經(jīng)鼻流感疫苗組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 流感為由流感病毒引起的急性呼吸器傳染病，尤其在冬季，每年均會(huì)流行。另外， 有時(shí)成為世界性的大流行，因而重癥化而至死亡的情況也不少。對(duì)于流感，已知有通過接種 流感疫苗而具有一定的預(yù)防效果，在流行時(shí)期之前廣泛地進(jìn)行其接種。
[0003] 在日本，流感疫苗僅皮下接種流感病毒抗原的滅活蛋白質(zhì)成分的流感疫苗被認(rèn) 可，目前，該裂解疫苗被用作季節(jié)性流感疫苗。這樣的皮下接種型疫苗在肺炎等的流感的 重癥化預(yù)防方面有效性高，但作為流感病毒的感染部位的上呼吸道粘膜中的抗體誘導(dǎo)能力 低，感染防御效果不能說充分。另外，也存在觀察到注射給藥導(dǎo)致的疼痛或接種局部的炎癥 等導(dǎo)致的副作用的問題點(diǎn)。
[0004] 從這樣的問題點(diǎn)出發(fā)，迄今為止，從多種多樣的側(cè)面進(jìn)行了許多嘗試，作為新的疫 苗接種方法，經(jīng)鼻給藥型疫苗備受矚目。但是，報(bào)道有：在將目前被通用的裂解疫苗照原樣 經(jīng)鼻給藥的情況下，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及人中無法誘導(dǎo)對(duì)流感病毒的良好的免疫應(yīng)答。
[0005] 其中，將大腸桿菌易熱性毒素用于佐劑的世界上最早的裂解疫苗的經(jīng)鼻給藥型流 感疫苗在瑞士獲得認(rèn)可，從2000年10月開始出售[Berna Biotech社（瑞士）制、商品名 Nasalflu]，但由于佐劑的毒性，在2004年2月臨床使用被中止。另外，在專利文獻(xiàn)1中也 公開有含有佐劑的經(jīng)鼻給藥型流感疫苗，雖顯示通過含有佐劑而提高免疫誘導(dǎo)能力，但在 面臨實(shí)用化時(shí)，擔(dān)心使用的佐劑的毒性。
[0006] 另外，在經(jīng)鼻給藥時(shí)，對(duì)于復(fù)雜的鼻腔內(nèi)的構(gòu)造，謀求使流感疫苗廣范圍地遍及并 長(zhǎng)久展布及滯留，必須以專利文獻(xiàn)2所示的基劑中的噴霧方式進(jìn)行給藥等。
[0007] 如上所述，迫切期望從皮下或肌肉內(nèi)等接種的現(xiàn)有的流感疫苗出發(fā)，進(jìn)行作為新 一代流感疫苗的經(jīng)鼻給藥型疫苗的開發(fā)和實(shí)用化，但如何抑制為了提高免疫誘導(dǎo)能力而使 用的佐劑的毒性等，在面臨實(shí)用化方面存在各種問題。
[0008] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0009] 專利文獻(xiàn)
[0010] 專利文獻(xiàn) 1:TO2010/114169
[0011] 專利文獻(xiàn) 2:W02007/123193

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的目的在于，提供一種使用以前被認(rèn)可并使用的流感病毒滅活全粒子疫苗 作為抗原、不使用佐劑、以更少的抗原量的有效且副作用反應(yīng)小的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流 感疫苗組合物及其制造方法以及流感的預(yù)防方法。
[0013] 本發(fā)明人等鑒于上述問題點(diǎn)，進(jìn)行了潛心研宄，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過將含有羧基乙烯基 聚合物的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥凝膠基劑與流感病毒滅活全粒子疫苗組合，可不使用佐劑而提 高對(duì)人類的免疫誘導(dǎo)能力，其中該經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥凝膠基劑為了附加噴霧性能而從外部 賦予剪切力進(jìn)行了處理，直至完成本發(fā)明。即，本申請(qǐng)發(fā)明如下所示。
[0014] [1] -種經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其特征在于，包含：
[0015] ⑴流感病毒滅活全粒子、以及
[0016] (ii)為了附加噴霧性能而從外部賦予剪切力處理后的含有羧基乙烯基聚合物的 凝膠基劑，
[0017] 并且所述流感疫苗組合物不含有佐劑。
[0018] [2]根據(jù)[1]所述的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其中，（i)的流感病毒 滅活全粒子，每1種疫苗病毒株為1~500 μ gHA/mL。
[0019] [3]根據(jù)[1]或[2]所述的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其中，含有 0. lw/v%~1.0 w/v%的羧基乙烯基聚合物。
[0020] [4]根據(jù)[1]~[3]中任一項(xiàng)所述的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其中， 其使用為了附加下述噴霧性能而從外部賦予剪切力進(jìn)行了處理的含有羧基乙烯基聚合物 的噴霧給藥凝膠基劑：（1)制劑粒度分布范圍、（2)噴霧密度均勻性、和/或（3)噴射角度控 制。
[0021] [5]根據(jù)[1]~[4]中任一項(xiàng)所述的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其中， 其使用〇. 5w/v%~2. Ow/v%的含有羧基乙烯基聚合物的凝膠基劑，為了附加作為噴霧性 能的（1)制劑粒度分布范圍、（2)噴霧密度均勻性、和/或（3)噴射角度控制，從外部賦予 剪切力進(jìn)行處理，得到噴霧給藥凝膠基劑之后，與含有流感病毒滅活全粒子的病毒原液在 不賦予應(yīng)力的條件下在短時(shí)間內(nèi)均勻地混合而得到。
[0022] [6]根據(jù)[1]~[5]中任一項(xiàng)所述的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其中， 其使用對(duì)含有羧基乙烯基聚合物的基劑從外部賦予剪切力而附加有下述噴霧性能的噴霧 給藥凝膠基劑而制造：（1)在制劑粒度分布中，制劑平均粒徑在30 μπι~80 μπι的范圍，粒 度分布為80%以上在IOym~IOOym的范圍，（2)噴霧密度成為沒有偏斜的均等的全錐 形，（3)噴射角度控制在30°~70°的范圍。
[0023] [7]根據(jù)[1]~[5]中任一項(xiàng)所述的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其中， 其使用對(duì)含有羧基乙烯基聚合物的基劑從外部賦予剪切力而附加有下述噴霧性能的噴霧 給藥凝膠基劑而制造：（1)在制劑粒度分布中，制劑平均粒徑在40 μπι~70 μπι的范圍，粒 度分布為90%以上在IOym~IOOym的范圍，（2)噴霧密度成為沒有偏斜的均等的全錐 形，（3)噴射角度控制在40°~60°的范圍。
[0024] [8]根據(jù)[1]~[7]中任一項(xiàng)所述的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其中， 其為了能夠使用不具有泵功能的可噴霧的設(shè)備進(jìn)行噴霧給藥，而使用含有羧基乙烯基聚合 物的噴霧給藥凝膠基劑，
[0025] 該噴霧給藥凝膠基劑為了附加下述噴霧性能而被從外部賦予剪切力進(jìn)行了處理： (1)制劑粒度分布范圍、（2)噴霧密度均勻性、（3)噴射角度控制。
[0026] [9] 一種流感的預(yù)防方法，其包括使用可將粘稠的制劑從各鼻孔噴霧至鼻腔內(nèi)粘 膜的設(shè)備，將[1]~[8]中任一項(xiàng)所述的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物給藥至需要 該組合物的對(duì)象。
[0027] [10] [1]~[8]中任一項(xiàng)所述的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物用于預(yù)防流 感的用途。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明，可以提供一種以流感病毒滅活全粒子作為有效成分、且不使用佐劑、 以更少的抗原量誘導(dǎo)有效的免疫應(yīng)答、且由于不使用佐劑、因此副作用小的經(jīng)鼻粘膜噴霧 給藥型流感疫苗組合物，可以可靠地對(duì)付流感的流行。
[0029] 本發(fā)明的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物由于含有為了附加噴霧性能而從 外部賦予剪切力進(jìn)行了處理的包含羧基乙烯基聚合物的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥凝膠基劑，因 此，通過廣泛且長(zhǎng)久地展布、滯留于鼻腔粘膜，可以以更少的抗原量誘導(dǎo)有效的免疫應(yīng)答。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物的制造方法，可以提供一種經(jīng) 鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其由于可不賦予應(yīng)力且在短時(shí)間內(nèi)處理，因此，可以良 好地維持病毒滅活全粒子的抗原性，誘導(dǎo)有效的免疫應(yīng)答，且副作用小。
[0031] 予以說明，在本發(fā)明中，雖不含有作為免疫增強(qiáng)劑的佐劑，但可以提供與包含流感 病毒疫苗和佐劑的組合物同等、或更強(qiáng)的上呼吸道粘膜及全身的免疫誘導(dǎo)。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 本發(fā)明提供一種經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥型流感疫苗組合物，其特征在于，含有為了附 加噴霧性能而從外部賦予剪切力進(jìn)行處理的包含羧基乙烯基聚合物的經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥 凝膠基劑和流感病毒滅活全粒子，且不使用佐劑。
[0033] 本發(fā)明中使用的"為了附加噴霧性能而從外部賦予剪切力進(jìn)行處理的含有羧基乙 烯基聚合物的凝膠基劑"是指例如在W02007/123193中所公開的"含有皮膚、粘膜附著劑的 凝膠基劑"，為含有羧基乙烯基聚合物、適當(dāng)含有結(jié)冷膠（Gellan Gum)、從外部賦予剪切力 而調(diào)整了粘度的基劑。所述的基劑的特征在于，可以通過從外部賦予剪切力而調(diào)整為各種 粘度，可以以適合目的的方式控制從噴霧容器的噴射角度、噴射密度。另外，作為對(duì)發(fā)展中 國家的多人數(shù)的接種及對(duì)大流行病的防備，通過使用W02007/123193及W02007/123207中 所記載的、作為多次劑量噴霧容器的上方排壓無空氣式噴霧容器，噴霧容器的給藥在任一 角度或角度的范圍都可以沒有容器內(nèi)殘量地使用，可以實(shí)現(xiàn)其目的。在本發(fā)明中，通過使用 所述的噴霧給藥凝膠基劑，流感病毒滅活全粒子的鼻腔粘膜中的展布性廣范圍地長(zhǎng)時(shí)間提 高，由此可提高疫苗的免疫原性。
[0034] 成為經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥用基劑的原料的羧基乙烯基聚合物為以丙烯酸為主成分 聚合而得到的親水性聚合物，為了制備水性凝膠劑，可以沒有限定地使用通常使用的醫(yī)藥 品添加物。
[0035] 為了附加噴霧性能而從外部賦予剪切力進(jìn)行處理的含有羧基乙烯基聚合物的凝 膠基劑的含量，換算成羧基乙烯基聚合物的含量，為〇. 1~l.Ow/v%，優(yōu)選為0. 3~0. 7w/ v% 〇
[0036] 本發(fā)明的疫苗的特征在于，含有流感病毒滅活抗原粒子作為抗原。本發(fā)明中使用 的流感病毒滅活全粒子是指：從培養(yǎng)流感病毒而得到的病毒浮游液，保持病毒的形態(tài)地精 制的病毒粒子。因此，本發(fā)明的流感疫苗是指：除含有亞病毒體（subvirion)的裂解疫苗、 及含有精制HA或NA的亞單位疫苗之外的疫苗，也被稱為全粒子疫苗。
[0037] 所述流感病毒滅活全粒子優(yōu)選為在不存在表面活性劑及醚類的條件下從病毒浮 游液精制的流感病毒滅活全粒子。將包含為了與經(jīng)鼻粘膜噴霧給藥凝膠基劑的混合而被精 制或濃縮的滅活流感病毒全粒子的病毒液稱為病毒原液。本發(fā)明的疫苗的流感病毒滅活全 粒子的濃度優(yōu)選每1種疫苗病毒株為1~500 μ gHA/mL (HA換算），更優(yōu)選20~250 μ gHA/ mL (HA換算）。所述濃度通過測(cè)定HA蛋白質(zhì)的濃度來得到。
[0038] 在本發(fā)明中，流感病毒也包含目前已知的全部類型及亞型、及將來被分離、鑒定的 類型及亞型。此外，迄今為止，沒有觀察到在人類中的流行，從有效地防止今后對(duì)人的感染 的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選包含選自除流感病毒A型的Hl及H3之外的Hl~16 (即H2及H4~16) 中的亞型和選自Nl~9中的亞型的組合的亞型。這些亞型也被稱為新型流感病毒。所述 亞型更優(yōu)選選自H5、7及9中的亞型和選自Nl~9中的亞型的組合。流感病毒可以為屬于 相同的亞型的1種株，也可以為屬于相同的亞型的2種以上的株，還可以為屬于不同的亞型 的2種以上的株。
[0039] 另外，流感病毒可以為從感染動(dòng)物或患者中分離的株，也可以為以基因工程的方 式在培養(yǎng)細(xì)胞中構(gòu)建的重組病毒。就流感病毒的培養(yǎng)方法而言，可以將病毒接種于雞蛋的 尿膜腔內(nèi)而培養(yǎng)，也可以使培養(yǎng)細(xì)胞感染而培養(yǎng)。
[0040] 佐劑是指具有免疫應(yīng)答的強(qiáng)化或抑制等調(diào)節(jié)活性的物質(zhì)的總稱，是為了提高抗原 的免疫原性而在疫苗中添加的免疫增強(qiáng)劑，迄今為止研宄了多種物質(zhì)。另一方面，通過使用 佐劑而提高疫苗的免疫效果，相反，也存在可產(chǎn)生炎癥等副作用的缺點(diǎn)。當(dāng)然，作為經(jīng)鼻給 藥型疫苗的佐劑，雖可列舉幾個(gè)候選者，但由于沒有廣泛地確認(rèn)安全性的佐劑，因此，含