工程化的抗IL-23p19抗體的溶液制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明一般涉及治療性抗體的高濃度溶液制劑以及它們?cè)谥委煾鞣N疾病中的用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 白細(xì)胞介素-23(IL_23)是包含2個(gè)亞基的異二聚細(xì)胞因子：IL_23特有的pl9和 與IL-12(IL-12)共有的p40。Tpl9亞基與IL-6、粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF)和IL-12 的Ρ35亞基在結(jié)構(gòu)上相關(guān)。IL-23通過(guò)與包含兩個(gè)亞基的異二聚體受體結(jié)合介導(dǎo)信號(hào) 化，所述兩個(gè)亞基為IL-23受體特有的IL-23R，和與IL-12受體共有的IL-12Rbl。許多 早期的研宄證明，p40中的遺傳缺陷（p40敲除小鼠；p40K0小鼠）的后果比由p35缺乏 例如P35K0小鼠中觀察到的更嚴(yán)重。IL-23的發(fā)現(xiàn)，以及p40K0不僅阻止IL-12的表達(dá)， 而且阻止IL-23的表達(dá)的認(rèn)識(shí)，最終解釋了這些結(jié)果。參見(jiàn)，例如，Oppmann等（2000) Immunity 13:715-725 ;Wiekowski 等（2001)J. Immunol. 166:7563-7570 ;Parham 等 (2002)J. Immunol. 168:5699-708 ;Frucht(2002) Sci STKE 2002,El-E3;Elkins 等（2002) Infection Immunity70:1936-1948) 〇
[0003] 通過(guò)使用P40K0小鼠，最近的研宄已經(jīng)表明阻斷IL-23和IL-12是一種有效的治 療各種炎癥性和自身免疫疾病的方法。但是，通過(guò)P40阻斷IL-12看來(lái)似乎具有不希望的 系統(tǒng)性后果，如對(duì)條件致病微生物感染增加的敏感性或增加的腫瘤風(fēng)險(xiǎn)。Bowman等（2006) Curr. Opin. Infect. Dis. 19:245 ;Langowski 等（2006)Nature 442:461。因此，在人類疾病 的治療中，優(yōu)選特異性阻斷IL-23的pl9亞基，因?yàn)樗缭趯?duì)抗感染和免疫監(jiān)視中干擾 IL-23的病原性炎癥性活性，而不干擾IL-12的有益活性。
[0004] 治療性抗體可用于阻斷細(xì)胞因子活性。在體內(nèi)使用抗體作為治療劑的一個(gè)顯著 局限是抗體的免疫原性。對(duì)于來(lái)源于非人物種的單克隆抗體，在人類中的重復(fù)使用導(dǎo)致 產(chǎn)生抗治療性抗體的免疫應(yīng)答。這種免疫應(yīng)答至少導(dǎo)致治療效果的損失，而且可能導(dǎo)致 致命的過(guò)敏反應(yīng)。因此，在人體中具有降低的免疫原性的抗體，如人源化的或完全的人 類抗體，優(yōu)選用于治療人類個(gè)體。美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2007/0009526,和國(guó)際申請(qǐng)公開 號(hào) TO 2007/076524、TO 2007/024846、TO 2007/147019 以及 TO 2009/043933 中公開了對(duì) IL-23pl9的示例性治療抗體，以其公開的全部?jī)?nèi)容引入這里作為參考。在以國(guó)際申請(qǐng)公開 號(hào)TO 2008/103432和WO 2008/103473公開的普通轉(zhuǎn)讓的申請(qǐng)，和普通轉(zhuǎn)讓的美國(guó)專利申 請(qǐng)公開號(hào)2007/0048315中公開了其他人源化的抗IL-23pl9抗體，以其公開的全部?jī)?nèi)容引 入這里作為參考。
[0005] 用于人體的抗體藥物可能它們的恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，或者可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)它 們的骨架序列稍微不同，但是它們的CDR序列一般都大部分顯著不同。即使與相同的蛋白， 相同的多肽，或者甚至可能相同的抗原表位結(jié)合的抗體，可包含完全不同的CDR序列。用于 人類的治療性抗體也可以獲自人種系抗體序列或非人（例如，嚙齒類動(dòng)物）種系抗體序列， 如在人源化抗體中，還導(dǎo)致可能的CDR序列中另外的差異。這些序列差異導(dǎo)致在溶液中不 同的穩(wěn)定性，和對(duì)溶解參數(shù)不同的反應(yīng)性。此外，氨基酸排列中的小變化，或者一個(gè)或幾個(gè) 氨基酸殘基的變化，會(huì)導(dǎo)致抗體穩(wěn)定性和對(duì)序列特異性降解途徑敏感性的顯著不同。因此， 預(yù)測(cè)最佳化抗體穩(wěn)定性所需的溶解條件目前是不可能的。常常分別研宄每個(gè)抗體以確定最 佳溶解制劑。Bhambhani 等（2012) J. Pharm. Sci. 101:1120。
[0006] 抗體也是相對(duì)高分子量蛋白質(zhì)（~150, OOODa)，例如，與其它的治療性蛋白質(zhì)如 激素和細(xì)胞因子相比較。因此，常常需要相對(duì)高體重含量的抗體藥物劑量以獲得所需的藥 物摩爾濃度。此外，經(jīng)常需要皮下給藥抗體藥物，由于這樣能啟動(dòng)自身給藥。自身給藥避免 了與觀察用于給藥的醫(yī)療設(shè)備相關(guān)的時(shí)間和費(fèi)用，例如，靜脈內(nèi)。皮下傳遞受單次注射中在 注射部位可實(shí)際傳遞的溶液體積限制，其一般為大約1到I. 5ml。一般使用預(yù)先填充的注射 器，或充滿藥物的液體溶液制劑而不是凍干形式的自動(dòng)注射器來(lái)完成皮下自身給藥，以避 免需要患者在注射之前重懸藥物。為了傳遞更高劑量的藥物，這種體積限制促進(jìn)了高度溶 液制劑的開發(fā)。然而，這種高濃度的抗體顯示了大分子群集作用和增加的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì) 相互作用，其導(dǎo)致物理學(xué)不穩(wěn)定性如乳光、自身結(jié)合、聚集、解折疊和相分離。這種高濃度抗 體溶液還會(huì)顯示高粘度（例如，>10厘泊），其降低預(yù)先填充注射器和自動(dòng)注射裝置的可注 射性。抗體藥物在貯存期間必須是穩(wěn)定的以確保功效和一致的劑量，因此選擇無(wú)論什么制 劑支持所需要的特性，如高濃度、澄清和可接受的粘度是關(guān)鍵的，在一般的貯存條件下在可 接受的長(zhǎng)貯存期限保持這些特性和藥物功效也是關(guān)鍵的。
[0007] 因此，存在穩(wěn)定的、高濃度的治療抗體的溶液制劑的需求，如與人IL_23pl9結(jié)合 的抗體。這種穩(wěn)定的溶液制劑將優(yōu)選在一般用于貯存用于自身給藥的藥物的條件下，也即 在注射器中在冷凍溫度下，在幾個(gè)月到幾年內(nèi)顯示穩(wěn)定性，其導(dǎo)致相應(yīng)藥物產(chǎn)品長(zhǎng)的貯存 期限。這種穩(wěn)定的、高濃度溶液制劑能進(jìn)行抗體藥物的包裝，用于通過(guò)自身給藥進(jìn)行高濃度 皮下注射。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供了人源化抗IL-23P19抗體13B8-b ("huml3B8-b"）的高濃度溶液制劑。 抗體huml3B8-b包含具有SEQ ID NO : 2的序列的兩條相同的輕鏈，和具有SEQ ID NO: 1 的序列的兩條相同的重鏈。
[0009] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述溶液制劑包含人源化的抗IL23P19抗體huml3B8-b、組氨 酸緩沖液pH 6. 0(±0. 3)、蔗糖和聚山梨酸酯80。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述溶液制劑包含 人源化抗IL-23p 19抗體-b、大約IOmM組氨酸緩沖液pH 6. 0 (±0. 3)、大約7%蔗糖和大約 0. 05%聚山梨酸酯80。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述溶液制劑包含人源化抗IL-23p 19抗體 13B8-b、IOmM組氨酸緩沖液pH 6. 0 (± 0. 3)、7 %蔗糖和0. 05 %聚山梨酸酯80。
[0010] 在不同的實(shí)施方案中，本發(fā)明的溶液制劑包含至少50、80、90、100、110或120mg/ ml抗體huml3B8-b。在其他的實(shí)施方案中，本發(fā)明的溶液制劑包含大約80-120mg/ml抗體 huml3B8-b、8〇-120mg/ml 抗體 huml3B8_b、大約 100mg/ml 抗體 huml3B8_b 和 100mg/ml 抗體 huml3B8_b〇
[0011] 另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及使用本發(fā)明抗IL-23pl9抗體huml3B8-b的高濃度溶液制 劑治療疾病的治療方法，所述疾病包括但不限于，炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖紊亂、癌 癥、傳染?。ɡ纾?xì)菌、分枝桿菌、病毒或真菌感染，包括慢性感染）、關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、牛皮 癬關(guān)節(jié)炎、肌腱骨止點(diǎn)炎癥、強(qiáng)直性脊柱炎、炎癥性腸病包括克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎、 多發(fā)性硬化、眼色素層炎、移植物抗宿主疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和糖尿病。再在另一個(gè)方面， 本發(fā)明涉及抗IL-23pl9抗體huml3B8-b的高濃度溶液制劑，用于治療這些相同的疾病。再 在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及抗IL_23pl9抗體huml3B8-b的高濃度溶液制劑在制備用于治療 這些相同疾病的藥物中的用途。
【附圖說(shuō)明】
[0012] 圖1顯示了用于確定包含huml3B8-b的制劑的最佳緩沖液和pH條件的日期。圖 IA顯示了用于不同的lmg/ml抗體制劑通過(guò)差示掃描量熱法（DSC)測(cè)定的解折疊溫度和通 過(guò)RP-HPLC測(cè)量的純度百分?jǐn)?shù)，圖IB顯示了通過(guò)HP-SEC測(cè)量的單體百分?jǐn)?shù)和晚洗脫峰百 分?jǐn)?shù)，作為幾種不同緩沖液（醋酸鹽、檸檬酸、磷酸酯和Tris)的pH的函數(shù)。實(shí)施例2和3 分別提供了 DSC和HP-SEC的簡(jiǎn)短論述。
[0013] 圖IC - IE分別顯示IOmM檸檬酸制劑作為pH的函數(shù)的各種特性，包括通過(guò)動(dòng)力學(xué) 光散射（DLS)測(cè)量的乳光（OD35tl)、水動(dòng)力學(xué)大?。╪m)分布，以及通過(guò)DSC測(cè)定的解鏈溫度。 實(shí)施例4和2分別提供了 DSC和DSC的簡(jiǎn)短論述。
[0014] 圖IF和IG分別顯示了通過(guò)高性能離子交換色譜法（HP-IEX)測(cè)定的隨時(shí)間的晚 期洗脫峰百分?jǐn)?shù)和主峰百分?jǐn)?shù)。實(shí)施例5提供了 HP-IEX的簡(jiǎn)短論述。
[0015] 圖IH和II分別顯示了不同pH的幾種緩沖液中的低濃度抗體制劑（lmg/ml)的通 過(guò)動(dòng)力學(xué)光散射（DLS)測(cè)量的乳光（OD 35tl)和水動(dòng)力學(xué)大?。╪m)，而圖IJ顯示了更濃縮的 抗體制劑（50和100mg/ml)通過(guò)DLS測(cè)定的的水動(dòng)力學(xué)大?。╪m)分布。實(shí)施例4中提供 了 DLS的簡(jiǎn)短論述。
[0016] 圖IK顯示了不同pH的各種緩沖液中通過(guò)HP-SEC測(cè)定的晚期洗脫峰隨時(shí)間的百 分?jǐn)?shù)。實(shí)施例3提供了 HP-SEC的簡(jiǎn)短論述。
[0017] 圖2A和2B分別顯示了包含各種賦形劑（IOOmM NaCl、7%蔗糖、7%海藻糖和6% 甘露糖醇）的huml3B8-b的制劑的通過(guò)DSC測(cè)定的解折疊溫度，以及乳光方面的變化。DS 指藥物物質(zhì)。實(shí)施例2提供了 DSC的簡(jiǎn)短論述。
[0018] 圖3A和3B分別顯示了通過(guò)-SEC測(cè)定的抗體百分?jǐn)?shù)和早期洗脫峰百分?jǐn)?shù)，圖3C 顯示了搖動(dòng)5天之前和之后的乳光，其作為存在或缺乏表面活性劑（0. 05 %聚山梨酸酯20、 0. 05%聚山梨酸酯80或Pluronic F-68)的函數(shù)。無(wú)表面活性劑（NS)樣品的5天搖動(dòng)實(shí) 際上超過(guò)3,因此是豐富規(guī)模的。實(shí)施例3提供了 HP-SEC的簡(jiǎn)短論述。
[0019] 圖4顯示了當(dāng)在各