免疫原性組合物及其應(yīng)用
【專利說明】免疫原性組合物及其應(yīng)用
[0001] 本申請要求2012年7月6日提交的美國臨時(shí)申請?zhí)?1/669, 010和2012年9月 10日提交的美國臨時(shí)申請?zhí)?1/698, 971的權(quán)益，上述各文獻(xiàn)的全部內(nèi)容均通過引用納入 本文以用于所有目的。
[0002] 政府基金
[0003] 本申請是在國立衛(wèi)生研宄院的獎(jiǎng)金號5P01AI066287、國立衛(wèi)生研宄院的HIV DDT ADB合同號N01-AI-50007和國立衛(wèi)生研宄院的HIV DDT合同號HHSN266200500007C下完成 的。政府對本發(fā)明擁有某些權(quán)利。 技術(shù)背景
[0004] 人免疫缺陷病毒（HIV-1，也稱作HTLV-III、LAV或HTLV-III/LAV)是獲得 性免疫缺陷綜合征（AIDS)和相關(guān)疾病的病因（參見例如Barre-Sinoussi等（1983) Science 220:868-871 ;Gallo 等（1984)Science 224:500-503 ;Levy 等（1984) Science225:840-842 ;Siegal 等（1981) N. Engl. J. Med. 305:1439-1444)。存在數(shù)種已知的 HIV毒株，包括HIV-I (表不在歐洲或美洲分尚的數(shù)種毒株的統(tǒng)稱）和HIV-2 ( -種在許多 西非國家流行的毒株）。通過系統(tǒng)發(fā)生分析將HIV-I分為三個(gè)組:M(主要）組、0(異常） 組和命名為N組的HIV-I變體，后者已鑒定為發(fā)病中心在喀麥?。⊿imon等（1998)Nat. Med. 4:1032-1037)。所有三個(gè)HIV-I組都能導(dǎo)致AIDS。
[0005] AIDS患者通常具有長的無癥狀期，隨后是免疫系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的進(jìn)行性退 化。病毒的復(fù)制受到高度調(diào)控，且組織培養(yǎng)物中出現(xiàn)T淋巴細(xì)胞的⑶4陽性輔助細(xì)胞亞組 的潛伏性和裂解性感染（Zagury等（1986) Science 231:850-853)。HIV-I的分子研宄顯 不其編碼多個(gè)基因 （Ratner 等（1985)Nature 313:277-284 ;Sanchez_Pescador 等（1985) Science 227:484-492)，包括在所有逆轉(zhuǎn)錄病毒中均常見的三個(gè)結(jié)構(gòu)基因：gag、pol和 env。其他逆轉(zhuǎn)錄病毒（特別是HIV-2和猿免疫缺陷病毒SIV(曾稱作STLV-III))的病毒 基因組的核苷酸序列也包含這些結(jié)構(gòu)基因（Guyader等（1987)Nature 326:662-669)。
[0006] HIV-l、HTV-2和SIV的包膜蛋白是約160kDa的糖蛋白（gpl60)。在宿主細(xì)胞的病 毒感染期間，gpl60被宿主細(xì)胞蛋白酶切割形成gpl20和整合膜蛋白，gp41。gp41部分被銷 定在病毒顆粒的膜雙層中，而gp 120部分凸入周圍的環(huán)境中。gp 120和gp41更共價(jià)地相連 并可從病毒顆粒和感染的細(xì)胞表面釋放游離的gpl20。此外，在與其受體CD4結(jié)合后，Env 多肽經(jīng)歷明顯的結(jié)構(gòu)重排。在該構(gòu)象變化后，暴露了 CCR5或其他趨化因子結(jié)合的共受體結(jié) 合位點(diǎn)。該趨化因子受體結(jié)合位點(diǎn)的暴露轉(zhuǎn)而介導(dǎo)病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。參見例如Wyatt，R. 等（1998)Nature 393:705-711 ;Kwong，P.等（1998)Nature 393:648-659。
[0007] 用于免疫患者抵御HIV感染的疫苗已研發(fā)了 20年，但成效有限。許多免疫方法關(guān) 注HIV包膜糖蛋白，但在其他抗原（如tat或gag)中也存在興趣。
[0008] 需要一種能夠在對象中引發(fā)免疫應(yīng)答（例如中和和/或保護(hù)性抗體）抵御多種 HIV毒株和亞型的組合物，例如當(dāng)該組合物以疫苗或免疫原性組合物的形式給予時(shí)。還需要 改善的抵御HIV的免疫方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 在本文第6部分中定義并解釋了用于描述本發(fā)明的某些術(shù)語。
[0010] 本發(fā)明通常涉及包含HIV RNA組分和HIV多肽組分的免疫原性組合物。與單獨(dú)使 用RNA或單獨(dú)使用多肽免疫相比，遞送兩種不同形式抗原表位（來自HIV的第一表位，以 RNA編碼的形式；以及來自HIV的第二表位，以多肽形式）的免疫原性組合物能夠增強(qiáng)針對 HIV的免疫應(yīng)答。優(yōu)選地，該第一表位和第二表位是相同的表位。
[0011] 本發(fā)明還涉及用于依序給藥的包含基于HIV RNA的初免組合物和基于HIV多肽的 加強(qiáng)組合物的試劑盒。該試劑盒適用于例如"RNA初免，蛋白增強(qiáng)"免疫方案以產(chǎn)生針對HIV 的免疫應(yīng)答。
[0012] 本發(fā)明還涉及用于治療或預(yù)防HIV感染的方法、用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法（例如 體液應(yīng)答，如中和抗體應(yīng)答和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答）和接種對象的方法，所述方法通過共同遞 送HIV RNA分子和HIV多肽分子（共同給藥）來進(jìn)行。
[0013] 本發(fā)明還涉及用于治療或預(yù)防HIV的方法、用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法和接種對象 的方法，所述方法通過依序給予HIV RNA分子和HIV多肽分子進(jìn)行（初免-加強(qiáng)）。
[0014] 附圖簡要說明
[0015] 圖1顯示了用于對BALB/c小鼠給予實(shí)施例VI的HIV gpl60/gpl40制劑的免疫方 案。"PRE"指在給予蛋白加強(qiáng)前的時(shí)間點(diǎn)；"POST"指在給予蛋白加強(qiáng)后的時(shí)間點(diǎn)。
[0016] 圖2總結(jié)了實(shí)施例1的HIV gpl60/gpl40制劑對于BALB/c小鼠的不良作用。共 同遞送RNA復(fù)制子及其編碼的蛋白抗原未顯示不良作用。
[0017] 圖3A顯示了在給予實(shí)施例1的HIV gpl60/gpl40制劑的BALB/c小鼠中多個(gè)時(shí)間 點(diǎn)時(shí)的HIV gpl40特異性IgG抗體效價(jià)。圖表頂部一排的數(shù)字指各組中表現(xiàn)出可檢測IgG 應(yīng)答的動(dòng)物數(shù)目占受檢測動(dòng)物總數(shù)的情況。圖3B比較了相同的5只小鼠在給予加強(qiáng)疫苗 (1〇以8蛋白/^^59，參見表1-1)之前和之后的抗8?1401 86效價(jià)。給予蛋白加強(qiáng)后，1^8 RNA/脂質(zhì)體初免組的IgG效價(jià)與15 μ g DNA/脂質(zhì)體初免組、VRP (le7)初免組或蛋白初免 組沒有顯著差別。
[0018] 圖4A-4C顯示了免疫的BALB/c小鼠的IgGl: IgG2a概況。RNA/脂質(zhì)體制劑誘導(dǎo) 了平衡的IgGl:IgG2a亞型概況，這與VRP類似。圖4A顯示了給予實(shí)施例1的HIV gpl60/ gpl40制劑的BALB/c小鼠中的IgGl和IgG2a效價(jià)（參見表1-1)。圖4B顯示了給予實(shí)施 例I的HIV gpl60/gpl40制劑的BALB/c小鼠中的IgGl:IgG2a比率（參見表1-1)。圖4C 顯示了裸RNA初免組在蛋白/MF59加強(qiáng)后的IgGl和IgG2a效價(jià)以及IgGl:IgG2a比率（IgG 效價(jià)在蛋白/MF59加強(qiáng)前不可檢出）。
[0019] 圖5比較了進(jìn)化支C(DU422. 14?160抗原和進(jìn)化支8(5?162)8?160抗原的免疫原 性，兩種抗原都以脂質(zhì)體配制的RNA形式給予。加強(qiáng)后Thl和Th2型IgG應(yīng)答顯示了進(jìn)化 支B和進(jìn)化支C抗原的平衡概況。
[0020] 圖6A-6B顯示了實(shí)施例1的HIV gpl60/gpl40制劑所誘導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答。圖6A顯 示了⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答，按細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的百分比測定。圖6B顯示了⑶8+T細(xì)胞應(yīng)答， 按細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的百分比測定。
[0021] 圖7顯示了在給予實(shí)施例1的HIV gpl60/gp 140制劑的BALB/c小鼠的陰道清洗 液中g(shù)pl40特異性IgA抗體效價(jià)。
[0022] 圖8顯示了用于對BALB/c小鼠給予實(shí)施例1I的多種HIV gpl40制劑的免疫方案。
[0023] 圖9總結(jié)了實(shí)施例1I的HIV gpl40制劑對于BALB/c小鼠的不良作用。共同遞送 RNA復(fù)制子及其編碼的蛋白抗原未顯示不良作用。
[0024] 圖10顯示了在給予實(shí)施例1I的HIV gp 140制劑的BALB/c小鼠中的HIV gp 140 特異性IgG抗體效價(jià)（加強(qiáng)前）。與單獨(dú)給予RNA復(fù)制子相比，將RNA復(fù)制子與gpl40蛋白 混合誘導(dǎo)了更強(qiáng)的免疫應(yīng)答。
[0025] 圖11顯示了給予加強(qiáng)疫苗（10 μ g蛋白/MF59)后的抗gpHOIgG效價(jià)。
[0026] 圖12A和12B顯示了給予實(shí)施例1的HIV gpl40制劑的BALB/c小鼠的IgGl: IgG2a 概況。RNA/脂質(zhì)體和RNA/脂質(zhì)體/蛋白制劑誘導(dǎo)了平衡的IgGl: IgG2a亞型概況，這與VRP 類似。圖12A顯示了給予實(shí)施例1I的HIV gpl40制劑的BALB/c小鼠中的IgGl和IgG2a 效價(jià)。圖12B顯示了給予實(shí)施例1I的HIV gpl40制劑的BALB/c小鼠中的IgGl:IgG2a比 率。圖12C顯示了裸RNA初免組在蛋白/MF59加強(qiáng)后