>[0035] 實(shí)施例2
[0036] (1)將鰹魚（500kg)去頭、去內(nèi)臟，清洗干凈，過(guò)絞肉機(jī)絞碎，加入1000 kg水，在 100°C下攪拌加熱lOmin，得到鰹魚肉漿，然后溫度降至50°C。
[0037] (2)往鰹魚肉漿內(nèi)加入7. 5kg的木瓜蛋白酶，在50°C下保溫水解5小時(shí)，然后在 95°C下加熱15min進(jìn)行滅酶，最后離心，取上清液，得到鰹魚酶解粗液；
[0038] (3)往鰹魚酶解粗液中加入其質(zhì)量8kg的活性炭，在50°C下保溫?cái)嚢鐸. 0小時(shí)，然 后通過(guò)0. 5 μ m濾紙過(guò)濾，所得濾液為鰹魚酶解精制液。
[0039] (4)將鰹魚酶解精制液真空濃縮至固形物30%，進(jìn)行噴霧干燥，得鰹魚提取物 B40kg〇
[0040] 經(jīng)MALDI-TOF-MS質(zhì)譜確定其主要肽功效組分的分子量均小于lOOODa。
[0041] 實(shí)施例3
[0042] (1)將鰹魚（500kg)去頭、去內(nèi)臟，清洗干凈，過(guò)絞肉機(jī)絞碎，加入500kg水，在 100°C下攪拌加熱10min，得到鰹魚肉漿，然后溫度降至50°C。
[0043] (2)往鰹魚肉漿內(nèi)加入7. 5kg的Alcalase酶，在50°C下保溫水解5小時(shí)，然后在 95°C下加熱15min進(jìn)行滅酶，最后離心，取上清液，得到鰹魚酶解粗液；
[0044] (3)往鰹魚酶解粗液中加入其質(zhì)量8kg的活性炭，在50°C下保溫?cái)嚢?. 0小時(shí)，然 后通過(guò)0. 5 μ m濾紙過(guò)濾，所得濾液為鰹魚酶解精制液。
[0045] (4)將鰹魚酶解精制液真空濃縮至固形物30%，進(jìn)行噴霧干燥，得鰹魚提取物 C60kg〇
[0046] 經(jīng)MALDI-TOF-MS質(zhì)譜確定其主要肽功效組分的分子量均小于1000Da。
[0047] 實(shí)施例4
[0048] (1)將鰹魚（500kg)去頭、去內(nèi)臟，清洗干凈，過(guò)絞肉機(jī)絞碎，加入500kg水，在 100°C下攪拌加熱lOmin，得到鰹魚肉漿，然后溫度降至50°C。
[0049] (2)往鰹魚肉漿內(nèi)加入2. 5kg的Alcalase酶和5kg的水解蛋白酶，在50°C下保溫 水解5小時(shí)，然后在95°C下加熱15min進(jìn)行滅酶，最后離心，取上清液，得到鰹魚酶解粗液；
[0050] (3)往鰹魚酶解粗液中加入8kg的活性炭，在50°C下保溫?cái)嚢鐸. 0小時(shí)，然后通過(guò) 0. 5 μ m濾紙過(guò)濾，所得濾液為鰹魚酶解精制液。
[0051] (4)將鰹魚酶解精制液真空濃縮至固形物30%，進(jìn)行噴霧干燥，得鰹魚提取物D 60kg〇
[0052] 經(jīng)MALDI-TOF-MS質(zhì)譜確定其主要肽功效組分的分子量均小于5000Da。
[0053] 實(shí)施例5
[0054] 重量份配比：土茯苓18、菊苣13、車前草10、薏苡仁17、葛根7、澤瀉3、實(shí)施例4所 述鰹魚提取物DO. 3,制備出具有降尿酸功能的保健食品。
[0055] 將本發(fā)明上述實(shí)施例所制備鰹魚提取物A、B、C和D進(jìn)行動(dòng)物測(cè)試。
[0056] 由于大鼠和人類共享90 %的基因，全球范圍內(nèi)，大鼠在人體生理和疾病研宄過(guò)程 中是公認(rèn)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。在降尿酸功效?yàn)證實(shí)驗(yàn)中，由于大鼠體內(nèi)存在尿酸酶，會(huì)在代謝過(guò)程 中降解尿酸，因此，本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是通過(guò)給大鼠每天灌胃氧嗪酸鉀，阻斷老鼠體內(nèi)尿酸酶的作 用，使大鼠的血液內(nèi)尿酸水平增加，并將尿酸含量高于IlOumol · Γ1的大鼠確定為造模成 功，再進(jìn)行灌藥實(shí)驗(yàn)。
[0057] 取SPF級(jí)SD大鼠72只，雄性，體重200 ± 20(g)，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提 供（許可證號(hào)：SCXK(粵）2013-0020)。試劑：別嘌醇片（廣東彼迪藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)： 國(guó)藥準(zhǔn)字H44021368);氧嗪酸鉀（山東中科泰斗化學(xué)有限公司，批號(hào)！Batch No. 120901); 羧甲基纖維素鈉（上海賽璐珞廠，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：GB2760);尿酸、尿素氮（BUN)檢測(cè)試劑盒 (南京建成生物工程研宄所，生產(chǎn)批號(hào)：20140306)。
[0058] 動(dòng)物分組與造模：造模組大鼠胃灌胃氧嗪酸鉀一周（每天一次），利用3%戊巴 比妥鈉（30mg · kg4)腹腔注射麻醉，眼眶后靜脈叢采血（0· 5ml)，以4°C、3000rpm、離心 15min，取上層血清測(cè)定尿酸含量；正常對(duì)照組大鼠灌胃給予等容積的溶媒。將尿酸含量高 于110 μπιο? 的大鼠確定為造模成功。將造模成功的大鼠按尿酸含量隨機(jī)分6組，每組 大鼠12只，正常組1組，模型組1組（等容積蒸餾水）及鰹魚肽4組，鰹魚肽組分別以Α、Β、 C、D鰹魚提取物灌胃，灌胃給藥容積10ml/kg，模型組給予等容積的蒸餾水。上述樣品處理 7d、14d時(shí)，于末次給藥50min，3%戊巴比妥鈉（30mg*kg，腹腔注射麻醉后，眼眶后靜脈叢 取血（0. 5ml)，測(cè)定血清尿酸含量；樣品處理第21d時(shí)，3%戊巴比妥鈉麻醉后腹主動(dòng)脈取血 5ml，測(cè)定血清尿酸含量。血清尿酸測(cè)定：采用鎢酸法并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作和測(cè) 定。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均以(；又士S >表示，采用spssie. 0統(tǒng)計(jì)軟件處理。
[0059] 結(jié)果如表1和表2所示，由表1可見(jiàn)，抗痛風(fēng)肽在模型動(dòng)物處理前后，各組大鼠體 重之間未見(jiàn)明顯差異。給藥前，大鼠的體重相當(dāng)，結(jié)果具有可比性。
[0060] 表1抗痛風(fēng)肽對(duì)氧嗪酸鉀誘致高尿酸血癥大鼠體重變化的影響（：±s)
[0061]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有降尿酸功效的鰹魚提取物的制備方法，其特征在于，包括： ⑴將鰹魚去頭、去內(nèi)臟，絞碎，加入鰹魚碎肉重量1~2倍的水，在80~100°C下攪拌 加熱20~30min，然后溫度降至50~60°C，得到鰹魚漿液； (2) 向所述鰹魚漿液加入所述鰹魚碎肉重量1. 6~3. 2%的蛋白酶，在50~55°C下保 溫水解6~9h，然后加熱至85~95°C，保溫15~30min滅酶，離心，得到上清液，為酶解粗 液； (3) 向所述酶解粗液中添加所述酶解粗液重量0. 5~1. 0%的活性炭，45~55°C溫度 下攪拌0. 5~I. 0小時(shí)，0. 5ym濾紙過(guò)濾，得到酶解精制液； (4) 將所述酶解精制液真空濃縮，噴霧干燥，得到鰹魚提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述蛋白酶為中性蛋白酶、風(fēng)味蛋白 酶、木瓜蛋白酶、Alcalase酶和水解蛋白酶中的一種或多種。
3. -種具有降尿酸功效的鰹魚提取物，其特征在于，所述鰹魚提取物由權(quán)利要求1-2 所述的方法制備得到。
4. 權(quán)利要求3所述的鰹魚提取物在保健品或食品中的應(yīng)用。
5. 含有權(quán)利要求3所述的鰹魚提取物的保健品或食品。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的保健品，其特征在于，所述保健品的劑型為口服液、膠囊劑、 片劑、丸劑、散劑、粉劑或顆粒劑。
7. 如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述鰹魚提取物在所述保健品或食品中的 重量百分比為〇. 5%~70%。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種具有降尿酸功效的鰹魚提取物的制備方法及其應(yīng)用，工藝操作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、無(wú)污染，所制備的鰹魚提取物降尿酸活性強(qiáng)，高尿酸血癥的治療效果明顯，無(wú)毒副作用。本發(fā)明實(shí)施例方法包括：鰹魚預(yù)處理制得鰹魚漿液，鰹魚漿液酶解得到酶解粗液，脫腥去苦、活性炭除雜、過(guò)濾得到酶解精制液，真空濃縮，噴霧干燥，得到鰹魚提取物。本發(fā)明還公開(kāi)了鰹魚提取物在保健品或食品中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K35-60, A23L1-29, A61P19-06, A23L1-327
【公開(kāi)號(hào)】CN104784210
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510221993
【發(fā)明人】施斌, 郭曉蕾, 馬忠華, 張婷, 張薇
【申請(qǐng)人】無(wú)限極（中國(guó)）有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月22日
【申請(qǐng)日】2015年4月30日