l型大孔樹(shù)脂富集，先用35%乙醇除雜，洗脫至洗脫液無(wú)色，再用70%乙醇富集活性部 分，洗脫至洗脫液無(wú)色，將70%乙醇洗脫液濃縮，噴霧干燥。
[0026] 實(shí)施例7 :步驟三除雜用30%乙醇 取IOkg枳實(shí)藥材和0. 6kg知母藥材混合粉碎；用濃度為75%的乙醇水溶液熱回流提取 3次，第一次用50L提取3小時(shí)，第二、三次用30L提取2小時(shí)；將所得提取液濃縮至無(wú)醇味， 用DlOl型大孔樹(shù)脂富集，先用30%乙醇除雜，洗脫至洗脫液無(wú)色，再用70%乙醇富集活性部 分，洗脫至洗脫液無(wú)色，將70%乙醇洗脫液濃縮，噴霧干燥。
[0027] 實(shí)施例8 :步驟三除雜用40%乙醇 取IOkg枳實(shí)藥材和0. 6kg知母藥材混合粉碎；用濃度為75%的乙醇水溶液熱回流提取 3次，第一次用50L提取3小時(shí)，第二、三次用30L提取2小時(shí)；將所得提取液濃縮至無(wú)醇味， 用DlOl型大孔樹(shù)脂富集，先用40%乙醇除雜，洗脫至洗脫液無(wú)色，再用70%乙醇富集活性部 分，洗脫至洗脫液無(wú)色，將70%乙醇洗脫液濃縮，噴霧干燥。
[0028] 實(shí)施例9 :步驟三富集用65%乙醇 取IOkg枳實(shí)藥材和0. 6kg知母藥材混合粉碎；用濃度為75%的乙醇水溶液熱回流提取 3次，第一次用50L提取3小時(shí)，第二、三次用30L提取2小時(shí)；將所得提取液濃縮至無(wú)醇味， 用DlOl型大孔樹(shù)脂富集，先用35%乙醇除雜，洗脫至洗脫液無(wú)色，再用65%乙醇富集活性部 分，洗脫至洗脫液無(wú)色，將65%乙醇洗脫液濃縮，噴霧干燥。
[0029] 實(shí)施例10 :步驟三富集用85%乙醇 取IOkg枳實(shí)藥材和0. 6kg知母藥材混合粉碎；用濃度為75%的乙醇水溶液熱回流提取 3次，第一次用50L提取3小時(shí)，第二、三次用30L提取2小時(shí)；將所得提取液濃縮至無(wú)醇味， 用DlOl型大孔樹(shù)脂富集，先用35%乙醇除雜，洗脫至洗脫液無(wú)色，再用85%乙醇富集活性部 分，洗脫至洗脫液無(wú)色，將85%乙醇洗脫液濃縮，噴霧干燥。
[0030] 實(shí)施例11 :對(duì)比實(shí)施例（不加知母） 取IOkg枳實(shí)藥材粉碎；用濃度為75%的乙醇水溶液熱回流提取3次，第一次用50L提 取3小時(shí)，第二、三次用30L提取2小時(shí)；將所得提取液濃縮至無(wú)醇味，用DlOl型大孔樹(shù)脂 富集，先用35%乙醇除雜，洗脫至洗脫液無(wú)色，再用70%乙醇富集活性部分，洗脫至洗脫液無(wú) 色，將70%乙醇洗脫液濃縮，噴霧干燥。
[0031] 實(shí)施例12 :片劑的制備 按實(shí)施例2方法先制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:8的比例加入賦形劑，制粒壓 片。
[0032] 實(shí)施例13 : 口服液的制備 按實(shí)施例2方法先制得提取物，按常規(guī)口服液制法制成口服液。
[0033] 實(shí)施例14 :膠囊劑或顆粒劑的制備 按實(shí)施例2方法先制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:9的比例加入賦形劑，制成膠 囊或顆粒劑。
[0034] 實(shí)施例15 :注射液的制備 按實(shí)施例2方法先制得提取物，按常規(guī)加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
[0035] 實(shí)施例16 :無(wú)菌粉針的制備 按實(shí)施例2方法先制得提取物，將其溶于無(wú)菌注射用水中，攪拌使溶，用無(wú)菌抽濾漏斗 過(guò)濾，再無(wú)菌精濾，分裝于安瓿中，低溫冷凍干燥后無(wú)菌熔封得粉針劑。
[0036] 實(shí)施例17 :枳實(shí)提取物對(duì)胰脂肪酶的抑制活性測(cè)定 首先底物P-Nitrophenyl acetate (sigma公司）用磷酸緩沖液（PBS，pH7. 4)配成 I. 35M ;豬胰脂肪酶（sigma公司）用磷酸緩沖液配成10mg/ml ;將根據(jù)實(shí)施例2的方法制得 的枳實(shí)提取物用磷酸緩沖液配制成不同濃度的溶液。然后在96孔板中依次加入50 μ 1稀 釋20倍后的酶溶液、40 μ 1稀釋1000倍后的底物溶液以及10 μ 1不同濃度的受試樣品，混 勻。25°C下反應(yīng)20分鐘，每隔2分鐘在405nm下檢測(cè)每孔的吸光度。
[0037] 根據(jù)在405nm下的吸光度計(jì)算受試樣品對(duì)胰脂肪酶的抑制率（％ )，以蒸餾水為對(duì) 照，將酶活性抑制率（％)達(dá)到50%時(shí)抑制劑的濃度測(cè)定為IC5tl值。抑制率（％)根據(jù)下式 計(jì)算： 抑制率（％ ) = [ (A-B) - (C-D) ] ΛΑ-Β) X 100% 上式中，A表示反應(yīng)后空白孔在405nm下的吸光度，B表示反應(yīng)前空白孔在405nm下的 吸光度，C表不反應(yīng)后樣品孔在405nm下的吸光度，D表不反應(yīng)前樣品孔在405nm下的吸光 度。
[0038] 檢測(cè)枳實(shí)提取物對(duì)胰脂肪酶的抑制作用結(jié)果，IC5tl為10. 65±0. 139 μ g/ml，表明 枳實(shí)提取物對(duì)胰脂肪酶具有顯著的抑制作用。
[0039] 實(shí)施例18 :枳實(shí)提取物對(duì)肥胖大鼠的減肥作用 Zucker大鼠(遺傳性肥胖大鼠）由中國(guó)科學(xué)院上海藥物所動(dòng)物房繁殖，雄性，8周齡。取 正常Zucker大鼠6只，作為空白對(duì)照組。將肥胖Zucker大鼠分成12組，即模型對(duì)照組、枳 實(shí)提取物組(共10組)和對(duì)比實(shí)施例組，每組6只。將根據(jù)實(shí)施例2的方法制得的枳實(shí)提取 物用0. 5% CMC-Na助溶，劑量為lg/kg ;空白和模型對(duì)照組給予同等體積的0. 5% CMC-Na， 口服灌胃給藥二周。定期檢測(cè)飲食和體重。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0040] 表1枳實(shí)提取物對(duì)Zucker大鼠體重和飲食的影響（土SE)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種枳實(shí)提取物，其特征在于該提取物由以下方法制備： 步驟一：將枳實(shí)藥材和重量為枳實(shí)藥材0. 05-0. 09倍的知母藥材混合粉碎； 步驟二：將粉碎的藥材用濃度為60-85%的乙醇水溶液熱回流提取2-3小時(shí)，提取2-3 次，每次乙醇水溶液體積為枳實(shí)藥材重量3-5倍； 步驟三：將所得提取液濃縮至無(wú)醇味，用DlOl型大孔樹(shù)脂富集，先用30-40%乙醇除雜， 洗脫至洗脫液無(wú)色，再用65%-75%乙醇富集活性部分，洗脫至洗脫液無(wú)色，將65%-85%乙醇 洗脫液濃縮，噴霧干燥。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枳實(shí)提取物，其特征在于知母藥材重量為枳實(shí)藥材重量的 0? 06-0. 08 倍。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枳實(shí)提取物，其特征在于步驟二所述乙醇水溶液為75%的乙 醇水溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枳實(shí)提取物，其特征在于步驟三用于除雜的乙醇為35%乙醇。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枳實(shí)提取物，其特征在于步驟三用于富集活性組分的乙醇為 70%乙醇。
6. 藥物制劑，含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的枳實(shí)提取物和藥學(xué)上可接受的載 體。
7. 權(quán)利要求1所述的枳實(shí)提取物在制備預(yù)防或治療肥胖癥藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種枳實(shí)提取物、制劑及用途，屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種枳實(shí)提取物及含有該提取物的藥物制劑，該枳實(shí)提取物可以用來(lái)制備預(yù)防或治療肥胖癥的藥物。本發(fā)明通過(guò)在枳實(shí)藥材中加入少量知母藥材，使最終制得的提取物具有明顯的治療肥胖的作用，比單獨(dú)用枳實(shí)藥材提取具有意想不到的效果。本發(fā)明基于充分、合理的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過(guò)選擇合適濃度的乙醇水溶液進(jìn)行提取、除雜和富集，能獲得療效顯著的枳實(shí)提取物。
【IPC分類】A61K36-752, A61K36-8964, A61P3-04
【公開(kāi)號(hào)】CN104815138
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510216118
【發(fā)明人】張聲芬, 張聲梯, 其他發(fā)明人請(qǐng)求不公開(kāi)姓名
【申請(qǐng)人】溫州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)聚智匯科技信息咨詢服務(wù)中心
【公開(kāi)日】2015年8月5日
【申請(qǐng)日】2015年5月1日