對萼獼猴桃葉總黃酮提取物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種對萼獼猴桃葉總黃酮提取物及其 制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 心肌缺血是指各種原因引起的冠狀動脈血流量降低，致使心肌氧等物質(zhì)供應(yīng)不足 和代謝產(chǎn)物清除減少的臨床狀態(tài)。臨床顯示，引起心肌缺血最主要、最常見的病因是冠狀動 脈（偶見肺動脈）狹窄，而引起冠狀動脈狹窄的主要原因是動脈粥樣硬化，冠狀動脈粥樣硬 化引起的心臟病即為冠心病，因此可以說冠心病是心肌缺血的"罪魁禍?zhǔn)?。心肌缺血對心 臟和全身都可能帶來許多不利影響。氧是心肌細(xì)胞活動必不可少的物質(zhì)，而氧是通過血液 輸送給細(xì)胞的。缺氧的直接后果是心肌細(xì)胞有氧代謝減弱，產(chǎn)能減小，使心臟活動時必需的 能量供應(yīng)不足，引起心絞痛、心律失常、心功能下降。同時，代謝的廢物也不能被有效及時地 清除，易產(chǎn)生不利影響。缺血、缺氧、缺能量，最終會影響心臟的收縮功能。若有20%~25% 的心肌停止收縮，通常會出現(xiàn)左室功能衰竭；若有40%以上的心肌不能收縮，就會有重度 心泵功能衰竭。如果這種情況突然發(fā)生，就會出現(xiàn)非常危險的心源性休克。急性心肌梗死 就常與這種情況相關(guān)。因此治療抗心肌缺血藥物具有非常巨大的臨床需求，該類藥物研發(fā) 具有非常好的前景，蘊藏著巨大的經(jīng)濟和社會效益。
[0003] 對萼獼猴桃（Actinidia valvata Dunn)為獼猴桃科獼猴桃屬植物，又名鑷合獼 猴桃，主要分布于浙江、江西、江蘇等華東地區(qū)，其根入藥即為貓人參，臨床用于治療惡性腫 瘤，為華東地區(qū)常用抗腫瘤中藥。目前，僅見很少的關(guān)于貓人參化學(xué)成分、藥理作用的研宄 報道[張亞妮，劉嶺，凌昌全.貓人參有效部位對小鼠移植性腫瘤H22的抑制作用及機制 探討.中國中藥雜志，2006, 36(11) :918-920;陸胤，陳紹瑗，吳平，等.藥用植物貓人參 有效成分研宄（I)-無機元素分析.浙江大學(xué)學(xué)報，2004, 30 (2) : 185-188]。而對于對萼獼猴 桃葉則無藥用記載和研宄報道。近年來，發(fā)明人長期從事中藥學(xué)領(lǐng)域的研宄，對對萼獼猴桃 根（貓人參）進行了相關(guān)研宄[辛海量，吳迎春，徐燕豐，張亞妮，凌昌全.對萼獼猴桃 根與莖的比較研宄.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2008, 29 (3) : 298-302]，不僅如此，發(fā)明人還結(jié)合 系統(tǒng)開發(fā)思路，充分利用植物資源，對其葉也進行了深入研宄[Hai-Liang Xin, Ying-Chun Wuj Yong-Hua Suj Jia-Yu Shengj Chang-Quan Ling. Novel flavonoids from leaves of Actinidia valvata Dunn:structural elucidation and anti-oxidative activity. Planta medica，2011，77(1) :70-73 ;辛海量，蘇永華，凌昌全，吳迎春.對萼獼猴桃葉的高 效液相色譜指紋圖譜研宄.時珍國醫(yī)國藥，2011，22 (1) 15-17]。在對對萼獼猴桃葉的藥理 作用進行廣泛篩選的過程中，出人意料地發(fā)現(xiàn)從該植物中提取的新化學(xué)成分具有顯著的抗 心肌缺血作用，并對其化合物結(jié)構(gòu)、用途、制備方法申請了 3項專利（發(fā)明人：辛海量，凌昌 全，蘇永華，吳迎春，盛佳鈺，周俊，黃酮苷類化合物及制備方法和用途，ZL201010138085. 1 ; 發(fā)明人：辛海量，凌昌全，曲麗萍，蘇永華，李同明，對萼獼猴桃苷E、F在制備抗心肌缺血藥 物中的應(yīng)用，ZL201110271050.X ;發(fā)明人：辛海量，凌昌全，曲麗萍，蘇永華，從對萼獼猴桃 葉中分離制備高純度黃酮苷類化合物的方法，ZL201210022834. 3)。由于單體成分制備成本 高，工藝復(fù)雜，因此開展對萼獼猴桃葉提取物的研宄，以期獲得具有顯著抗心肌缺血作用的 活性提取物是十分必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明人在抗心肌缺血天然藥物、中藥篩選過程中，發(fā)現(xiàn)對萼獼猴桃葉具有較強的 抗心肌缺血作用，進而研宄了其活性提取物及其制備方法，經(jīng)分離鑒定表明此提取物含有 對山柰酚-3-0-a -L-鼠李糖基-(1 - 3) - a -L-鼠李糖基-(1 - 6) - β-D-吡喃半乳糖苷、 對萼獼猴桃苷Ε、對萼獼猴桃苷F等黃酮類成分。
[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種以對萼獼猴桃葉為原料制備的提取物及其制備方法， 以及該提取物在制備抗心肌缺血藥物及食品中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供了一種對萼獼猴桃葉總黃酮提取物，所述的對萼獼猴桃葉總黃酮提取 物的制備方法包括以下步驟：
[0007] (A)制備提取液
[0008] 將對萼獼猴桃葉原料用提取溶劑提取，合并，過濾，即得提取液；所述的提取溶劑 為體積分?jǐn)?shù)10% -95 %的乙醇或甲醇水溶液；
[0009] ⑶濃縮
[0010] 將上述提取液回收至無醇味，即得濃縮液；
[0011] (C)除雜
[0012] 將上述濃縮液過大孔樹脂吸附，用乙醇或甲醇水溶液洗去雜質(zhì)，再以洗脫劑洗脫 藥用部位，收集洗脫液；所述的大孔吸附樹脂型號選自HPD300、D101、AB-8、D1400、HPD100、 D860、DM301、DM1300、D4020、HPD500、DM130、HPD600、D520、D4006、D4006 和 H103 ;本步驟除 雜所用乙醇或甲醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)10% -95%的乙醇或甲醇水溶液；所述的洗脫劑為體 積分?jǐn)?shù)40% -95%乙醇或甲醇水溶液；
[0013] (D)干燥、粉碎
[0014] 將上述洗脫液濃縮、干燥、粉碎，即得所述的對萼獼猴桃葉總黃酮提取物。
[0015] 優(yōu)選地，所述的提取溶劑為體積分?jǐn)?shù)10% -80%的乙醇或甲醇水溶液；更優(yōu)選地， 所述的提取溶劑為體積分?jǐn)?shù)10% -60%的乙醇或甲醇水溶液；更優(yōu)選地，所述的提取溶劑 為體積分?jǐn)?shù)10 % -40 %的乙醇或甲醇水溶液；最優(yōu)選地，所述的提取溶劑為體積分?jǐn)?shù)40 % 的乙醇或甲醇水溶液?？紤]到有機溶劑殘留、生產(chǎn)中的安全因素以及生產(chǎn)成本因素，優(yōu)選的 提取溶劑為乙醇水溶液。
[0016] 步驟（A)的提取方式可以選擇常規(guī)熱回流提取、滲漉提取或浸泡提取，以及其他 藥學(xué)上可接受的提取方式。如熱回流提取可以選擇12倍、10倍、10倍，1. 5小時、1小時、1 小時，也可選擇其他可接受的提取溶劑用量、提取次數(shù)、提取時間。滲漉提取、浸泡提取可以 選擇5-100倍提取溶劑。
[0017] 步驟（B)的濃縮方式可以采用40-KKTC減壓濃縮、烘干濃縮以及其他藥學(xué)上可接 受的濃縮方式。優(yōu)選地，選用減壓濃縮的濃縮方式?？紤]到過高溫度可能對提取物中化學(xué) 成分穩(wěn)定性造成不良影響，優(yōu)選地，選用50-75°C溫度濃縮。
[0018] 優(yōu)選地，所述的大孔吸附樹脂型號選自HPD300、D101和AB-8 ;更優(yōu)選地，所述的大 孔吸附樹脂型號選自HPD300。
[0019] 優(yōu)選地，除雜所用乙醇或甲醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)10% -50%的乙醇或甲醇水溶 液；更優(yōu)選地，除雜所用乙醇或甲醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)10% -30%的乙醇或甲醇水溶液；最 優(yōu)選地，除雜所用乙醇或甲醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)20%的乙醇或甲醇水溶液。
[0020] 優(yōu)選地，所述的洗脫劑為體積分?jǐn)?shù)30% -70%乙醇或甲醇水溶液；更優(yōu)選地