一種膜法提取蘿芙木總生物堿的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的藥物分離方法，具體涉及一種膜法提取蘿芙木總生物堿的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蘿芙木為夾竹桃科蘿芙木屬，是天然的藥用植物，種類(lèi)包括蛇根木、催吐蘿芙木、中國(guó)蘿芙木、云南蘿芙木等130余種。蘿芙木植物中約含200多種生物堿，可以用于治療多種疾病。其中利血平生物堿具有顯著降壓作用。除利血平外，多種蘿芙術(shù)生物堿如蛇根堿、利血胺、蘿芙木甲素、馬蹄堿、蘿芙木亭堿等均具有類(lèi)似的降壓活性。因此，其生物總堿是制備抗血壓藥如“蘿芙木片”、“降壓靈”的原料，主要成分為利血平。
[0003]傳統(tǒng)的對(duì)蘿芙木生物總堿的提取是先通過(guò)酸醇溶液浸提，將濾液減壓濃縮得浸膏，酸化去沉淀，上清液氨化得沉淀，最后用有機(jī)溶劑如氯仿或丙酮多次溶解干燥所得。因浸提液中含有果膠、蛋白質(zhì)、色素等大分子雜質(zhì)，故沉淀時(shí)間長(zhǎng)，常需過(guò)夜。同時(shí)這些大分子形成膠體性質(zhì)可吸附部分活性成分，往往因除雜廢棄而降低了總生物堿提取率和活性成分利血平的含量。用來(lái)溶解或萃取所需的氯仿等有機(jī)溶劑量大，存在一定的安全毒性?？偵飰A干燥后的制劑存在崩解緩慢，溶解與加工性能不佳。最終大量溶劑的回收利用需減壓蒸餾，人工和能耗高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種膜法提取蘿芙木總生物堿的方法。該方法是將蘿芙木浸提液依次經(jīng)過(guò)超濾除雜和納濾濃縮后干燥所得。本發(fā)明改變其傳統(tǒng)生物堿經(jīng)堿沉和有機(jī)溶劑萃取等方式，提高了總生物堿和活效成分利血平的提取效率，且浸提液可以循環(huán)利用，降低有機(jī)溶劑用量。
[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:
一種膜法提取蘿芙木總生物堿的方法，包括如下步驟:
(1)蘿芙木生物堿浸提液的獲得:蘿芙木根、莖或葉粉碎，常溫下進(jìn)行浸提，普通過(guò)濾得到蘿芙木生物堿浸提液；
(2)超濾:運(yùn)行膜工藝，將步驟(I)中的蘿芙木生物堿浸提液使用超濾膜超濾，以去除原浸提液中大分子物質(zhì)等雜質(zhì)；保留超濾透過(guò)液用于后續(xù)納濾濃縮，該超濾透過(guò)液簡(jiǎn)稱(chēng)超濾液；
(3)納濾:運(yùn)行膜工藝，將上述超濾液進(jìn)行納濾，得到高濃度的蘿芙木總生物堿。
[0006]進(jìn)一步包括步驟(4)總生物堿的制備:收集納濾濃縮液，減壓蒸餾回收乙醇等有機(jī)溶劑，干燥后得到總生物堿。
[0007]優(yōu)選地，所述步驟(I)中，浸提所需浸提液采用酸性極性有機(jī)溶劑，即可以采用酸性乙醇、甲醇或丙酮，且蘿芙木與浸提液料液比可以為Ig:15?20mL。
[0008]優(yōu)選地，所述步驟(I)中，浸提方式采用超聲輔助浸提和/或靜態(tài)浸提，并可適當(dāng)攪拌；超聲輔助浸提時(shí)，先靜置浸提20?30min，再超聲輔助處理20?30min，再靜置20?30min浸提；超聲處理的功率為250-500W，頻率為40kHz ;采用靜態(tài)浸提時(shí)為12_24h。
[0009]優(yōu)選地，所述步驟(I)中，酸性極性有機(jī)溶液為含體積比50%-80%的乙醇或甲醇或丙酮、含體積比0.2-1.0%的醋酸、檸檬酸、鹽酸或硫酸，其余為水。優(yōu)選70%乙醇和1.0%的醋酸組合。
[0010]優(yōu)選地，所述步驟(I)中，在保持料液比不變的前提下，濾渣進(jìn)一步重復(fù)浸提1-3次，首選重復(fù)浸提I次，合并濾液備用。
[0011]優(yōu)選地，所述步驟(2)中，所述的超濾膜截留分子量為10000-60，000 Dalton ;首選為 10，000 Dalton。
[0012]優(yōu)選地，所述步驟(2)中，工作壓力為0.5-1.010^，首選為0.6-0.710^;工作溫度為10-45 °C，首選為25-35 °C，也可選擇室溫或自然工作溫度。
[0013]優(yōu)選地，所述步驟(2)中，超濾膜材料為陶瓷膜或有機(jī)膜，有機(jī)膜具體包括聚偏氟乙烯(PVDF)、聚醚砜(PES)、聚丙烯(PP)、聚乙烯(PE)、聚砜(PS)、聚丙稀腈(PAN)、聚氯乙稀(PVC)中的一種。
[0014]優(yōu)選地，所述步驟(3)中，納濾膜選擇截留分子量200_500Da的復(fù)合納濾膜或無(wú)機(jī)材料納濾膜.優(yōu)選地，所述步驟(3)中，納濾所用復(fù)合納濾膜材質(zhì)包括聚酰胺(PA)、磺化聚醚砜(SPES)、磺化聚砜(SPS)和聚乙烯醇(PVA)等有機(jī)膜中的一種。
[0015]優(yōu)選地，所述步驟(3)中，納濾中的膜組件運(yùn)行壓力為1.0-3.5 MPa，首選1.5-2.5MPa ;溫度范圍為10_45°C，首選為25_35°C ;納濾濃縮2_8倍，首選濃縮倍數(shù)為2_3倍。
[0016]優(yōu)選地，所述步驟(4)中，干燥方法采用真空干燥或噴霧干燥或烘箱干燥中一種；干燥過(guò)程避光，溫度40-60 °C。
[0017]采用上述方案后，本發(fā)明具有如下有益效果:
1.在超濾階段:分別對(duì)浸提液和超濾液的濁度、固形物、蛋白質(zhì)和總生物堿中有效成分利血平進(jìn)行分析。濁度采用分光光度法、固形物采用重量法、蛋白質(zhì)采用考馬斯亮藍(lán)法、利血平成分分析采用高效液相色譜法(HPLC)法。HPLC法的具體條件為:C18反向色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.04% 二乙胺水(70:30);流速I(mǎi) m L/min ;柱溫30 °C ;檢測(cè)波長(zhǎng)268 nm ;進(jìn)樣量 10_20yL0
[0018]與浸提液相比，超濾液濁度減少了 98.0%，固形物和蛋白質(zhì)的去除率達(dá)到95%以上，色譜分析超濾液中活性成分利血平含量保持不變。
[0019]綜上所述，超濾后的濾過(guò)液濁度大大減小，澄清度高，固形物、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)去除率高。利血平的含量沒(méi)有損失，總生物堿的品質(zhì)得到提高。
[0020]2.納濾濃縮工藝的效果:
納濾濃縮條件在運(yùn)行壓力為1.0-3.5 M Pa，濃縮倍數(shù)為2-8倍，溫度控制在10-45°C左右，進(jìn)行納濾濃縮。在納濾過(guò)程中濾液有自然升溫的現(xiàn)象，升溫幅度與運(yùn)行時(shí)間和運(yùn)行壓力相關(guān)，一般升高5-8°C。此升溫幅度對(duì)生物堿成分性質(zhì)無(wú)影響，反而會(huì)促進(jìn)膜通量。結(jié)合膜通量和能耗，以濃縮2-5倍為宜，最佳濃縮倍數(shù)為2倍。如果膜通量過(guò)小或膜后壓力改變過(guò)大，及時(shí)對(duì)膜進(jìn)行清洗。
[0021]收集納濾濃縮液和納濾透析液樣品，測(cè)定其生物堿中有效成分利血平含量(方法同上)。
[0022]經(jīng)色譜檢測(cè)發(fā)現(xiàn)納濾透過(guò)液中利血平含量極低，濃縮液中利血平含量在95%以上。說(shuō)明生物堿有效成分截留效果好。
[0023]由于生物堿成分保留在濃縮液中，納濾透析液澄清透明，可以作浸提液循環(huán)利用。
[0024]3.采用本發(fā)明方法與常規(guī)制備方法比較:
常規(guī)制備總生物堿:步驟I得到的浸提液經(jīng)減壓回收乙醇，浸膏用蒸餾水稀釋鹽酸調(diào)pH 2.0-3.0，靜置去沉淀，上層酸水氨水調(diào)pH 9.0-10.0，靜置5_6小時(shí)或過(guò)夜后過(guò)濾留沉淀。沉淀用水洗至濾液為中性，用丙酮加熱溶解并過(guò)濾，濾液減壓回收丙酮，干燥得到總生物堿(降壓靈)稱(chēng)量并與納濾提取作比較，計(jì)算總生物堿得率，并比較在稀醋酸溶液中的溶解速度。
[0025]用膜法制備:三份粉碎的蘿芙木藥材一一蘿芙木根粉1、蘿芙木根粉2和云南蘿芙木葉。分別測(cè)得總生物堿的得率在1.31%、1.12%、0.152%。
[0026]使用常規(guī)方法制備:總生物堿的得率為0.79%,0.55%、和0.074%，膜法制備總生物喊得率是常規(guī)方法1.5-2.0倍。
[0027]分析原因:蘿芙木原浸提液中含有多糖、樹(shù)膠、蛋白質(zhì)和色素等大分子物質(zhì)成分，對(duì)總生物堿提取易造成干擾，生物堿與大分子成分形成膠體狀態(tài)，不易沉淀下來(lái)或被吸附，造成總生物堿的流失以及活性成分利血平含量降低。膜法提取經(jīng)過(guò)超濾，多糖、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)成分及其它雜質(zhì)得到了去除，總生物堿完全保留下來(lái)，因而納濾濃縮后總生物堿的產(chǎn)量得到大大提高。
[0028]常規(guī)方法制備得到的總生物堿為焦褐色，粘性大不易分散；膜法制備所得總生物堿為棕黃色，輕壓即碎呈粉末狀。用稀冰醋酸溶解，前者溶解緩慢需攪拌，且有少量膠狀殘留；后者在稀冰醋酸中溶解迅速。
[0029]總之，本發(fā)明所述方法改變了傳統(tǒng)的生物堿“堿沉+有機(jī)溶劑萃取”分離得到生物堿的方式，利用膜技術(shù)達(dá)到除雜和濃縮富集制備總生物堿的目的，工藝簡(jiǎn)捷，不破壞和污染活性成分，蘿芙木總生物堿和活性成分利血平的提取率高。納濾透析液可以直接作浸提液循環(huán)利用，大大降低了能耗，減少溶劑用量和廢水排放，提高了經(jīng)濟(jì)效益。
【附圖說(shuō)明】
[0030]圖1是本發(fā)明的步驟流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步