一種豬瘟脾淋源活疫苗用稀釋液的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸用生物制品技術領域，具體涉及一種豬瘟脾淋源活疫苗用稀釋液。
【背景技術】
[0002] 豬瘟（CSF)是國際動物衛(wèi)生組織（OIE)和中國的A類法定傳染病，是我國強制性免 疫的重大動物疫病之一，是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的"第一殺手"。豬瘟是由豬瘟病毒引起的，無法 用藥物進行控制，疫苗免疫是最有效的辦法。
[0003] 目前國內外市售的豬瘟疫苗主要有豬瘟脾淋苗、豬瘟細胞苗以及豬瘟亞單位疫 苗，但市場上豬瘟疫苗的主流產品仍然是豬瘟脾淋苗和豬瘟細胞苗。作為疫苗中的經 典-精制豬瘟脾淋源活疫苗仍具有不可替代的作用。
[0004] 豬瘟脾淋源活疫苗選用中國豬瘟兔化弱毒株（C株)，該疫苗株能激發(fā)機體快速產 生免疫力、遺傳穩(wěn)定、毒力不返強，是國際上公認的目前世界上最為安全有效的弱毒疫苗 株。采用該毒株接種優(yōu)良家兔，收獲感染家兔的脾臟制成乳劑，與凍干保護劑混勻后經過冷 凍真空干燥制成豬瘟脾淋源活疫苗。
[0005] 目前市場認為豬瘟脾淋源活疫苗免疫效果不理想，對豬瘟脾淋活疫苗的認識仍存 在誤區(qū)，這主要和目前國內豬瘟脾淋源活疫苗使用方法不當、混合感染豬只免疫后應激過 大，以及質量參差不齊等情況有關。
[0006] 多糖是中藥活性成分之一，大量研宄表明，多糖及糖復合物在生物體內不僅是作 為能量資源和構成材料，更重要的是它存在于一切細胞膜結構中，參與生命現象中細胞的 各種活動。多糖類物質是所有生命有機體的重要組成部分，具有清除自由基、提高抗氧化酶 活性和抑制脂質過氧化的能力，同時多糖也具有很好的耐熱效果，多種實驗表明中藥多糖 可作為耐熱保護劑添加于活疫苗凍干保護劑中。
[0007] 維生素是機體代謝中必不可少的有機化合物。機體猶如一座極為復雜的化工廠， 不斷地進行著各種生化反應。其反應與酶的催化作用有密切關系。酶要產生活性，必須有 輔酶參加。已知許多維生素是酶的輔酶或者是輔酶的組成分子。因此，維生素是維持和調 節(jié)機體正常代謝的重要物質。
[0008] 黃酮類化合物是自然界中存在的多元酚類物質，也是自然界藥用植物中的主要活 性成分之一。它是指具有15個碳原子并以C6-C3-C6的方式構成的三環(huán)天然有機物，是植 物在長期自然選擇中產生的二級代謝產物，現在已分離鑒定的有4000多種。它廣泛存在于 果蔬、中草藥中，無毒副作用，它具有顯著的清除機體內自由基、抗老化、抗突變、調血脂降 血壓等藥理保健功能，是一類極具開發(fā)前景的天然有機抗氧化劑，這些抗氧化活性物質可 以減少和清除機體內自由基，具有預防疾病的作用。
[0009] 法氏囊素（bursin，BS)是從禽類特有的體液免疫中樞淋巴器官法氏囊（Bursa of fabricius)中分離出來的一種活性三肽物質，其結構為L-LyS-His-Gly-NH2。研宄表明，BS 能促進禽類和哺乳動物B淋巴細胞前體的分化、增殖，能提高B細胞系Daudi細胞內第二信 使cAMP和cGMP水平，加快B細胞內DNA轉錄成mRNA的速度，促進B細胞內蛋白質的生成， 從而使B細胞產生和分泌抗體能力加強。
[0010] 基于上述【背景技術】，本發(fā)明提出一種豬瘟脾淋源活疫苗用稀釋液。該保護劑主要 由中藥多糖、中藥黃酮、維生素、法氏囊素等組成。本發(fā)明所制備的疫苗稀釋液一方面可以 特異性的提高豬瘟脾淋疫苗的使用效果，同時還兼具了提高機體免疫力的功效。

【發(fā)明內容】

[0011] 針對現有技術存在的問題，本發(fā)明的目的在于設計提供一種豬瘟脾淋源活疫苗用 稀釋液的技術方案，該稀釋液能夠大幅度提高了機體的免疫力，提高體液免疫能力，刺激機 體產生高效的中和抗體，提高了機體預防疾病的能力。
[0012] 所述的一種豬瘟脾淋源活疫苗用稀釋液，其特征在于該稀釋液每1000 ml磷酸緩 沖液中含有中藥多糖15~50g、中藥黃酮20~60g、維生素5~10g、法氏囊素5~40mg， 所述的中藥多糖和中藥黃酮從以下中藥組合物中提取得到：連翹、拳參、貫眾、大薊、地榆、 山豆根、羚羊角和紫花地丁。
[0013] 所述的一種豬瘟脾淋源活疫苗用稀釋液，其特征在于該凍干保護劑每1000 ml磷 酸緩沖液中含有中藥多糖25~40g、中藥黃酮30~50g、維生素6~8g、法氏囊素10~ 30mg〇
[0014] 所述的一種豬瘟脾淋源活疫苗用稀釋液，其特征在于所述的中藥多糖和中藥黃 酮通過以下步驟制得： a、 按連翹20~40份、拳參10~20份、貫眾10~30份、大薊10~30份、地榆10~ 30份、山豆根10~20份、羚羊角10~30份和紫花地丁 10~20份稱取各中藥原料，切碎、 洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制 2小時，熬制過程中每10分鐘攪拌一次； b、 棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經1000 Orpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上 清； c、 將b中上清進行醇沉，沉淀即為粗制中藥多糖，上清即為粗制中藥黃酮； d、 用滅菌純化水洗滌c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進行溶 解，溶解后，按通過活性炭柱進行內毒素吸附，收集濾出液； e、 將d中上濾出液通過sevag法除去蛋白； f、 將e中中藥多糖進行真空冷凍干燥制得中藥多糖； g、 將c中粗制中藥黃酮進行減壓真空濃縮，濃縮物用滅菌注射用水稀釋清洗，再次進 行減壓真空濃縮，如此三次后經冷凍真空干燥制得中藥黃酮。
[0015] 所述的一種豬瘟脾淋源活疫苗用稀釋液，其特征在于所述的法氏囊素通過以下 步驟制得：取健康法氏囊組織，將法氏囊組織剔除筋膜和脂肪組織，PH7. 2滅菌冷PBS洗 凈；按1 :1比例加入pH 7. 2滅菌冷PBS，在組織勻漿機中進行高速勻漿；勻漿液中加入2. 5% 的胰蛋白酶，反復凍融3次，12000rpm離心20min，棄沉淀；上清用1000 da截留分子量的超 濾膜進行超濾，膜下液經〇. 22um濾膜過濾除菌，濾過液即為法氏囊素粗提液；粗提液經冷 凍真空干燥制得法氏囊素。
[0016] 所述的一種豬瘟脾淋源活疫苗用稀釋液，其特征在于所述的維生素包括D-生物 素70~80mg、葉酸20~30mg、煙酰胺2~5g和維生素 E 2~5g。
[0017] 上述的一種豬瘟脾淋源活疫苗用稀釋液，設計合理，與傳統(tǒng)的稀釋液相比其具有 以下優(yōu)點： 1.采用本發(fā)明凍干疫苗稀釋液在免疫注射時可以減少豬只疼痛感，降低豬只的應激反 應。
[0018] 2.采用本發(fā)明稀釋液，可以大大提高活疫苗的使用效果，快速的產生中和抗體，減 少免疫空檔期，降低豬只發(fā)病幾率，提高機體抵御疾病的能力。
[0019] 3.采用本發(fā)明稀釋液稀釋疫苗免疫機體后，能促進機體B淋巴細胞前體的分化、 增殖，加快B細胞內DNA轉錄成mRNA的速度，促進B細胞內蛋白質的生成，從而使B細胞產 生和分泌抗體能力加強，從而可提高機體免疫力。
【具體實施方式】
[0020] 為了使本發(fā)明更加容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解， 這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限止本發(fā)明的范圍，下列實施例中未提及的具體實 驗方法，通常按常規(guī)實驗方法進行。
[0021] 實施例1 :中藥多糖和中藥黃酮的制備 a、 按連翹20份、拳參20份、貫眾10份、大薊10份、地榆30份、山豆根10份、羚羊角10 份和紫花地丁 20份稱取各中藥原料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍 的純化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制2小時，熬制過程中每10分鐘攪拌一次； b、 棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經1000 Orpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上 清； c、 將b中上清進行醇沉，沉淀即為粗制中藥多糖，上清即為粗制中藥黃酮； d、 用滅菌純化水洗滌c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進行溶 解，溶解后，按〇. 5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后經1000 Orpm離心10分鐘，棄去沉 淀，收集上清； e、 將d中上清經0. 22um濾膜過濾除菌后，進行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液； f、 將e中中藥多糖濃縮液進行真空冷凍干燥即得到中藥多糖； g、 將c中粗制中藥黃酮進行減壓真空濃縮，濃縮物用滅菌注射用水稀釋清洗，再次進 行減壓真空濃縮，如此三次后，再經0. 22um濾膜過濾除菌，然后經冷凍真空干燥即得到中 藥黃酮。
[0022] 該實施例中步驟a中可以稱取連翹30份、拳參15份、貫眾20份、大薊15份、地榆 20