地膚子皂苷Ic在制備治療前列腺癌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，更具體的講，涉及地膚子皂苷Ic在制備治療前列腺癌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]2012年我國腫瘤登記地區(qū)前列腺癌發(fā)病率為9.92/10萬，列男性惡性腫瘤發(fā)病率的第6位。發(fā)病年齡在55歲前處于較低水平，55歲后逐漸升高，發(fā)病率隨著年齡的增長而增長，高峰年齡是70?80歲。盡管早期化療或者前列腺根除在大多數(shù)病人中都有效，但對于一些最終發(fā)展成致命的激素抵抗性的疾病的病人，僅僅限于用多烯紫杉醇化療，盡管如此，這些病人的生命只有少數(shù)幾個(gè)月。因此，揭示前列腺癌發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制對前列腺癌的治療干預(yù)起著重要的作用，在此基礎(chǔ)上找到更有效的化療藥物挽救更多人的生命。
[0003]SUMO(小泛素樣修飾物)可與很多蛋白結(jié)合起修飾作用，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種功能；這是一種動(dòng)態(tài)、可逆的過程，在SENPs (SUM0特異性蛋白酶)的作用下，將靶蛋白上的SUMO切下，實(shí)現(xiàn)蛋白功能的動(dòng)態(tài)變化。目前已知共有SENP1-7，其中SENPl是一種細(xì)胞核內(nèi)的SUMO蛋白酶，已有文獻(xiàn)報(bào)道SENPl通過使組蛋白乙酰化酶IdeSUMOylat1n調(diào)節(jié)雄激素受體活性，并通過使P300deSUM0ylat1n調(diào)節(jié)c-Jun的活性。
[0004]在前列腺癌中SENPl高表達(dá)，高表達(dá)的SENPl與前列腺惡化關(guān)系密切。SENPl在調(diào)節(jié)雄激素受體依賴的轉(zhuǎn)錄和低氧信號通路中發(fā)揮重要作用。SENPl通過使轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)因子HDACl去SUMO化，增強(qiáng)雄激素受體依賴的轉(zhuǎn)錄，通過正反饋?zhàn)饔?，雄性激素又進(jìn)一步促進(jìn)SENPl基因的轉(zhuǎn)錄。腫瘤細(xì)胞生長迅速，處于低氧的微環(huán)境中，腫瘤的能量代謝及轉(zhuǎn)移依賴于低氧誘導(dǎo)因子HIF-1a。有報(bào)道，在低氧條件下HIF-1 a進(jìn)入核內(nèi)發(fā)生SUMOylat1n，然后與VHL結(jié)合，通過蛋白酶體途徑降解，但是在核內(nèi)SENPl使HIF-1 α去SUMO化調(diào)節(jié)它的活性和穩(wěn)定性，未修飾的HIF-1 α逃避VHL/蛋白酶體途徑的降解，從而調(diào)節(jié)下游基因如VEGF的表達(dá)，因此，SENPl在低氧條件下調(diào)節(jié)HIF-1 α的穩(wěn)定性發(fā)揮重要作用。
[0005]綜上所述，SENPl在前列腺癌的發(fā)生，發(fā)展及轉(zhuǎn)移中都起著重要的作用。SENPl是一個(gè)潛在的治療前列腺癌的靶標(biāo)。尋找SENPl小分子抑制劑，將其用于前列腺癌治療，這對于前列腺癌化療藥物的進(jìn)一步優(yōu)化具有重要的意義。
[0006]Kochia scoparia (L.) Schard.的干燥果實(shí)(日本名叫 Chifusi ;中文名叫地膚子)在上古時(shí)代中國最古老的醫(yī)書《神農(nóng)本草經(jīng)》中有記載，在古代中國和日本的醫(yī)學(xué)中用于滋補(bǔ)、利尿、止痛以及治療皮膚瘙癢癥。地膚子皂苷Ic (oleanolicacid-3-O-β-D~xy1pyranose(I 一 3) β-D-Pyranoid glucose)是從 Kochiascoparia (L.) Schard.的干燥果實(shí)中提取的三釀阜苷類物質(zhì)，地膚子在中國很多地區(qū)有廣泛的種植，在中醫(yī)中有用來治療前列腺炎的歷史。有報(bào)道，地膚子皂苷Ic能夠抑制酒精引起的胃黏膜損傷，阻止葡萄糖引起的大鼠的血糖增高，促進(jìn)胃腸轉(zhuǎn)移，以及通過增強(qiáng)肝的抗氧化作用降低四氯化碳引起的肝損傷。也有文獻(xiàn)報(bào)道地膚子皂苷Ic通過使肝癌細(xì)胞凋亡而達(dá)到抗肝癌的作用。但是地膚子皂苷Ic在前列腺癌中的作用還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供地膚子皂苷Ic在制備SENPl小分子抑制劑中的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供地膚子皂苷Ic在制備治療前列腺癌藥物中的應(yīng)用。
[0009]為實(shí)現(xiàn)以上第一個(gè)目的，本發(fā)明公開以下技術(shù)方案:地膚子皂苷Ic在制備SENPl小分子抑制劑中的應(yīng)用。
[0010]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明第二個(gè)目的，本發(fā)明公開以下技術(shù)方案:地膚子皂苷Ic在制備治療前列腺癌藥物中的應(yīng)用。
[0011]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:活性地膚子皂苷Ic是一種天然存在的化合物，且地膚子在中國很多地區(qū)有廣泛的種植。尋找SENPl小分子抑制劑，將其用于前列腺癌治療，這對于前列腺癌化療藥物的進(jìn)一步優(yōu)化具有重要的意義。本發(fā)明第一次報(bào)道地膚子皂苷Ic對前列腺癌細(xì)胞增殖抑制作用的機(jī)制，為該化合物應(yīng)用于臨床提供理論基礎(chǔ)。
【附圖說明】
[0012]圖1為地膚子皂苷Ic的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0013]圖2為體外SENPl抑制劑地膚子皂苷Ic對SENPlC (SENP1 catalytic domain)抑制測試及濃度梯度和IC50計(jì)算。
[0014]圖3為SENPl抑制劑地膚子皂苷Ic對外源轉(zhuǎn)染的全長SENPl的抑制作用。RGS-SENPI與Flag-SUM02共轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞，24小時(shí)后分別加入DMSO和6.25，12.5，25 μ M地膚子皂苷Ic。地膚子皂苷Ic抑制了 SENPl的活性，使SUMO的底物得到累積。
[0015]圖4為SENPl抑制地膚子皂苷Ic對內(nèi)源SENPl的抑制作用。分別用DMS0，6.25，12.5和25 μ M的地膚子皂苷IC處理Flag-SUMOl，F(xiàn)lag-SUM02和Flag_SUM03穩(wěn)定表達(dá)的PC3細(xì)胞株，western blot結(jié)果顯示SUM01，SUM02和SUM03的底物都得到了累積。
[0016]圖5為SENPl抑制劑能改變細(xì)胞內(nèi)SENPl的熱穩(wěn)定性。100 μ M的地膚子皂苷Ic與PC3-3flag-senpl細(xì)胞的裂解液共孵育30min，不同的溫度梯度處理3min，DMSO作為對照。不同濃度的地膚子皂苷Ic與PC3-3flag-senpl細(xì)胞的裂解液共孵育30min，60°C處理3min，DMSO作為對照。
[0017]圖6為SENPl抑制劑對前列腺癌細(xì)胞的增值抑制圖。PC3細(xì)胞種至96孔板中，分別用不同濃度的地膚子皂苷Ic處理細(xì)胞。每孔中加入10 μ I的CCK-8試劑，并培養(yǎng)箱再培養(yǎng)2小時(shí)，測450nm的吸光值，并計(jì)算IC50為25.07 μ Μ。
[0018]圖7為SENPl抑制劑對HRE-1uc的抑制作用。穩(wěn)轉(zhuǎn)了 PGL4.27-HRE-Luc的PC3細(xì)胞種24孔板，分別用不同濃度的地膚子皂苷Ic處理，每個(gè)濃度設(shè)3復(fù)孔，放低氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h，結(jié)果顯示隨著地膚子皂苷Ic濃度的增高，Iuc值降低。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商