一種燕窩提取物的制備方法、制得的燕窩提取物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及一種燕窩提取物的制備方法、制得的燕窩提 取物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 燕窩是雨燕科動物金絲燕及多種同屬燕類用唾液與絨羽等混合凝結(jié)所筑成的巢 窩，又稱燕菜、燕根、燕蔬菜。其主要產(chǎn)于我國南海諸島及東南亞各國。燕窩的營養(yǎng)較高，是 中國傳統(tǒng)的名貴食品之一。
[0003] 燕窩現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，燕窩主要成分有；水溶性蛋白質(zhì)、碳水化合物；微量元 素：巧、磯、鐵、鋼、鐘及對促進(jìn)人體活力起重要作用的氨基酸。燕窩獨(dú)特的蛋白質(zhì)成份含量 的生物活性分子，有助于人體組織的生長、發(fā)育及病后復(fù)原。
[0004] 碳水化合物是身體熱量的主要來源，與蛋白質(zhì)相輔相成，使蛋白質(zhì)發(fā)揮提供熱量 W外的功能，也可促進(jìn)脂肪的代謝。燕窩中所含有的表皮生長因子和燕窩的水溶性物質(zhì)可 直接刺激細(xì)胞分裂、再生、組織重建，使得燕窩對人體的滋補(bǔ)、復(fù)原起著很大的作用。巧質(zhì)可 W增強(qiáng)血液在皮膚破損時(shí)的凝結(jié)能力，也幫助人體吸收維他命B12。燕窩中含有豐富的礦 物質(zhì)、活性蛋白質(zhì)與膠原質(zhì)等營養(yǎng)，其中的表皮生長因子巧pidermalgrowth化ctor，EGF) 能夠強(qiáng)烈刺激細(xì)胞再生、分裂和組織重建。
[0005] 據(jù)清代趙學(xué)敏的《本草綱目拾遺》載；"燕窩大養(yǎng)肺陰，化疲止嗽，補(bǔ)而能清，為調(diào)理 虛損勞疾之圣藥。一切病之由于肺虛不能清肅下行者，用此者可治之。"據(jù)有關(guān)專家研究發(fā) 現(xiàn)，燕窩中含有EGF和輔助細(xì)胞分裂成分，有助于刺激細(xì)胞生長及繁殖，對人體組織生長、 細(xì)胞再生，W及細(xì)胞的免疫功能均有促進(jìn)作用。加之燕窩還含有大量的粘蛋白、糖蛋白、巧、 磯等多種天然營養(yǎng)成份，有潤肺燥、滋腎陰、補(bǔ)虛損的功效，能增強(qiáng)人體對疾病的抵抗力，有 助于抵抗傷風(fēng)、咳嗽和感冒。因此，對吸煙和患有呼吸道疾病者最有效，協(xié)助病后的人體恢 復(fù)健康，是一種純正高貴的天然保健品。燕窩對潤肺健腰，壯脾健胃，外傷止血等有獨(dú)特療 效。
[0006] 目前，現(xiàn)有的提取和凍干燕窩提取物的方法主要是先超聲粉碎燕窩，然后再加酶 水解，進(jìn)一步離屯、、干燥后凍干。除了酶促水解步驟外，現(xiàn)有的技術(shù)還需要經(jīng)過粉碎、浸泡、 煮沸、調(diào)節(jié)PH值等預(yù)處理步驟來提高水解的效率，化及離屯、、過濾、干燥等后續(xù)處理步驟來 對水解產(chǎn)物進(jìn)行處理W得到燕窩提取物。工藝繁復(fù)，且產(chǎn)品產(chǎn)率低。按此方法得到的燕窩 提取物不僅美容活性成分含量低，且還可能含有各種添加劑。
[0007] 因此，提供一種燕窩活性成分純度高、活性好的燕窩提取物的制備方法具有重要 的顯不意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引有鑒于此，本發(fā)明提供一種燕窩提取物的制備方法、制得的燕窩提取物及其應(yīng)用。 該方法提高了燕窩提取物中蛋白的活性和含量，獲得的燕窩提取物具有獨(dú)特的美白嫩膚、 美顏保健、枯斑除污垢、促進(jìn)血液循環(huán)、改善肌膚等功效，提高了產(chǎn)品品質(zhì)。
[0009] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供W下技術(shù)方案：
[0010] 本發(fā)明提供了一種燕窩提取物的制備方法，包括如下步驟：
[0011] 步驟1 ;取燕窩與25°C~40°C的水混合、浸泡，過濾，收集濾渣；
[001引 步驟2 ;取所述濾渣，于-80°C冷凍1~2h，再于10°C~35°C融化0. 5~比，按照 上述操作反復(fù)凍融，洗漆、過濾，收集濾液和濾渣；
[0013] 步驟3;取步驟2所述濾渣，與中性蛋白酶混合，酶解，獲得消化液；
[0014] 步驟4;取步驟3所述消化液稀釋、過濾后，與步驟2所述濾液混合濃縮，獲得濃縮 液。
[0015] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，Wg/L計(jì)，步驟1中所述燕窩與所述水的質(zhì)量體 積比為1: (300~500)。
[0016] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，步驟1中所述浸泡的時(shí)間為3~2化。為了達(dá)到 更優(yōu)的提取效果，針對不同的燕窩，浸泡的時(shí)間也不相同。白燕或黃燕浸泡3~lOh，血燕浸 泡6~2化。
[0017] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，步驟1中所述過濾采用篩網(wǎng)的目數(shù)為70目。
[0018] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，步驟2中所述反復(fù)凍融的次數(shù)為3~6次。
[0019] 作為優(yōu)選，Wg/L計(jì)，所述反復(fù)凍融后的濾渣與洗漆所用水的質(zhì)量體積比為1 ; (4 ~5)。
[0020] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，步驟3中所述中性蛋白酶的酶活為30萬U/g，所 述中性蛋白酶的濃度為0. 1%~0.5%，所述中性蛋白酶與步驟2所述濾渣的質(zhì)量比為1~ 2 ;2 ~3。
[0021] 作為優(yōu)選，中性蛋白酶溶液的配制方法為；取0. 1-0. 5mg的中性蛋白酶粉末溶解 在100ml的PBS溶液中，0. 22yM的一次性無菌過濾器過濾后4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0022] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，步驟3中所述酶解的時(shí)間為2~她。
[0023] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，步驟4所述稀釋為取所述消化液與水混合；所 述水與所述消化液的體積比為5~10:1。
[0024] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，步驟4所述濃縮的比例為15:1，所述濃縮的溫 度為2°C~8°C。
[0025] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，獲得濃縮液后還包括凍干的步驟；所述凍干的 溫度為-35°C~-20°C，所述凍干的真空度為50化~200Pa，所述凍干的時(shí)間為3化~36h。
[0026] 本發(fā)明還提供了上述制備方法制得的燕窩提取物。
[0027] 本發(fā)明還提供了上述制備方法制得的燕窩提取物在制備促進(jìn)細(xì)胞再生、增強(qiáng)免疫 力、養(yǎng)顏、延緩衰老的藥物、食品、化妝品中的應(yīng)用。
[002引本發(fā)明提供的燕窩提取物的制備方法具有W下優(yōu)點(diǎn)：
[0029] (1)避免用開水燭燕窩，保證了燕窩提取物中蛋白的活性和純度；
[0030] (2)用中性蛋白酶消化。獲得的燕窩提取物具有獨(dú)特的美白嫩膚、美顏保健、枯斑 除污垢、促進(jìn)血液循環(huán)、改善肌膚等功效，提高了產(chǎn)品品質(zhì)；
[0031] (3)將燕窩提取物的濾液先進(jìn)行濃縮再進(jìn)行凍干，節(jié)省成本，提高穩(wěn)定性，延長有 效期。
【附圖說明】
[0032] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
[003引圖1示EGF標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值曲線；
[0034] 圖2示生物素標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0035] 本發(fā)明公開了一種燕窩提取物的制備方法、制得的燕窩提取物及其應(yīng)用，本領(lǐng)域 技術(shù)人員可W借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換 和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法 及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范 圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0036] 本發(fā)明提供的燕窩提取物的制備方法、制得的燕窩提取物及其應(yīng)用中所用原料及 試劑均可由市場購得。其中，生物素化抗體工作液購自Bilegend公司；酶結(jié)合物工作液購 自Bilegend公司；顯色底物購自北京達(dá)科為生物技術(shù)有限公司。
[0037] 下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：
[003引實(shí)施例1燕窩提取物的制備
[0039] (1)從市面上購買燕窩20g;
[0040] 似將白燕或黃燕用水（25°C，Wg/L計(jì)，燕窩與水的質(zhì)量體積比為1:450)浸泡約 3h,血燕用溫水浸泡約化；
[0041] (3)將浸泡在水中的燕窩用70目的篩網(wǎng)過濾，得到燕窩濾渣；
[00創(chuàng) （4)收集燕窩濾渣，在10°C和-80°c冰箱中反復(fù)凍融3次，破碎燕窩濾渣；
[0043] (5)用水洗漆兩次，每次2min，分別過濾，收集洗漆后的濾液；
[0044] (6)同時(shí)將濾渣收集起來，用0.4%的中性蛋白酶溶液（中性蛋白酶酶活為；30 萬u/g;中性蛋白酶溶液的配制；0. 4mg的中性蛋白酶粉末溶解在100ml的PBS溶液中， 0. 22 的一次性無菌過濾器過濾后4°C保存?zhèn)溆茫┫喔C濾渣化；所述中性蛋白酶與 步驟2所述濾渣的質(zhì)量比為1~2 ;2~3。
[0045] (7)用消化液10倍體積的S蒸水稀釋燕窩消化液；
[0046] (8)將稀釋后的燕窩消化液用100目不誘鋼篩網(wǎng)過濾；
[0047] (9)收集消化后的濾液，與妨中得到的濾液混合，將所有濾液按照15:1的比例 (及濃縮前后的比值為15:1)在低溫條件巧°C)下進(jìn)行濃縮；
[0048] (10)隨后將濃縮液進(jìn)行凍干，凍干溫度為-35°C，真空度為50-200化，凍干時(shí)間為 36h，即得到燕窩提取物凍干粉28yg，產(chǎn)率為1. 4%。
[0049] 實(shí)施例2燕窩提取物的制備
[0050] (1)從市面上購買燕窩20g;
[0化^ 似將白燕或黃燕用水（40。Wg/L計(jì)，燕窩與水的質(zhì)量體積比為1:350)浸泡約 她，血燕用溫水浸泡約1她；
[0化2] (3)將浸泡在水中的燕窩用70目的篩網(wǎng)過濾，得到燕窩濾渣；
[005引 （4)收集燕窩濾渣，在10°C~35°C和-80°C冰箱中反復(fù)凍融5次，破碎燕窩濾渣；
[0054] (5)用水洗漆兩次，每次5min，分別過濾，收集洗漆后的濾液；
[0化5] (6)同時(shí)將濾渣收集起來，用0. 2 %的中性蛋白酶溶液（中性蛋白酶酶活為；30 萬U/g;中性蛋白酶溶液的配制；0. 2mg的中性蛋白酶粉末溶解在100ml的PBS溶液中， 0. 22 的一次性無菌過濾器過濾后4°C保存?zhèn)溆茫┫喔C濾渣化；所述中性蛋白酶與 步驟2所述濾渣的質(zhì)量比為1~2 ;2~3。
[0056] (7)用消化液5倍體積的=蒸水稀釋燕窩消化液；
[0057] 做將稀釋后的燕窩消化液用100目不誘鋼篩網(wǎng)過濾；
[005引 （9)收集消化后的濾液，與妨中得到的濾液混合，將所有濾液按照15:1的比例 (及濃縮前后的比值為15:1)在低溫條件（4°C)下進(jìn)行濃縮；
[0化9] (10)隨后將濃縮液進(jìn)行凍干，凍干溫度為-20°C，真空度為50-200化，凍干時(shí)間為 36h，即得到燕窩提取物凍干粉8yg，產(chǎn)率為1. 4%。
[0060] 實(shí)施例3燕窩提取物的制備
[0061] (1)從市面上購買燕窩20g ;
[006引似將白燕或黃燕用水（37。Wg/L計(jì)，燕窩與水的質(zhì)量體積比為1:400)浸泡約 lOh，血燕用溫水浸泡約2化；
[006引 （3)將浸泡在水中的燕窩用70目的篩網(wǎng)過濾，得到燕窩濾渣；
[0064] (4)收集燕窩濾渣，在25°C和-80°C冰箱中反復(fù)凍融4次，破碎燕窩濾渣；
[00化](5)用水洗漆兩次，每次4min，分別過濾，收集洗漆后的濾液；
[0066] (6)同時(shí)將濾渣收集起來，用0.3%的中性蛋白酶溶液（中性蛋白酶酶活為；30 萬U/g;中性蛋白酶溶液的配制；0. 3mg的中性蛋白酶粉末溶解在100ml的PBS溶液中， 0. 22 的一次性無菌過濾器過濾后4°C保存?zhèn)溆茫┫喔C濾渣化；所述中性蛋白酶與 步驟2所述濾渣的質(zhì)量比為1~2 ;2~3。
[0067] (7)用消化液8倍體積的S蒸水稀釋燕窩消化液；
[0068] 做將稀釋后的燕窩消化液用100目不誘鋼篩網(wǎng)過濾；
[0069] (9)收集消化后的濾液，與妨中得到的濾液混合，將所有濾液按照15:1的比例 (及濃縮前后的比值為15:1)在低溫條件化°