磁性熒光復合納米藥物載體。圖4為制備的磁性熒光復合納米藥物載體的吸收光譜和熒光光譜。
[0028]實施例4: 4.1采用水相法制備CdSe量子點.在氮氣保護下，將0.0106 g NaBH4與0.0063 gSe粉溶于2 mL蒸餾水中，加熱至40°C，完全溶解后得到NaHSe溶液；取0.0533 g Cd (Ac) 2溶入20 mL蒸餾水中，待其完全溶解后加入1.0 mmol巰基丙酸，用lmol/L的NaOH溶液調節(jié)pH=ll.5，得到Cd的前驅體溶液；將Cd的前驅體轉入三口瓶中，在氮氣保護下迅速注入NaHSe溶液，油浴100°C回流，磁力攪拌Ih后取出放入冰箱中快速冷卻至室溫，即為制備好的CdSe QDs溶液。
[0029]4.2磁性納米顆粒的制備。采用專利公開號為CN 101928043 A的方法制備a -Fe2O3磁性納米顆粒。
[0030]4.3采用共混包埋法制備羧甲基-β-環(huán)糊精磁性納米復合物。稱取0.5 ga-Fe2O3磁性納米顆粒溶于30 mL pH =7.4，濃度為0.0lmol/L的PBS緩沖溶液中，通氮氣去氧，利用超聲波清洗機將磁性粒子分散均勻，得到分散均勻的a -Fe2O3納米顆粒溶液；稱取0.8 g羧甲基-β-環(huán)糊精溶于20 mL PBS=7.4的緩沖溶液中，同時加入0.5 g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)活化羧甲基-β-環(huán)糊精表面的基團；之后將羧甲基-β -環(huán)糊精溶液加入a -Fe2O3納米顆粒溶液，在恒溫水浴振蕩器中25°C振蕩6h，反應結束后用磁鐵收集產物，再依次用蒸餾水和PBS ( pH=7.4)緩沖溶液充分洗滌，即得到羧甲基-β -環(huán)糊精磁性納米復合物。
[0031]4.4采用離子交聯法制備磁性熒光復合納米藥物載體。取4.1制備的濃縮的水相CdSe量子點，異丙醇分離提純后溶于5 mL蒸餾水中，并加入鉬酸鈉，其中鉬酸鈉和CdSe量子點的濃度分別為2.5 mg/mL和0.25 mol/L，得到反應溶液A ;將50mg疏水性藥物喜樹堿的甲醇溶液與3.9g磺丁基-β -環(huán)糊精混合，得到包含喜樹堿的包合物B ;取0.05 g步驟
4.3中制備的羧甲基-β-環(huán)糊精修飾的磁性納米復合物溶于10 mL蒸餾水中，超聲30 min,使磁性納米微粒分散均勻，并加入質量濃度為5 mg/mL聚二烯丙基二甲基氯化銨，得到反應溶液C ;將A和B溶液逐滴加入C溶液中，在25°C的恒溫水浴振蕩器中振蕩10 h，磁鐵收集反應產物，用蒸餾水清洗反應產物，即得磁性熒光復合納米藥物載體。圖5為制備的磁性熒光復合納米藥物載體在紫外燈和外加磁場時的數碼照片。
【主權項】
1.一種磁性熒光復合納米藥物載體的制備方法，其特征在于:以帶負電荷的羧甲基殼聚糖或羧甲基-β-環(huán)糊精修飾的磁性納米粒子、聚二烯丙基二甲基氯化銨(PDDA)、離子交聯劑和負載藥物的陰離子型高分子有機物通過離子交聯法連接水溶性量子點得到，所述熒光量子點以單分散形式均勻分布在磁性納米顆粒的表面，其中磁性納米顆粒的粒徑大小在10-200 nm，量子點的粒徑在1.5-10 nm。
2.根據權利要求1所述的一種磁性熒光復合納米藥物載體的制備，其特征在于，所述的制備方法包括以下步驟: Ca)采用共混包埋法制備帶負電荷的磁性納米復合物:①稱取50-500mg磁性納米顆粒溶于30 mL pH =7.4，濃度為0.0lmol/L的PBS緩沖溶液中，通氮氣去氧，利用超聲波清洗機將磁性粒子分散均勻；②稱取10-800 mg羧甲基殼聚糖或羧甲基-β-環(huán)糊精溶于20mL PBS=7.4的緩沖溶液中，同時加入0.1-0.5 g 1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)活化羧甲基殼聚糖或羧甲基-β -環(huán)糊精表面的基團；③將①和②兩溶液混合，在恒溫水浴振蕩器中25°C振蕩2-6 h，再依次用蒸餾水和PBS ( pH=7.4)緩沖溶液充分洗滌，即得到帶負電荷的磁性納米復合物； (b)采用離子交聯法制備磁性熒光復合納米藥物載體: 取制備的濃縮的水相量子點溶于蒸餾水中，并加入離子交聯劑，得到反應溶液A ;將疏水性藥物的甲醇或乙醇溶液與陰離子型高分子有機物混合，常溫下振蕩反應2-10 h，得到包含藥物的包合物B ;取0.005-0.05g步驟(a)中制備的帶負電荷的磁性納米復合物溶于蒸餾水中，超聲20-60 min，使磁性納米微粒分散均勻，并加入聚二烯丙基二甲基氯化銨得到反應溶液C ;將反應溶液A和B逐滴加入到反應溶液C中，常溫下振蕩反應2-10 h，離心分離，蒸餾水洗滌，即得到磁性熒光復合納米藥物載體。
3.根據權利要求1或2所述的一種磁性熒光復合納米藥物載體，其特征在于，所述的磁性熒光復合納米藥物載體的粒徑為10-220 nm ;所述的磁性納米顆粒(MNPs)為超順磁、順磁或鐵磁性的金屬及金屬氧化物，選自Fe3O4、Fe2O3、MeFe2O4 (Me=Co、Mn、Ni)、化合物釹鐵硼、釤鈷等、金屬Fe、Co、Ni以及合金Fe2Co、Ni2Fe的金屬氧化物的納米顆粒中的一種；磁性納米顆粒的制備方法包括共沉淀法、水熱法；磁性納米顆粒表面含有羥基、氨基、羧基中的至少一種。
4.根據權利要求1或2所述的一種磁性熒光復合納米藥物載體，其特征在于，所述的量子點為表面帶有親水基團的水溶性量子點，量子點為I1-VI族半導體材料，或者為I1-VI半導體材料形成的復合材料，所述量子點粒徑為1.5-10 nm ;優(yōu)選的量子點為ZnSe、CdSe>CdTe、CdS、ZnSe/ZnS、CdS/ZnS、CdSe/ZnS、CdTe/ZnS、ZnxCd1^xSe, CdSe1^xSx, CdSe1^xTex, CdSe/ZnSe, CdS/ZnSe、CdTe/ZnSe、CdSe/CdS、CdTe/CdS、CdSZZnxCd1^xS, ZnSeZZnxCd1^xS, CdSe/ZnxCdgS 或 CdTeZZnxCdHS 中的一種，其中 0 < X < I。
5.根據權利要求1或2所述的一種磁性熒光復合納米藥物載體，其特征在于，所述的離子交聯劑包括三聚磷酸鹽、四聚磷酸鹽、六偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、鉬酸鹽、透明質酸或γ -聚谷氨酸中的一種或幾種；陰離子型高分子有機物包括羧甲基-環(huán)糊精或磺丁基-環(huán)糊精；所述的羧甲基殼聚糖可選用O-羧甲基殼聚糖或N，O-羧甲基殼聚糖；聚二烯丙基二甲基氯化銨的分子量和質量濃度分別為IX 105-2 X 15和0.51-5.1 mg/mL。
6.根據權利要求1或2所述的一種磁性熒光復合納米藥物載體，其特征在于，所述的疏水性藥物包括布洛芬、5-氟尿嘧啶、多西紫杉醇、喜樹堿或紫杉醇中的至少一種。
7.根據權利要求2所述的一種磁性熒光復合納米藥物載體，其特征在于，步驟(a)中羧甲基殼聚糖或羧甲基-β -環(huán)糊精在磁性納米顆粒表面的厚度為3-10 nm;步驟(b)中疏水性藥物與陰離子型高分子有機物的摩爾比為1:10-1:60，帶負電荷的磁性納米復合物與量子點的摩爾比為1:1-1:20，聚二烯丙基二甲基氯化銨:陰離子型高分子有機物:離子交聯劑的質量比為1:0.1-2:0.01-0.5o
8.根據權利要求4所述的水溶性量子點的制備，其特征是:所述量子點表面含有巰基、羧基、氨基中的至少一種；半導體量子點合成中所使用的親水基團配體包括3-巰基丙酸、巰基乙酸、L-半胱氨酸、2-巰基丙酸、巰基丁酸、巰基戊酸、巰基己酸、巰基丁二酸、巰基乙醇、谷胱甘肽、巰基丙醇或巰基乙胺中的一種或幾種。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種磁性熒光復合納米藥物載體的制備方法，本發(fā)明選用帶有內腔分子結構的β-環(huán)糊精衍生物包裹疏水性藥物，大大改善了包封效果。該載體結構以帶負電荷的羧甲基殼聚糖或羧甲基-β-環(huán)糊精修飾的磁性納米粒子為核，然后在聚二烯丙基二甲基氯化銨（PDDA）、離子交聯劑和負載藥物的陰離子型高分子有機物的作用下，通過離子交聯法連接水溶性量子點得到磁性熒光復合納米顆粒。本發(fā)明所述的熒光量子點均勻分布在磁性納米顆粒的表面，其中磁性納米顆粒的粒徑大小在10-200 nm，量子點的粒徑在1.5-10 nm。本發(fā)明反應條件溫和，操作方法簡單，復合納米藥物載體具有良好的生物相容性和親水性，可實現對腫瘤藥物的可控封裝與釋放，同時具有磁靶向和熒光示蹤功能，在藥物載體、生物成像及生物分子監(jiān)測與分離等相關領域具有重要的研究與應用價值。
【IPC分類】A61K47-32, A61K47-48, A61K47-36, A61K49-00
【公開號】CN104840977
【申請?zhí)枴緾N201510124945
【發(fā)明人】劉福田, 丁永玲, 孫康寧, 劉云
【申請人】濟南大學
【公開日】2015年8月19日
【申請日】2015年3月23日