一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于免疫疫苗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 弓形蟲(chóng)?。╰oxoplasmosis)是由剛地弓形蟲(chóng)（Toxoplasmagondii)感染引起的一 種普遍存在的人獸共患胞內(nèi)寄生蟲(chóng)病，可導(dǎo)致孕畜流產(chǎn)死胎、生產(chǎn)力低下，給畜牧業(yè)造成巨 大的經(jīng)濟(jì)損失。人類(lèi)如果誤食未煮熟的食物或接觸環(huán)境中的卵囊可導(dǎo)致感染。目前全世界 約有1/3的人患有弓形蟲(chóng)病，免疫正常的成年人多不出現(xiàn)明顯癥狀，但免疫功能低下或受 損者(如孕婦，器官移植者，HIV病人等）常常導(dǎo)致嚴(yán)重甚至致命的傷害。然而，由于弓形蟲(chóng) 生活史及其感染的復(fù)雜性，目前尚未有安全有效的藥物和疫苗來(lái)對(duì)抗弓形蟲(chóng)感染，因此研 制安全有效的弓形蟲(chóng)疫苗在人與動(dòng)物弓形蟲(chóng)病防控中具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明提供了一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑。
[0004] 本申請(qǐng)人研宄發(fā)現(xiàn)，CL097為T(mén)LR7/8受體的一種配體，可以作為激動(dòng)劑通過(guò)與相 應(yīng)的TLRs結(jié)合激活免疫細(xì)胞，并調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng)的強(qiáng)度，或改變反應(yīng)的類(lèi)型。而氫氧化 鋁佐劑（ImjectAlum)可以通過(guò)表面電荷效應(yīng)能夠高效地吸附CL097,在小鼠體內(nèi)可誘導(dǎo)出 抗弓形蟲(chóng)免疫應(yīng)答。因此，本發(fā)明中，采用ImjectAlum吸附制備含有5ygCL097/100yl， 制成佐劑"ImjectAlum+CL097"，并選用弓形蟲(chóng)疫苗 "PvAX-GRA16+PvAX-NF3" 與"Imject Alum+CL097"聯(lián)合使用進(jìn)行免疫效果評(píng)估。TLR7/8蛋白結(jié)構(gòu)較為保守，在人與小鼠體內(nèi)均 存在，能高效地誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生Thl型免疫應(yīng)答。CL097作為配體能夠刺激TLR7/8蛋白 產(chǎn)生Thl型免疫反應(yīng)。
[0005] 本發(fā)明提供一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑，所述藥劑是用氫氧化鋁佐劑吸附 TLR7/8激動(dòng)劑CL097制備而成的。
[0006] 優(yōu)選地，每100y1藥劑中所述CL097的含量大于0yg，小于等于5yg;作為優(yōu)選， 每100y1藥劑中含3-5yg的CL097 ;最優(yōu)選地，每100y1藥劑中含5yg的CL097。
[0007] 在藥劑中只要含有CL097,就能夠提升免疫疫苗的免疫效果，但是每IOOy1藥 劑CL097的含量需要小于等于5yg，否則作為免疫佐劑或疫苗使用后，小鼠會(huì)產(chǎn)生其他不 良反應(yīng)。每100y1藥劑中含3-5yg的CL097時(shí)，作為免疫佐劑或疫苗的效果較佳，當(dāng)每 100y1藥劑中含5yg的CL097時(shí)，作為免疫佐劑或疫苗的效果最好。
[0008] 進(jìn)一步地，所述藥劑中還包括緩沖液，所述緩沖液為PBS，所述PBS的含量小于等 于藥劑總體積的60% ;作為優(yōu)選，所述PBS的含量為藥劑總體積的40%-60% ;最優(yōu)選地，所述 PBS的含量為藥劑總體積的50%。
[0009] PBS的體積不能超過(guò)藥劑總體積的60%，PBS體積含量過(guò)高時(shí)，氫氧化鋁佐劑不能 被吸附，短時(shí)間內(nèi)會(huì)分層，導(dǎo)致沒(méi)有效果。在藥劑中也可以不加入PBS，此時(shí)藥劑也具有免疫 佐劑和免疫疫苗的功效，但是免疫后小鼠會(huì)有一些副作用。經(jīng)試驗(yàn)，當(dāng)PBS的含量為藥劑總 體積的40%-60%時(shí)，制備的藥劑在具有良好免疫佐劑和免疫疫苗功效的同時(shí)，不會(huì)產(chǎn)生不 良反應(yīng)；當(dāng)PBS的含量為藥劑總體積的50%時(shí)，制備的藥劑作為免疫佐劑和免疫疫苗的效果 最佳。
[0010] 進(jìn)一步地，所述藥劑的制備方法為：在常溫下溫育PBS和氫氧化鋁佐劑，再加入 TLR7/8激動(dòng)劑CL097,冰上吸附，完成免疫佐劑的制備。
[0011] 本發(fā)明還提供上述藥劑的制備方法，是在常溫下溫育PBS和氫氧化鋁混合液，再 加入TLR7/8激動(dòng)劑CL097,冰上吸附后完成免疫佐劑的制備。
[0012] 作為優(yōu)選，每100y1藥劑中所述CL097的含量大于0yg，小于等于5yg ;作為優(yōu) 選，每100y1藥劑中含3-5yg的CL097 ;最優(yōu)選地，每100y1藥劑中含5yg的CL097。
[0013] 進(jìn)一步地，所述PBS的含量小于等于藥劑總體積的60% ;作為優(yōu)選，所述PBS的含 量為藥劑總體積的40%-60% ;最優(yōu)選地，所述PBS的含量為藥劑總體積的50%。
[0014] 更進(jìn)一步地，是在常溫下將PH7. 4的PBS與50體積氫氧化鋁溫育30min，再加入 10體積CL097置于冰上吸附30min，完成免疫佐劑的制備。
[0015] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供上述藥劑在制備增強(qiáng)弓形蟲(chóng)疫苗免疫效果的免疫佐 劑中的應(yīng)用。
[0016] 優(yōu)選地，所述弓形蟲(chóng)疫苗為GRA16和NF3的聯(lián)合疫苗。
[0017] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供上述藥劑在制備增強(qiáng)弓形蟲(chóng)免疫預(yù)防的疫苗中的應(yīng) 用。
[0018] 本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供一種聯(lián)合疫苗，由GRA16、NF3和本發(fā)明的藥劑組成。
[0019] 本發(fā)明的藥劑作為免疫佐劑能夠增強(qiáng)弓形蟲(chóng)疫苗的免疫效果，并能夠單獨(dú)作為弓 形蟲(chóng)疫苗使用。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說(shuō)明書(shū)的一部分，與本發(fā)明的實(shí) 施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中： 圖1為弓形蟲(chóng)RH株在不同免疫情況下的存活時(shí)間折線(xiàn)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn) 方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。
[0022] 實(shí)施例1 本發(fā)明的一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑，它是用氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激動(dòng)劑CL097制備得到的，其吸附步驟為：常溫下40yIpH7. 4的PBS與50y1 ImjectAlum溫育30min，再加入IOyl含量為5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐劑的制備。使用時(shí)，用其注射小鼠腿部肌肉。氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)含量為40mg/ ml的氫氧化鋁與40mg/ml氫氧化鎂。
[0023] 實(shí)施例2 本發(fā)明的一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑，它是用氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激動(dòng)劑CL097制備得到的，其吸附步驟為：常溫下50yIpH7. 4的PBS與45yI ImjectAlum溫育30min，再加入IOyl含量為5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐劑的制備。使用時(shí)，用其注射小鼠腿部肌肉。氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)含量為40mg/ ml的氫氧化鋁與40mg/ml氫氧化鎂。
[0024] 實(shí)施例3 本發(fā)明的一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑，它是用氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激動(dòng)劑CL097制備得到的，其吸附步驟為：常溫下60yIpH7. 4的PBS與50y1 ImjectAlum溫育30min，再加入IOyl含量為5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐劑的制備。使用時(shí)，用其注射小鼠腿部肌肉。氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)含量為40mg/ ml的氫氧化鋁與40mg/ml氫氧化鎂。
[0025] 實(shí)施例4 本發(fā)明的一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑，它是用氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激動(dòng)劑CL097制備得到的，其吸附步驟為：常溫下50yIpH7. 4的PBS與40y1 ImjectAlum溫育30min，再加入IOyl含量為5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐劑的制備。使用時(shí)，用其注射小鼠腿部肌肉。氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)含量為40mg/ ml的氫氧化鋁與40mg/ml氫氧化鎂。
[0026] 實(shí)施例5 本發(fā)明的一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑，它是用氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激動(dòng)劑CL097制備得到的，其吸附步驟為：常溫下60yIpH7. 4的PBS與30y1 ImjectAlum溫育30min，再加入IOyl含量為5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐劑的制備。使用時(shí)，用其注射小鼠腿部肌肉。氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)含量為40mg/ ml的氫氧化鋁與40mg/ml氫氧化鎂。
[0027] 實(shí)施例6 本發(fā)明的一種用于弓形蟲(chóng)感染預(yù)防的藥劑，它是用氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激動(dòng)劑CL097制備得到的，其吸附步驟為：常溫下55yIpH7. 4的PBS與35y1 ImjectAlum溫育30min，再加入IOyl含量為5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐劑的制備。使用時(shí)，用其注射小鼠腿部肌肉。氫氧化鋁佐劑（ImjectAlum)含量為40mg/ ml的氫氧化鋁與40mg/