX70.0 mm的隨意皮瓣，蒂距 尾端20. 0mm，術(shù)區(qū)碘伏常規(guī)消毒，沿設(shè)計線切開皮膚、肉膜達(dá)背部肌膜淺層，沿此層銳性分 離至皮瓣蒂部，徹底止血后用3/0絲線原位間斷縫合。
[0032] 將金黃色葡萄球菌和致病性大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株置于4°C培養(yǎng)箱中復(fù)活后，在無 菌操作臺內(nèi)挑2個菌落置于LB液體培養(yǎng)基中，恒溫振蕩搖床中緩慢振蕩增菌12h，用無菌生 理鹽水制成混懸液備用，全部菌液以McFarland標(biāo)準(zhǔn)管比濁計數(shù)細(xì)菌數(shù)量。
[0033] 在制作好的隨意皮瓣術(shù)畢即刻及術(shù)后24小時皮瓣下注射當(dāng)天配制的新鮮混合菌 懸液1.0 mL (其中含金黃色葡萄球菌I X IO9個/mL，大腸埃希菌I X IO9個/mL)。于注射后 3天可見皮瓣紅腫并出現(xiàn)膿性分泌物，細(xì)菌分離培養(yǎng)、鑒定為金黃色葡萄球菌和致病性大腸 埃希菌，即為隨意缺血感染皮瓣模型構(gòu)建成功。
[0034] 實施例三大鼠血漿及皮瓣組織內(nèi)AZM、AB含量的檢測 I. AZM、AB含量測定方法的構(gòu)建 (1)色譜條件色譜柱：Luna C18柱（250 X 4. 60mm，5 μ m);流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液 (0.02111〇1噸-1磷酸二氫鉀，用1111〇1噸-1氫氧化鈉調(diào)至？!18.0)(55 :45);流速：1.01111^1^11-1; 柱溫：30°C ;檢測波長：210nm ;進(jìn)樣量：20 μ L。
[0035] (2)對照品溶液的制備分別精密稱取ΑΖΜ30.0 mg，ΑΒ20.0 mg，用乙腈溶解并定容在 10.0 mL容量瓶中，得到濃度為2000 μ g · ml/1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，待用。
[0036] (3)系統(tǒng)適用性試驗在規(guī)定色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液，樣品溶液，生 理鹽水20. 0 μ L，注入HPLC儀，色譜圖見圖1。由圖可知，AB的出峰時間為6. 82min，AZM出 峰時間為13. 36min。樣品中AZM、AB和其他干擾物質(zhì)分離良好，不會干擾兩種成分的測定， 因此該方法專屬性符合測定要求。
[0037] (4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，加乙腈配制得到AZM質(zhì)量濃度 為 300、150、75、37· 5、18· 8、9· 4、4· 7μ g · mL-1，AB 質(zhì)量濃度為 200、100、50、25、12· 6、6· 2、 3. 2μ g · ml/1的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液，加入200μ L生理鹽水，按"對照品溶液的制備"項下處 理后取20 μ L進(jìn)樣，分別以AZM和AB的濃度C為橫坐標(biāo)，所測得的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行 線性回歸，所得的AZM線性回歸方程為Y=I. 540Χ+7. 711，R=O. 99933 ;AB線性回歸方程為 ￥=7.686父+1.070，1?=0.99970。結(jié)果表明，六2]\1在4.7~30(^8*11117 1范圍內(nèi)，六8在3.2~ 200 μ g · ml/1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
[0038] (5)精密度分別配制AZM和AB質(zhì)量濃度為150 μ g · ι?Γ1和100 μ g · ι?Γ1標(biāo)準(zhǔn)溶 液，按"對照品溶液的制備"項下處理，于一日內(nèi)不同時間點進(jìn)樣5次，將所測得的峰面積代 入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，計算濃度，并算得AZM和AB的精密度的RSD值分別為3. 82%和1. 61%。 該方法所測定的AZM和AB在樣品中的精密度RSD值均小于5%，符合測定要求。
[0039] (6)回收率配制AZM和AB質(zhì)量濃度為150 μ g · ι?Γ1和100 μ g · ι?Γ1標(biāo)準(zhǔn)溶液5 份，按"對照品溶液的制備"項下處理，在規(guī)定項下色譜條件下，進(jìn)行測定，記錄峰面積，代入 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算AZM和AB的實際濃度，并算得回收率，結(jié)果見表1。AZM、AB平均回收率 大于95%，符合生物樣品測定要求。
[0040] 表1 AZM和AB回收率試驗結(jié)果
【主權(quán)項】
1. 一種防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑，其特征在于：該制劑含有阿奇霉素（AZM)、 氨氯地平（AB)、低分子肝素鈉（LMWH-Na)、水凝膠基質(zhì)。
2. 如權(quán)利要求1所述的防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑，其特征在于：所述水凝膠 基質(zhì)是羧甲基纖維素鈉凝膠基質(zhì)。
3. 如權(quán)利要求2所述的防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑，其特征在于：所述羧甲基 纖維素鈉凝膠基質(zhì)制備方法如下，取羧甲基纖維素鈉，用無水乙醇分散，加蒸餾水，攪拌均 勻后密封、放置過夜、使其充分溶脹，制成水凝膠基質(zhì)。
4. 如權(quán)利要求1所述的防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑，其特征在于：所述AZM濃 度為 1. 00%m/m，所述AB濃度為 0. 50%m/m，LMWH-Na濃度為 0. 16%m/m。
5. 如權(quán)利要求2所述的防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑，其特征在于：所述羧甲基 纖維素鈉凝膠基質(zhì)濃度為80. 00%m/m。
6. 如權(quán)利要求1-5任一項所述的防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑，其特征在于：所 述制劑還含有氮酮和丙二醇。
7. 如權(quán)利要求6所述的防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑，其特征在于：氮酮濃度為 3. 00%m/m，丙二醇濃度為 2. 00%m/m。
8. -種防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑的制備方法，其特征在于：精密稱取主藥 AZM、AB、LMWH-Na，精密量取氮酮和丙二醇置于燒杯中加無水乙醇至溶解后加入凝膠基質(zhì) 中，攪拌均勻，即得防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑。
9. 如權(quán)利要求8所述的一種防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑的制備方法，其特征在 于：所述水凝膠基質(zhì)是羧甲基纖維素鈉凝膠基質(zhì)，制備方法為取羧甲基纖維素鈉，用無水乙 醇分散，加蒸餾水，攪拌均勻后密封、放置過夜、使其充分溶脹，制成水凝膠基質(zhì)。
10. 如權(quán)利要求8所述的一種防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑的制備方法，其特征 在于：所述AZM濃度為1. 00%m/m，所述AB濃度為0. 50%m/m，LMWH-Na濃度為0. 16%m/m， 羧甲基纖維素鈉凝膠基質(zhì)濃度為80. 00%m/m，氮酮濃度為3. 00%m/m，丙二醇濃度為2. 00% m/m〇
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種防治皮瓣感染缺血壞死的透皮制劑及其制備方法。本發(fā)明包含阿奇霉素（AZM）、氨氯地平（AB）、低分子肝素鈉（LMWH-Na）和水凝膠基質(zhì)等成分。本發(fā)明通過合理組方和優(yōu)化制備方法，優(yōu)選三種主藥的最適濃度，解決了三種主藥競爭皮膚滲透通道和大分子的LMWH-Na不易經(jīng)皮滲透的問題，制備出的透皮制劑，克服了口服或靜脈注射等全身用藥、皮瓣下置管間斷給藥或一次性注射等局部用藥藥物難以到達(dá)缺血皮瓣局部，而血漿濃度相對較高，極易出現(xiàn)全身性不良反應(yīng)等缺點，能夠維持皮瓣局部穩(wěn)定的有效藥物濃度，提高皮瓣成活面積，而全身作用小，克服了防治皮瓣感染缺血壞死方面現(xiàn)有治療方法的缺陷。
【IPC分類】A61K9-06, A61K31-7052, A61P31-04, A61K31-4422, A61K47-38, A61K31-727, A61P17-02, A61P9-10
【公開號】CN104784200
【申請?zhí)枴緾N201410020707
【發(fā)明人】張選奮, 秦永紅, 張曈, 焦陽
【申請人】蘭州大學(xué)
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2014年1月17日