的Ab優(yōu)先結(jié)合至ALD#細(xì)胞。（圖23B)分別由PBS、僅RT、RT+ALD# -DC 或RT+ALDH? -DC療法引發(fā)的免疫上清液對(duì)ALDHs D5 CSC的結(jié)合的統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)合實(shí)驗(yàn)重 復(fù)3次。（圖23C)分別由PBS、僅RT、RT+ALD# -DC或RT+ALDH* -DC療法引發(fā)的免疫上清 液對(duì)ALDHte D5非CSC的結(jié)合的統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)合實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0038] 圖24示出CSC-DC疫苗引發(fā)的抗體通過補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性（⑶C)選擇性地靶 向CSC。通過用免疫B細(xì)胞的培養(yǎng)物上清液孵育作為靶的活A(yù)LDH s D5 CSC以及ALDHte D5 非-CSC來測(cè)量抗體和補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，所述免疫B細(xì)胞收集自微轉(zhuǎn)移D5黑素瘤模型 中（圖24A)或建立的D5模型中（圖24B)經(jīng)歷所示不同治療的小鼠。數(shù)據(jù)表示為活細(xì)胞 的百分比。較低的活細(xì)胞百分比意味著較高的細(xì)胞裂解。
[0039] 定義
[0040] 如本文所用，術(shù)語"受試者"是指任何動(dòng)物（例如，哺乳動(dòng)物），包括但不局限于人、 非人靈長(zhǎng)類、嚙齒類等（例如，其將成為具體治療的接受者，或者從其收集癌癌細(xì)胞的受試 者）。通常來說，除非本文另有說明，否則術(shù)語"受試者"和"患者"可互換使用。
[0041] 如本文所用，術(shù)語"疑似患有癌癥的受試者"是指呈現(xiàn)一種或多種指示癌癥的征兆 或癥狀（例如，明顯的腫塊或團(tuán)塊）的受試者，或者正在篩查癌癥（例如，在例行體檢中期 間）的受試者。疑似患有癌癥的受試者還可具有一種或多種風(fēng)險(xiǎn)因素。疑似患有癌癥的受 試者一般不針對(duì)癌癥進(jìn)行測(cè)試。然而，"疑似患有癌癥的受試者"涵蓋已經(jīng)接受了初步診斷 (例如，CT掃描示出團(tuán)塊）但尚未完成確證測(cè)試（例如，組織活檢和/或組織學(xué)）的個(gè)體， 或者癌癥階段未知的個(gè)體。該術(shù)語還包括曾經(jīng)患過癌癥的人（例如，處于緩解期的個(gè)體）。 "疑似患有癌癥的受試者"有時(shí)被診斷為患有癌癥，而有時(shí)被發(fā)現(xiàn)未患癌癥。
[0042] 如本文所用，術(shù)語"經(jīng)診斷患有癌癥的受試者"是指經(jīng)測(cè)試并發(fā)現(xiàn)具有癌細(xì)胞的受 試者?？墒褂萌魏魏线m的方法來診斷癌癥，包括但不限于組織活檢、X-射線、血液試驗(yàn)以及 本發(fā)明的診斷方法。"初步診斷"是基于僅視覺上（例如，CT掃描或存在腫塊）和抗原測(cè)試 的診斷。
[0043] 如本文所用，術(shù)語"有效量"是指足以實(shí)現(xiàn)有益的或期望的結(jié)果的組合物或治療的 量。可在一次或多次施用、施加或給藥中施用有效量，并且不意圖將有效量限制于特定的制 劑或施用途徑。
[0044] 如本文所用，術(shù)語"施用"是指將癌干細(xì)胞疫苗（例如，經(jīng)脈沖的抗原呈遞細(xì)胞） 藥物、藥物前體或其他試劑或者治療性治療給予受試者的行為。施用至人體的示例性途徑 可為通過眼（經(jīng)眼）、口（經(jīng)口）、皮膚（經(jīng)皮）、鼻（經(jīng)鼻）、肺（吸入劑）、口腔黏膜（經(jīng)口 腔）、耳、通過注射（例如，靜脈內(nèi)、皮下、瘤內(nèi)、腹膜內(nèi)等）等。
[0045] "共施用"是指將多于一種化學(xué)試劑或治療性治療（例如，放射療法）施用至生理 系統(tǒng)（例如，受試者或者體內(nèi)、體外或離體細(xì)胞、組織和器官）。各化學(xué)試劑以及治療性治療 (例如放射療法）的"共施用"可為同時(shí)的，或者以任何時(shí)間順序或物理組合。
[0046] 如在經(jīng)富集的細(xì)胞群體中，可基于經(jīng)分級(jí)的細(xì)胞組中具有特定標(biāo)志物的細(xì)胞數(shù)比 未經(jīng)分級(jí)的細(xì)胞組中具有該標(biāo)志物的細(xì)胞數(shù)增加來定義"富集"。然而，還可通過致瘤性功 能來將術(shù)語"富集"定義為在有限稀釋頻率下（例如，在小鼠模型中）生成癌（例如，腫瘤） 的最小的細(xì)胞數(shù)。例如，如果500個(gè)癌干細(xì)胞在63%的測(cè)試動(dòng)物中形成腫瘤，但是在63% 的測(cè)試動(dòng)物中形成腫瘤需要5000個(gè)未經(jīng)分級(jí)的腫瘤細(xì)胞，則癌干細(xì)胞群體對(duì)于致瘤活性 富集了 10倍。
[0047] 如本文所用，術(shù)語"藥物"和"化療劑"是指用于診斷、治療或預(yù)防生理系統(tǒng)（例如， 受試者或體內(nèi)、體外或離體細(xì)胞、組織以及器官）中的疾病或病理狀態(tài)的藥物活性分子。藥 物通過改變藥物所被施用至的活生物體、組織、細(xì)胞或體外系統(tǒng)的生理而起作用。術(shù)語"藥 物"和"化療劑"意圖涵蓋抗增生性以及抗瘤性的化合物，以及其他生物治療性化合物。藥 物的例子可在下文的表1中找到。
[0048] 發(fā)明詳述
[0049] 本發(fā)明涉及用放射療法和已經(jīng)暴露于癌干細(xì)胞或其部分的抗原呈遞細(xì)胞的組合 來治療和預(yù)防受試者中的癌癥的方法、系統(tǒng)和組合物。在某些實(shí)施方案中，所述抗原呈遞細(xì) 胞是已經(jīng)用ALDEFLUOR+/ALDH?癌干細(xì)胞脈沖的樹突狀細(xì)胞。
[0050] 本發(fā)明不受用于負(fù)載抗原呈遞細(xì)胞的癌干細(xì)胞類型的限制。可從其分離或富集 癌干細(xì)胞的癌癥的例子包括但不限于，淋巴瘤（例如，霍奇金氏癥或非霍奇金氏癥）、白血 ?。ɡ纾毙园籽?、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性髓細(xì)胞白血病、成髓細(xì)胞白血病、早幼粒 細(xì)胞白血病、粒單核細(xì)胞白血病、單核細(xì)胞白血病、紅白血病、慢性白血病、慢性髓細(xì)胞白血 病、（粒細(xì)胞）白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血?。?，以及肉瘤和癌（例如，纖維肉瘤、粘液肉瘤、 脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉 瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前 列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺瘤、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、 髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝細(xì)胞瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆 斯瘤、宮頸癌、睪丸瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì) 胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、 黑素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤）。本發(fā)明還可適用于肉瘤和上皮癌，例如卵巢癌 和乳腺癌，并且可適用于所有實(shí)體瘤。
[0051] 在某些實(shí)施方案中，在用放射療法和已經(jīng)暴露于癌干細(xì)胞的抗原呈遞細(xì)胞治療患 者之前，測(cè)試來自受試者的樣品以確定患者是否具有癌干細(xì)胞（以及是什么類型）。可分析 和篩選受試者的（例如，特定癌癥患者的）癌干細(xì)胞（例如，一旦分離并使其在體外增殖）。 例如，在一些實(shí)施方案中，將分析受試者的癌干細(xì)胞用作對(duì)受試者的診斷。因此，在一些實(shí) 施方案中，本發(fā)明提供了用于檢測(cè)癌干細(xì)胞生物標(biāo)志物的表達(dá)以鑒定患者是否具有特定的 癌干細(xì)胞或其組合的方法。在一些實(shí)施方案中，直接（例如，在核酸水平或蛋白質(zhì)水平）測(cè) 量表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，在組織樣品（例如，活檢組織）中檢測(cè)表達(dá)。在其他實(shí)施方案 中，在體液（例如，包括但不限于，血漿、血清、全血、粘液和尿）中檢測(cè)表達(dá)。在一些優(yōu)選實(shí) 施方案中，通過測(cè)量細(xì)胞和組織（例如，癌細(xì)胞和組織）中癌干細(xì)胞生物標(biāo)志物的表達(dá)水平 來檢測(cè)癌干細(xì)胞生物標(biāo)志物。例如，在一些實(shí)施方案中，通過使用抗體或通過檢測(cè)癌干細(xì)胞 生物標(biāo)志物蛋白 / 核酸（例如，CD44、CD24、EpCam、CD49f、ALDH、mir-221、mir-110 和 / 或 mir-93)來監(jiān)測(cè)癌干細(xì)胞生物標(biāo)志物。在一些實(shí)施方案中，在從受試者移除細(xì)胞或組織后， 在細(xì)胞或組織上進(jìn)行檢測(cè)。在其他實(shí)施方案中，通過使存在于受試者內(nèi)的細(xì)胞和組織中的 癌干細(xì)胞生物標(biāo)志物可視化來進(jìn)行檢測(cè)。在一些實(shí)施方案中，通過測(cè)量組織樣品（例如， 癌性組織）中的相應(yīng)mRNA的表述來檢測(cè)癌干細(xì)胞生物標(biāo)志物。在一些實(shí)施方案中，通過 Northern印跡分析來檢測(cè)RNA。Northern印跡分析涉及RNA的分離和互補(bǔ)的經(jīng)標(biāo)記探