利用了hmgb1片段的針對(duì)脊髄損傷的新型治療方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及包含HMGB1片段的針對(duì)脊髄損傷的新型治療用藥物組合物及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞是具有多能性的生物體內(nèi)干細(xì)胞，已知能夠分化為成骨細(xì)胞、 脂肪細(xì)胞、軟骨等。近年來(lái)已開(kāi)始報(bào)告，通過(guò)對(duì)具有腦梗塞等組織損傷的患者施用自體骨髄 間充質(zhì)干細(xì)胞，能夠促進(jìn)組織損傷的痊愈。但是，骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞由于是存在于骨髄中的 稀少的細(xì)胞，因此能夠從患者采集的量存在限制。因此，難以確保寬范圍的組織損傷的治療 所需要量的骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞。因此，現(xiàn)在發(fā)展了通過(guò)將骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞臨時(shí)培養(yǎng)、使其 增殖來(lái)確保治療所需的細(xì)胞數(shù)的方法。但是，將骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞維持未分化狀態(tài)地進(jìn)行 培養(yǎng)是極其困難的。另外，還存在很多病毒、細(xì)菌的污染、細(xì)胞的癌化等這樣附隨的需要解 決的課題。另外，用于培養(yǎng)安全性、品質(zhì)得到保證的細(xì)胞的費(fèi)用極其可觀。
[0003] 另一方面，已知骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脊髄損傷具有痊愈促進(jìn)效果。該效果推測(cè)是 由于具有多能性的骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞分化成神經(jīng)細(xì)胞、或者聚集于損傷組織的骨髄間充質(zhì) 干細(xì)胞供給生長(zhǎng)因子等具有組織損傷改善效果的成分。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0005] 專(zhuān)利文獻(xiàn)
[0006] 專(zhuān)利文獻(xiàn) 1 :W02008/053892
[0007] 專(zhuān)利文獻(xiàn) 2 :TO2007/015546
[0008] 專(zhuān)利文獻(xiàn) 3 :TO2009/133939
[0009] 專(zhuān)利文獻(xiàn) 4 :W02009/133943
[0010] 專(zhuān)利文獻(xiàn) 5 :W02009/133940
[0011] 專(zhuān)利文獻(xiàn) 6 :W02004/004763
[0012] 非專(zhuān)利文獻(xiàn)
[0013] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 1 :Bustin 等、Mol Cell Biol、19 :5237-5246、1999 年
[0014] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 2 :Hori 等、J. Biol. Chem.、270、25752-25761、1995 年
[0015] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 3 :Wang 等、Science、285 :248-251、1999 年
[0016] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 4 :Muller 等、EMBO J、20 :4337-4340、2001 年
[0017] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 5 :Wang 等、Science、285 :248-251、1999 年
[0018] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 6 :Germani 等、J Leukoc Biol.、81 (1) :41-5、2007 年
[0019] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 7 :Palumbo 等、J. Cell Biol.、164 :441 ~449、2004 年
[0020] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 8 :Merenmies 等、J. Biol. Chem.、266 :16722-16729、1991 年
[0021] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 9 :Wu Y 等、Stem cells、25 :2648-2659、2007 年
[0022] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 10 :Tamai 等、Proc Natl Acad Sci USA.、108(16) :6609-6614、2011 年
[0023] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 11 :Yang 等、J Leukoc Biol. 81 (1) :59-66、2007 年
[0024] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 12 :Basso 等、J Neurotrauma.、23 (5) :635-659、2006 年
[0025] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 13 :Rahimi-Movaghar 等、Int J Neurosci.、118(10) : 1359-1373、 2008 年
[0026] 非專(zhuān)利文獻(xiàn) 14 :Quertainmont R 等、PloS One.、7(6) :e39500、2012 年

【發(fā)明內(nèi)容】

[0027] 發(fā)明所要解決的課題
[0028] 脊髄損傷雖然是下半身的麻痹所導(dǎo)致的歩行困難等對(duì)患者而言生活品質(zhì)極大喪 失的疾病，但是卻無(wú)望自然痊愈，甚至尚沒(méi)有建立有效的治療方法。如上所述，目前細(xì)胞治 療等再生醫(yī)療在脊髄損傷治療中的應(yīng)用受到期待，但尚在開(kāi)發(fā)中。另外，即使得以實(shí)用化， 也還沒(méi)有解決高額的治療費(fèi)用等課題。
[0029] 但是，若能夠通過(guò)施用具有將骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞動(dòng)員到損傷部位的活性的藥物來(lái) 促進(jìn)脊髄損傷的痊愈，則可期待能夠?qū)δ壳皫缀鯖](méi)有有效治療方法的脊髄損傷的患者提供 廉價(jià)且安全的治療方法。
[0030] 用于解決課題的手段
[0031] 迄今為止，發(fā)明者們已清楚了，HMGB1 (高迀移率族蛋白-1，High mobility group box 1)是具有刺激骨髄中的間充質(zhì)干細(xì)胞游走、動(dòng)員到血中的活性的蛋白。一直以來(lái)，已 知HMGB1是非組蛋白核蛋白的主要成分，其分子內(nèi)具有BoxA和BoxB這2個(gè)DNA結(jié)合區(qū)域。 另外還已知，核內(nèi)的HMGB1的功能在于使核小體結(jié)構(gòu)松弛并構(gòu)建最適合轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的結(jié)構(gòu)。 但是，近年來(lái)清楚了，核蛋白HMGB1雖然不具有分泌信號(hào)，但卻被分泌到細(xì)胞外而發(fā)揮各種 活性。最深入的研宄是作為炎癥的中介物（mediator)的功能。例如弄清楚了，在小鼠的敗 血癥模型（LPS施用模型）中，在TNFa刺激下從吞噬細(xì)胞分泌的HMGB1是敗血癥的中介物 (Wang et al. :Sciencel999;285:248-251)，并作為候補(bǔ)受體而已知 TLR4。另外，HMGB1 的 最有名的受體為RAGE，已報(bào)告該受體與HMGB1的結(jié)合影響細(xì)胞的游走活性和炎癥性的信號(hào) 傳遞。
[0032] 本發(fā)明中，公開(kāi)了含有HMGB1片段的針對(duì)脊髄損傷的新型治療用藥物組合物及其 用途。
[0033] 具體而言，本發(fā)明者們通過(guò)肽合成制作了由HMGB1蛋白的第1~44個(gè)氨基酸構(gòu)成 的肽（序列號(hào)5)、由第11~44個(gè)氨基酸構(gòu)成的HMGB1片段（序列號(hào)4)。將制作的各HMGB1 片段施用給能夠評(píng)價(jià)脊髄損傷的治療效果的小鼠疾病模型，確認(rèn)了該片段對(duì)脊髄損傷的治 療效果。
[0034] 本申請(qǐng)基于該認(rèn)識(shí)，提供以下發(fā)明。
[0035] [1] 一種用于治療脊髄損傷的藥物組合物，其含有HMGB1片段肽。
[0036] [2]根據(jù)[1]的藥物組合物，其中，所述HMGB1片段肽為包含選自序列號(hào)3、序列號(hào) 4和序列號(hào)5中的氨基酸序列的肽。
[0037] [3]根據(jù)[1]的藥物組合物，其中，所述HMGB1片段肽為由選自序列號(hào)3、序列號(hào)4 和序列號(hào)5中的氨基酸序列構(gòu)成的肽。
[0038] [4] 一種脊髄損傷的治療方法，其包含施用HMGB1片段肽的工序。
[0039] [5]根據(jù)[4]的方法，其中，所述HMGB1片段肽為包含選自序列號(hào)3、序列號(hào)4和序 列號(hào)5中的氨基酸序列的肽。
[0040] [6]根據(jù)[4]的方法，其中，所述HMGB1片段肽為由選自序列號(hào)3、序列號(hào)4和序列 號(hào)5中的氨基酸序列構(gòu)成的肽。
[0041] [7] -種用于治療脊髄損傷的HMGB1片段肽。
[0042] [8]根據(jù)[7]的HMGB1片段肽，其中，所述HMGB1片段肽為包含選自序列號(hào)3、序列 號(hào)4和序列號(hào)5中的氨基酸序列的肽。
[0043] [9]根據(jù)[7]的HMGB1片段肽，其中，所述HMGB1片段肽為由選自序列號(hào)3、序列號(hào) 4和序列號(hào)5中的氨基酸序列構(gòu)成的肽。
[0044] [10]HMGB1片段肽在制造用于治療脊髄損傷的藥物中的用途。
[0045] [11]根據(jù)[10]的用途，其中，所述HMGB1片段肽為包含選自序列號(hào)3、序列號(hào)4和 序列號(hào)5中的氨基酸序列的肽。
[0046] [12]根據(jù)[10]的用途，其中，所述HMGB1片段肽為由選自序列號(hào)3、序列號(hào)4和序 列號(hào)5中的氨基酸序列構(gòu)成的肽。
【附圖說(shuō)明】
[0047] 圖1A為表示各種合成肽的TOGFRa陽(yáng)性株化骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞的游走刺激活性 的照片。包含最小片段即HMGB1片段肽（17~25)的所有片段肽顯示細(xì)胞游走刺激活性。
[0048] 圖1B為表示不同長(zhǎng)度的HMGB1片段肽所具有的TOGFRa陽(yáng)性株化骨髄間充質(zhì)干 細(xì)胞的游走刺激活性的照片。各肽通過(guò)肽合成制作。附隨的圖是對(duì)各片段肽的細(xì)胞游走刺 激活性進(jìn)行定量化而得到的。通過(guò)該實(shí)驗(yàn)，顯示HMGB1片段肽（17-25)為具有游走刺激活 性的最小片段。
[0049] 圖2A中，與陰性對(duì)照組（PBS施用）相比，HMGB1片段（11-44)施用組中可見(jiàn)顯著 性的神經(jīng)癥狀的改善效果。（相對(duì)于PBS :*p〈0.