一種提取花生殼總黃酮的工藝的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及提取花生殼總黃酮的工藝。
【背景技術】
[0002] 花生是豆科一年生草本植物，廣泛種植在世界各地。我國是花生生產大國，年產 量達到1500萬噸以上；同時也是世界上農業(yè)廢棄物產出量最大的國家，每年農業(yè)生產廢棄 物產量約為6. 5億噸。農業(yè)廢棄物綜合利用問題，是世界各國普遍需要解決的課題。特別 是隨著自然資源日趨短缺和廢棄物數(shù)量劇增，農業(yè)廢棄物越來越受到人們重視。農業(yè)廢棄 物綜合利用問題，是世界各國普遍需要解決的課題。特別是隨著自然資源日趨短缺和廢棄 物數(shù)量劇增，農業(yè)廢棄物越來越受到人們的重視。農業(yè)廢棄物資源化已成為農業(yè)循環(huán)經濟 的重要內容，是改善農業(yè)生態(tài)環(huán)境的必然要求，是節(jié)約型社會的一個具體體現(xiàn)。對于緩解資 源不足，減少環(huán)境污染，拓展農業(yè)外部功能，提高農業(yè)綜合效益，都具有重要的意義。花生殼 就是農產品加工廢棄物的一種。我國年副產花生殼近4000千噸，占花生果重的30%左右。 這些花生殼除了少部分被利用做飼料和燃料外，大部分被廢棄掉，造成了資源極大浪費。據(jù) 有關資料報道，花生殼中粗蛋白含量4. 8% -7. 2%，粗脂肪含量1. 2% -2. 8%，無氮浸出物 10. 6% -21. 1%，粗纖維65. 7% -70. 3%。此外，還含有鈣、磷、鎂、鉀、鐵、錳、鋅、銅等礦物 質。作為藥用成分，主要是黃酮類化合物，其中木犀草素是有效成分，此外還含有谷甾 醇-D-葡萄糖苷、皂苷等。因此，為花生殼找合理的應用途徑，提高其利用價值具有重要意 義。
[0003] 心血管疾病是目前危害人類健康的第一殺手，以木庫草素為代表的花生殼中黃酮 類成分被認為能降低血壓、改善高血脂癥狀，美國已開發(fā)了花生殼提取物用于降低高血壓、 高血脂的藥物；日本有關食品研宄部門也在進行花生殼提取物的藥學研宄，這類由花生殼 提取物開發(fā)的藥品將很快進入臨床。此外，黃酮類化合物是植物次生代謝產物，廣泛低存在 于自然植物中，以游離態(tài)或與糖結合為苷的形式存在，不僅數(shù)量種類繁多，而且結構類型復 雜多樣，表現(xiàn)多種多樣的藥理活性，能防治心腦血管系統(tǒng)疾病和呼吸系統(tǒng)疾病，具有抗炎抑 菌、降血糖，抗氧化，抗輻射、抗癌、抗腫瘤及增強免疫力等藥理作用。

【發(fā)明內容】

[0004] 為了克服現(xiàn)有技術不利于工業(yè)化生產的缺陷，本發(fā)明公開了一種節(jié)約成本，操作 簡單的提取花生殼總黃酮的工藝，該工藝采用大孔吸附樹脂富集藥材中有效成分，再結合 其他方法進行定性鑒定和含量測定，得到了總黃酮含量較高的產物，為制劑研宄打下良好 基礎。
[0005] 本發(fā)明的花生殼總黃酮的提取方法，包括以下步驟：
[0006] 1)取適量藥材，進行粉碎，置于圓底燒瓶中，加入10倍量濃度為70%的乙醇溶液， 浸泡24h，回流提取3次，每次2h。合并提取液，回收乙醇，蒸干殘余提取溶劑，得浸膏；
[0007] 2)將花生殼粗提取物浸膏加入適量的水，用玻璃棒攪拌至混懸，轉移至萃取瓶 中；
[0008] 3)加入等體積石油醚，蓋上瓶塞，輕輕震蕩數(shù)次，靜置12h，轉移石油醚層，并加入 等體積石油醚，直至石油醚層無色；
[0009] 4)向石油醚萃取后的水層加入等體積乙酸乙酯，蓋上瓶塞，輕輕震蕩數(shù)次，靜置 12h；
[0010] 5)采用旋轉蒸發(fā)儀回收乙酸乙酯，并將得到的萃取物水浴蒸干，得到花生殼總黃 酮粉末，重復上述操作，直至乙酸乙酯層無色；
[0011] 6)大孔吸附樹脂精制，條件如下：樹脂柱：(65. 5cm*100cm;吸附條件：上柱液總黃 酮含量I. 4mg/ml;上柱液pH6. 5 ;上柱液體積約1600mL;上柱流速lBV/h;采用2次上樣法； 洗脫條件：先用水洗至流出液無色；洗脫劑60%乙醇；洗脫劑流速3BV/h;洗脫體積：開始 時，洗脫液顏色為棕黃色，之后顏色變淺直至恒定，此時停止收集。
[0012] 本發(fā)明的有益效果為：提取精制工藝操作簡單且結果穩(wěn)定可靠，所需試劑器材均 可重復利用，工業(yè)能耗極低，原料成本低廉，非常適合大規(guī)模的工業(yè)化生產。
【具體實施方式】
[0013] 下面結合具體實施例對本發(fā)明進一步解釋說明。
[0014] 實施例1
[0015] 提取方法的考察如下：將花生殼適當粉碎，稱取l〇g，置于圓底燒瓶中，加入10倍 量濃度為70%乙醇，分別采用超聲提取法和回流提取法，每種方法提取3次，每次lh。過濾， 精密吸取0. 4mL濾液置于IOmL量瓶中，加入2mL5%的AlCl3溶液，再加入lmol/LCH3C00K 溶液3. 2mL，最后用甲醇溶解并定容至刻度。按照紫外分光光度法在200-600nm波長范圍內 進行掃描。按照標準曲線方程A= 0. 0894C-0. 022,r= 0. 9998計算出總黃酮含量。以總 黃酮提取率（提取物總黃酮含量/藥材量）和轉移率（提取物總黃酮含量/藥材中總黃酮 含量*100% )為指標來評價提取方法優(yōu)劣。結果見表1。
[0016] 表1總黃酮提取方法的考察
[0017]
[0018] 由上表可知，回流提取法和超聲提取法所得總黃酮提取率和轉移率相近，考慮到 工業(yè)生產，故本文最終選用回流提取法。
[0019] 實施例2
[0020] 本文采用乙醇作為提取溶劑來提起花生殼總黃酮，及保證了總黃酮含量，又減少 了有機溶劑污染。
[0021] 實施例3
[0022] 乙醇濃度的考察如下：將花生殼適當粉碎，稱取10g，置于圓底燒瓶中，加入10倍 量濃度為O%、10 %、30 %、50 %、70 %、90 %乙醇溶液，回流提取2h，過濾，將濾液按照實施 例1中方法測定吸光度。再按照實施例1中的標準曲線計算出總黃酮含量。以總黃酮提取 率和轉移率為指標來選擇乙醇的最優(yōu)濃度。結果見表2
[0023] 表2在不同乙醇濃度下總黃酮的提取率和轉移率的比較
[0024]
[0025] 由上表可知，當采用濃度為70%乙醇回流提取時，提取率和轉移率最高。因此選擇 70%乙醇為提取溶劑。
[0026] 實施例4
[0027] 正交試驗對提取工藝的優(yōu)化如下：取花生殼9份，選擇溶劑用量（A)、提取次數(shù) (B)、提取時間（C)及浸泡時間（D)作為考察對象，以總黃酮提取率為指標，選用L9(34)正 交表進行試驗。因素水平設計及結果見表3和表4
[0028] 表3因素水平設計正交試驗設計
[0029]
[0032] 由上表可知，直觀分析結果表明各因素對總黃酮提取率影響大小順序為：A>D> C>B，最優(yōu)組合為A3B3C2D1，考慮到因素D對總黃酮提取率影響較大，而因素B影響較小，故 綜合考慮，確定最佳提取物工藝為A3B2C2D3,即藥材浸泡24h，10倍量濃度為70%乙醇，提取 3次，每次2h。
[0033] 實施例5
[0034] 最佳提取工藝重現(xiàn)性試驗如下：按正交試驗確定的提取工藝，取花生殼3份，適當 粉碎，每份稱取l〇〇g，置于圓底燒瓶中，加入10倍量濃度70%乙醇溶液，浸泡24h，回流提 取3次，每次2h。合并提取液，回收乙醇，蒸干殘余提取溶劑，得浸膏。按實施例1中的方 法測定吸光度，再按實施例1中的標準曲線方程總黃酮含量。在以下色譜條件下，測定木 犀草素含量：色譜柱：大連江申C18-BDS柱（5ym，200mm*4. 6mm);流動相：甲醇：0. 2%磷酸 (51 ::49);流速：lmL/min;檢查波長：350nm;柱溫：室溫；進樣量：20yL。以總黃酮提取率 和轉移率為目標，考察工藝重現(xiàn)性。并記錄膏量，出膏率。結果見表5。
[0035] 表5精制結果
[0036]
[0038] 由上表可知，提取工藝重現(xiàn)性良好。且粗提取物中總黃酮含量約為7. 8%，木犀草 素含量為3. 7%。
[0039] 實施例6
[0040] 采用石油醚對花生殼總黃酮粗提取物萃取，意在除去提取物中小極性雜質。具體 操作方法如下：將花生殼粗提物浸膏加入適量的水，用玻璃棒攪拌至混懸，轉移至萃取瓶 中；加入等體積石油醚，蓋上瓶塞，輕輕震蕩數(shù)次，精制12h，轉移石油醚層，并重新加入等 體積石油醚，重復上述操作，直至石油醚層無色?；厥帐兔?，將水層保留待用。最終試驗 共萃取3次后，石油醚層無色。
[0041] 實施例7
[0042] 將石油醚萃取后的水層溶液用乙酸乙酯進行萃取，意在萃取水層中的黃酮類物 質，具體方法如下：向石油醚萃取后的水層加入等體積乙酸乙酯，蓋上瓶塞，輕輕震蕩數(shù)次， 靜置12h，采用旋轉蒸發(fā)儀回收乙酸乙酯，并將得到的萃取物水浴蒸干，得花生殼總黃酮粉 末。重復上述操作，直至乙酸乙酯層無色。最終試驗共萃取5次后，乙酸乙酯層無色。合并 萃取物，稱重，按照實施例1和實施例5中的方法分別測定萃取物中總黃酮含量和木犀草素 含量，并計算轉移率。