作為用于口服藥物遞送的載體的原生動物變體特異性表面蛋白(vsp)的制作方法
【專利說明】作為用于口服藥物遞送的載體的原生動物變體特異性表面 蛋白（VSP)
[0001] 對電子遞交的序列表的引用
[0002] 與本申請一起提交的電子遞交ASCII文本文件的序列表（文件名：3181_001PC01_ sequence_listing_ST25.txt;大?。?,8138, 935 字節(jié)；創(chuàng)建日期：2013年7月 1 日）的內(nèi) 容通過引用并入本文。 技術(shù)背景
[0003] 本發(fā)明涉及使用多肽載體將治療劑遞送至需要該治療劑的受試者的組合物和方 法。更具體地，本發(fā)明涉及作為用于遞送治療劑（如生物活性肽）的載體發(fā)揮作用的多肽， 如賈第蟲屬（Giardia sp.)可變表面蛋白（variable surface protein) (VSP)。
[0004] 由于易于施用、患者依從性和成本，口服遞送代表了遞送預(yù)防性和治療性藥劑的 理想手段。然而，口服途徑由于胃腸道（GIT)形成的眾多屏障也是最困難的。主要的挑戰(zhàn) 是在胃和小腸上部的化學(xué)和酶降解，以及缺乏足夠的穿過胃的滲透性。胃中的低PH可以使 治療劑遭受物理和化學(xué)降解。肽的物理降解一般涉及蛋白質(zhì)的原始結(jié)構(gòu)到更高階結(jié)構(gòu)的修 飾，這可能是吸附、聚集、展開、沉淀和/或完全/部分降解為其氨基酸成分的結(jié)果?；瘜W(xué)降 解通常涉及鍵的裂解和導(dǎo)致新產(chǎn)物的形成。
[0005] 賈第蟲是能夠在胃和小腸上部的惡劣環(huán)境條件下存活的腸道病原體。像許多 原生動物微生物一樣，賈第蟲發(fā)生抗原性變異（參見例如，Zambrano-Villa等，Trends Parasitol. 18:272-8(2002))，通過該機制它不斷變換其主要的表面分子，從而允許 該寄生蟲逃避宿主的免疫反應(yīng)并建立慢性和/或復(fù)發(fā)性感染（參見例如，Nash，Mol. Microbiol. 45:585-90 (2002))。這些表面抗原屬于變體-特異性表面蛋白（VSP)家族，其 是覆蓋滋養(yǎng)體整個表面的膜內(nèi)在蛋白。
[0006] VSP具有富含半胱氨酸的氨基末端區(qū)域以及包含跨膜區(qū)和短的胞質(zhì)尾的保守 羧基末端結(jié)構(gòu)域（圖1A)。在賈第蟲的基因組中存在大約200個VSP基因的集合，但在 任意給定時間只有一個VSP在該寄生蟲的表面上表達（參見例如，Prucca等，Nature 456 (7223) : 750-4 (2008) ;Deitsch 等，Microbiol. Mol. Biol. Rev. 61:281-93 (1997)) 〇
[0007] 因為賈第蟲VSP的胞外部分使得該寄生蟲能夠在小腸上部的敵對環(huán)境內(nèi)存活， 與抗原共價結(jié)合的VSP已被用于運送（shuttle)候選抗原。已經(jīng)觀察到當口服施用包含 與賈第蟲抗原共價結(jié)合的VSP的疫苗時，該抗原完全保護動物不受賈第蟲寄生蟲的后續(xù)感 染，表明該抗原在通過GIT時保存下來（Rivero等，Nat. Med. 16(5):551-7(2010),參見例 如，PCT公開號WP2010/064204和W02011/120994,其整體在此通過引用并入本文）。
[0008] 1型糖尿病通常在兒童和年輕成年人中診斷，并造成越來越大比例的國家醫(yī)療保 健支出。1型糖尿病是由免疫系統(tǒng)的功能障礙引起的自身免疫性疾病，它攻擊并摧毀產(chǎn)生胰 島素的胰島的β-細胞。
[0009] 施用外源胰島素是可以用來控制與該疾病并發(fā)的血糖升高的唯一藥物治 療。相反，2型糖尿病的特征是胰島素分泌和胰島素作用兩者的缺陷，胰島素缺乏通常 在疾病過程的后期出現(xiàn)。在該疾病中，經(jīng)常需要補充胰島素來實現(xiàn)良好的葡萄糖水平 控制（參見例如，DeWitt&Hirsch, JAMA 289:2254-2264(2003))。具有不同類型的可 用的皮下胰島素（Summers等，Clin. Ther. 26:1498-1505(2004))。然而，調(diào)查表明部 分2型糖尿病的患者由于預(yù)期的疼痛和不方便而對胰島素治療具有顯著阻力（Peyrot 等，Diabetes Care 28:2673-2679(2005))。最年輕的和最年長的患者最不可能接受可注 射治療，因此對想要開始胰島素治療的醫(yī)生提出最大的挑戰(zhàn)（Freemantle等，Diabetes Care 28:427-428 (2005))。因此，患者的偏好驅(qū)動了開發(fā)口服、鼻用和吸入的胰島素制 劑的努力以避免皮下注射（Cefalu, Ann. Med. 33:579-586 (2001) ;Graham等州』叩1· J. Med. 356:497-502 (2007))。因此，通過口服途徑遞送胰島素的選擇仍然是有吸引力的治 療策略。
[0010] 胰高血糖素（胰腺分泌的肽激素）提高血糖水平。它的作用與降低血糖水平的胰 島素的作用相反。胰高血糖素指示用于嚴重低血糖的治療。因為1型糖尿病患者與穩(wěn)定的 2型患者相比可能具有較少的血糖水平的增加，應(yīng)當盡快給予補充的碳水化合物，尤其是對 兒童患者。當減少腸道蠕動是有利時，胰高血糖素還指示作為胃、十二指腸、小腸和結(jié)腸放 射學(xué)檢查的輔助診斷。對于這種檢查，胰高血糖素與抗膽堿能藥物一樣有效。然而，加入抗 膽堿能劑可能造成增加的副作用。在胰島素的情況下，開發(fā)適合口服遞送的胰高血糖素形 式是有吸引力的治療策略。
[0011] 生長激素缺乏是涉及腦垂體腺的失調(diào)，腦垂體產(chǎn)生生長激素和其他激素。人生 長激素（hGH)在人體中刺激生長和細胞繁殖，也在脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和碳水化合物的代謝中 發(fā)揮作用。通常通過細菌發(fā)酵生產(chǎn)重組的hGH(Zeisel等，!1〇1'111.1^8.37(5即？12):5-13 (1992) ;Sonoda&Sigimura, Biosci. Biotechnol. Biochem. 72:2675-80 (2008))。當腦垂體 腺沒有產(chǎn)生足夠的生長激素時，生長將會比正常的慢。生長激素對于兒童的正常生長是需 要的。在成年人中，需要生長激素來維持適量的身體脂肪、肌肉和骨骼。hGH缺乏可能發(fā)生 在任何年齡?；加猩L激素缺乏癥的兒童和一些成年人將會受益于生長激素治療。為了治 療生長激素缺乏癥，通常服用hGH (人生長激素）。hGH是可注射藥物，其于患者皮膚的脂肪 下一周注射數(shù)次（Brearley等，BMC Clin. Pharmacol. 7:10 (2007))。在胰島素治療的情況 下，患者對開始注射療法的抵抗和依從性對醫(yī)生提出了挑戰(zhàn)。因此，開發(fā)適合口服遞送的 hGH形式是有吸引力的治療策略。
[0012] 發(fā)明簡沐
[0013] 本公開提供用于將治療劑（例如生物活性肽，如胰島素、胰高血糖素、或生長激 素），例如通過口服或粘膜施用，遞送至需要該治療劑的受試者的靶位置的包含VSP-載體 的組合物和方法。
[0014] 更具體地，本公開提供VSP多肽如賈第蟲寄生蟲的可變表面蛋白（VSP)或其片段 (例如，賈第蟲VSP的細胞外結(jié)構(gòu)域或其包含CXXC基序的片段）作為載體通過口服或粘膜 施用遞送治療劑的用途。本發(fā)明的VSP載體沒有通過肽鍵與治療劑共價結(jié)合。
[0015] 因此，本公開提供包含VSP載體和治療劑的治療組合物。在一些實施方案中，組合 物配制用于口服施用。在其他實施方案中，組合物配制用于粘膜施用。在一些實施方案中， VSP載體是VSP、VSP樣蛋白、VSP或VSP樣蛋白片段、VSP或VSP樣蛋白衍生物、或兩個或更 多個所述VSP載體的組合。
[0016] 在一些實施方案中，VSP載體包含來自賈第蟲的VSP或其片段。在其他實施方案 中，來自賈第蟲的VSP或其片段包含VSP細胞外結(jié)構(gòu)域。在其他實施方案中，來自賈第蟲的 VSP是VSP1267。在一些具體的實施方案中，VSP載體包含氨基酸序列SEQ ID NO :2。在其 他實施方案中，VSP載體進一步包含異源部分。在一些實施方案中，異源部分是蛋白質(zhì)純化 標簽序列。在一些實施方案中，蛋白質(zhì)純化標簽序列是His6標簽。在一些具體的實施方案 中，VSP載體由序列SEQ ID NO :1組成。
[0017] 在一些實施方案中，治療劑是生物劑。在一些實施方案中，生物劑是生物活性肽。 在一些實施方案中，生物活性肽是胰島素，人生長激素、胰高血糖素，其片段、類似物、衍生 物或變體，或兩個或更多個所述生物活性肽的組合。在一些實施方案中，生物活性肽是天然 胰島素。在其他實施方案中，生物活性肽是重組胰島素。在一些實施方案中，生物活性肽是 膜島素類似物。在其他實施方案中，膜島素類似物是速效膜島素。在其他實施方案中，膜島 素類似物是長效胰島素。在一些實施方案中，速效胰島素是門冬胰島素 （insulin Aspart)。 在其他實施方案中，長效胰島素是甘精胰島素 （insulin Glargine)。
[0018] 在一些實施方案中，VSP載體與治療劑的分子-分子比率范圍從約10:1至約 1:10。在其他實施方案中，VSP載體與治療劑的分子-分子比率范圍從約3:1至約1:3。在 一些實施方案中，VSP載體與治療劑的分子-分子比率是3:1。在其他實施方案中，VSP載 體與治療劑的分子-分子比率是1:1。在一些實施方案中，組合物進一步包含藥學(xué)上可接受 的賦形劑。
[0019] 還提供將治療劑遞送至受試者中的靶位置的方法，該方法包括向需要該治療劑的 受試者施用包含VSP載體和治療劑的治療組合物。本公開還提供治療受試者的疾病或狀況 的方法，包括向需要治療的受試者施用有效量的包含VSP載體和治療劑的治療組合物。在 一些實施方案中，疾病或狀況是激素缺乏癥。在一些實施方案中，疾病缺乏癥是胰島素缺乏 癥。在一些實施方案中，胰島素缺乏癥是1型糖尿病。
[0020] 還提供治療受試者的疾病或狀況的方法，包括將VSP載體和治療劑組合，其中所 述VSP載體與所述治療劑結(jié)合，以及向所述受試者施用有效量的所述VSP載體與治療劑的 組合。本公開還提供增強治療劑對酶降解的抗性的方法，包括將VSP載體和治療劑組合，其 中所述VSP載體可以與所述治療劑結(jié)合，且其中將VSP載體和治療劑組合導(dǎo)致所述治療劑 對酶降解的抗性的增強。
[0021] 本公開還提供增強治療劑對pH變性的抗性的方法，包括將VSP載體和治療劑組 合，其中所述VSP載體可以與所述治療劑結(jié)合，且其中將所述VSP載體和所述治療劑組合導(dǎo) 致所述治療劑對PH變性的抗性的增強。還提供增強治療劑對粘膜上皮細胞附著性的方法， 包括將VSP載體和治療劑組合，其中所述VSP載體可以與所述治療劑結(jié)合，且其中將所述 VSP載體和所述治療劑組合導(dǎo)致所述治療劑對粘膜上皮細胞附著性的增強。在一些實施方 案中，粘膜上皮細胞是小腸上皮細胞。在其他實施方案中，粘膜上皮細胞是胃上皮細胞。在 一些實施方案中，粘膜上皮細胞是口腔上皮細胞。
[0022] 還提供制備可口服遞送的組合物的方法，包括將VSP載體和治療劑組合，其中所 述VSP載體可以與所述治療劑結(jié)合。本公開還提供制備適用于口服施用的可注射組合物 (例如，可注射胰島素制劑）的方法，包括將VSP載體和治療劑組合，其中所述VSP載體可以 與所述治療劑結(jié)合。例如，可注射胰島素組合物可以通過將可注射組合物與VSP載體組合 重新配置或制備以適用于口服施用。本公開還提供制備適用于口服施用的可注射治療劑的 方法，包括將VSP載體和治療劑組合，其中所述VSP載體可以與所述治療劑結(jié)合。例如，可注 射胰島素組合物可以通過將可注射組合物與VSP載體組合重新配置或制備以適用于口服 施用。在一些實施方案中，VSP載體是VSP、VSP樣蛋白、VSP或VSP樣蛋白片段、VSP或VSP 樣蛋白衍生物、或兩個或更多個所述VSP載體的組合。在一些實施方案中，VSP載體包含來 自賈第蟲的VSP或其片段。在其他實施方案中，來自賈第蟲的VSP或其片段包含VSP細胞外 結(jié)構(gòu)域。在一些實施方案中，來自賈第蟲的VSP是VSP1267。在其他實施方案中，VSP載體 包含氨基酸序列SEQ ID NO :2。在一些實施方案中，VSP載體進一步包含異源部分。在其他 實施方案中，異源部分是蛋白質(zhì)純化標簽序列。在一些實施方案中，蛋白質(zhì)純化標簽序列是 His6標簽。在其他實施方案中，VSP載體由序列SEQ ID NO: 1組成。在一些實施方案中，治 療劑是生物劑。在其他實施方案中，生物劑是生物活性肽。在一些實施方案中，生物活性肽 是胰島素，人生長激素，胰高血糖素，其片段、類似物、衍生物或變體，或兩個或更多個所述 生物活性肽的組合。在一些實施方案中，生物活性肽是天然胰島素。在其他實施方案中，生 物活性肽是重組胰島素。在一些實施方案中，生物活性肽是胰島素類似物。在其他實施方 案中，膜島素類似物是速效膜島素。在一些實施方案中，膜島素類似物是長效膜島素。在其 他實施方案中，速效膜島素是門冬膜島素。在一些實施方案中，長效膜島素是甘精膜島素。
[0023] 附圖簡沐
[0024] 圖IA是顯示VSP結(jié)構(gòu)特征的示意圖。該圖表明，VSP是具有富含CXXC基序（其 中C代表半胱氨酸，和X可以是任意氨基酸）的可變細胞外區(qū)域、獨特跨膜疏水區(qū)域和短的 5個氨基酸長度的胞質(zhì)尾的膜內(nèi)在蛋白。
[0025] 圖IB示出了一組賈第蟲滋養(yǎng)體的相差（左圖）和免疫熒光（右圖）分析。每個 滋養(yǎng)體在其表面上表達單一 VSP，如用抗VSP特異性單克隆抗體的表面標記所示的，每個滋 養(yǎng)體表達的VSP各不相同。
[0026] 圖IC示出了滋養(yǎng)體表面的抗VSP特異性免疫金標記。標記了寄生蟲的整個表面， 包括腹盤和鞭毛，從而形成厚的表面包被。
[0027] 圖2A示出了與用100 μ g/mL或200 μ g/mL胰蛋白酶處理的兩個不同的賈第蟲分 離物（WB和GS/Μ)相對應(yīng)的相差（PC)圖像和免疫熒光（IFA)圖像。單克隆抗體G10/4識別 GS/Μ分離物的VSPH7 VSP蛋白中的構(gòu)象表位。單克隆抗體9B10檢測WB分離物的VSP9B10 VSP蛋白中的非構(gòu)象表位。
[0028] 圖2B示出了與在不同pH(l、3、5和8)下孵育的兩個不同賈第蟲分離物（WB和GS/ M)相對應(yīng)的相差（PC)圖像和免疫熒光（IFA)圖像。單克隆抗體G10/4識別GS/Μ分離物的 VSPH7 VSP蛋白中的構(gòu)象表位。單克隆抗體9B10檢測WB分離物的VSP9B10 VSP蛋白中的 非構(gòu)象表位。
[0029] 圖3示出了滋養(yǎng)體胰蛋白酶化后檢測三種賈第蟲VSP (VSP9B10、VSP1267和VSPH7) 存在的蛋白質(zhì)印跡分析。滋養(yǎng)體用濃度為200 μ g/mL和2mg/mL的胰蛋白酶處理，或在沒有 胰蛋白酶的培養(yǎng)基中孵育（對照）。還示出了與小鼠抗堿性磷酸酶抗體（α-小鼠）相對應(yīng) 的對照樣品。
[0030] 圖4示出了來自感染了 WB9B10賈第蟲滋養(yǎng)體的長爪沙鼠 （Meriones unguiculatus)(沙鼠）（圖4Α)、對照沙鼠（圖4Β)和口服施用了純化自轉(zhuǎn)基因滋養(yǎng)體的全 部賈第蟲VSP組的沙鼠（圖4C)的腸切片的免疫組織化學(xué)顯微照片。
[0031] 圖5A示出了與VSP1267的細胞外部分加上C-末端His6標簽（加框的氨基酸） 相對應(yīng)的重組賈第蟲VSP的氨基酸序列（SEQ ID NO :1)。N-末端信號肽加上了下劃線。
[0032] 圖5B示出了通過SDS-PAGE和使用抗His6單克隆抗體的蛋白質(zhì)印跡法純化在桿 狀病毒系統(tǒng)中產(chǎn)生的重組VSP1267的步驟。
[0033] 圖6示出了與用不同濃度的胰蛋白酶和胰液素（胰液成分的混合物）預(yù)孵育的胰 島素（NOVORAP1D⑧和LANTUS? )相對應(yīng)的銀染凝膠。標記麗的泳道對應(yīng)于分 子量梯。"胰島素"和"胰蛋白酶"泳道分別是包含胰島素和胰蛋白酶的對照泳道。
[0034] 圖7示出了 7周大的雌性Balb/c小鼠的血糖水平，所述小鼠在2小時沒有進食后 接受所示劑量的胰島素。圖7A示出了施用LANTUS?后的血糖水平；而圖7B示出了施 用NOVORAP1D⑧后的血糖水平。以1IU、5IU和50IU的劑量口服施用胰島素。用PBS 和1-5IU皮下施用的膜島素作為對照。IIU似乎對于兩種膜島素是亞適量（加圓圈的）。
[0035] 圖8示出了 7周大的雌性Balb/c小鼠的血糖水平，所述小鼠在2小時沒有進食后 接受單獨的所示劑量的胰島素或與VSP載體的組合。圖8A示出了施用LANTUS?后的 血糖水平；而圖8B示出了施用NOVORAP1D?后的血糖水平。用三種不同的制劑以圖 7中測定的亞適量（Iiu)施用胰島素：⑴單獨施用胰島素，（ii)以分子-分子比率1:1與 VSP組合的胰島素，和（iii)分子-分子比率1:3與VSP組合的胰島素。用PBS和1-5IU皮 下施用的胰島素作為對照。IIU胰島素與VSP載體的組合（對LANTUS?胰島素與VSP 的比率為1:1，和對NOVORAPID⑧胰島素與VSP的比率為1:3)增強了胰島素的生物作 用（加圓圈的）。
[0036] 圖9通過蛋白質(zhì)印跡法示出了抗hGH單克隆抗體（a hGH)的特異性。用該單克隆 (ahGH)的兩種稀釋液（1/3000和1/2000)檢測hGH(在大腸桿菌（E.coli)中重組產(chǎn)生的 人生長激素）。還示出了含有抗堿性磷酸酶抗體（a小鼠-API)的對照。
[0037] 圖IOA示出了 pH對hGH穩(wěn)定性的作用。上部圖像是示出了在pH1.6、2. 0、3. 8、 5. 0、5. 8、7. 0、8. 0、9. 0、10. 0和11. 0的培養(yǎng)基中孵育的hGH的pH介導(dǎo)降解的蛋白質(zhì)印跡分 析。用抗hGH單克隆抗體確定了 hGH的存在。下部圖像示出了 hGH的銀染檢測。低pH，與 在GIT中發(fā)現(xiàn)的相似，導(dǎo)致了蛋白質(zhì)的降解（圓圈），而在更高pH下，hGH與對照相比保持 不變。每個泳道含有10 Ug hGH。
[0038] 圖IOB示出了在低pH下將VSP載體與hGH組合對hGH變性的作用。蛋白質(zhì)印跡對 應(yīng)于樣品對，其中沒有VSP載體的hGH樣品或hGH與VSP載體的比率為1:3的具有VSP載 體的 hGH 樣品經(jīng)歷相同的 pH 條件（pH L 4、1· 96、3· 8、4· 91、5· 9、7· 01、7· 95、8· 51、9· 61 和 11. 17)。在處理過程中丟失了 pH 3. 8下的hGH :VSP載體樣品。用抗hGH單克隆抗體確定 了 hGH的存在。
[0039] 圖IlA示出了胰蛋白酶對hGH穩(wěn)定性的作用。上部圖像是使用抗hGH單克隆抗 體的蛋白質(zhì)印跡染色。下部圖像對應(yīng)于銀染。如圓圈區(qū)域所示，胰蛋白酶完全蛋白水解了 hGH 〇
[0040] 圖IlB表明以l:3hGH:VSP的比率組合VSP載體與hGH保護hGH不被胰蛋白酶（高 達150 μ g/mL胰蛋白酶）降解。蛋白質(zhì)印跡對應(yīng)于樣品對，其中沒有VSP載體的hGH樣品 或hGH與VSP載體比率為1:3的具有VSP載體的hGH樣品遭受相同的胰蛋白酶濃度（50、 100、150、300和50(^8/1^)。用抗116!1單克隆抗體確定了116!1的存在。
[0041] 圖12A在主圖中示出了口服施用指定hGH劑量（50、100、200、400和80(^8)后小 鼠中hGH的血清水平。插圖示出了皮下施用12. 5 μ g劑量的hGH后小鼠中hGH的血清水平。
[0042] 圖12B示出了單獨或以1:3的hGH:VSP載體比率與VSP載體組合口服施用hGH后 小鼠中hGH的血清水平。
[0043] 圖13A示出了胰蛋白酶對胰高血糖素穩(wěn)定性的作用。斑點印跡的上圖顯示胰蛋白 酶蛋白水解的胰高血糖素。下圖示出了以1:3胰高血糖素：VSP比率組合VSP載體與胰高 血糖素保護胰高血糖素不被胰蛋白酶降解直到1:2(蛋白質(zhì)：蛋白酶）的比率。
[0044] 圖13B示出了由向BALC/c小鼠單獨或與VSP組合施用胰高血糖素造成的對血糖 水平的影響。
[0045] 圖14A示出了衍生自嗜熱四膜蟲（Tetrahymena thermophila)的VSP樣蛋白 (SEQ ID N0:590)的嵌合VSP蛋白（SEQ ID N0:589)的序列。將編碼腸賈第蟲（Giardia intestinalis)VSP1267信號肽和His6純化標簽的序列（SEQ ID N0:591)分別與VSP結(jié)構(gòu) 域序列（SEQ ID N0:592)的氨基末端和羧基末端融合，該VSP結(jié)構(gòu)域位于來自四膜蟲的VSP 樣蛋白的氨基酸位置977和1465之間。
[0046] 圖14B示出了如由使用抗hGH單克隆抗體的蛋白質(zhì)印跡法測定的，不同濃度的胰 蛋白酶對重組hGH的活性。
[0047] 圖14C表明hGH與來自嗜熱四膜蟲的VSP樣蛋白的組合能夠保護hGH免于在低pH 和胰蛋白酶下降解，如在SDS-PAGE后的考馬斯藍染色和使用抗hGH單克隆抗體的蛋白質(zhì)印 跡所示的。
[0048] 圖15A表明IL-2或IL-10與VSP的組合能夠保護IL-2和IL-10不被胰蛋白酶降 解，如在SDS-PAGE后的考馬斯藍染色中所示的。
[0049] 圖15B表明IL-10與VSP的組合能夠保護IL-10免于低pH誘導(dǎo)的降解，如在 SDS-PAGE后的考馬斯藍染色中所示的。
[0050] 圖15C表明IL-2與VSP的組合能夠保護IL-2和IL-2免于低pH誘導(dǎo)的降解，如 在SDS-PAGE后的考馬斯藍染色中所示的。
[0051] 發(fā)明詳沐
[0052] -般通過注射施用的生物活性肽（如胰島素、胰高血糖素或生長激素）的口服遞 送提供減少注射次數(shù)、提高依從性和減少副作用發(fā)生的可觀益處。然而，治療劑（例如生 物活性肽，如胰島素、胰高血糖素或人生長激素（hGH))的成功口服遞送涉及克服酶降解障 礙、實現(xiàn)上皮通透性以及在制備過程中采取保存生物活性的步驟。為了解決這個問題，我們 提供一個口服遞送系統(tǒng)，其中生物活性肽（如胰島素、胰高血糖素或hGH)與VSP載體組合， 但不是通過肽鍵共價結(jié)合，以保護所述生物活性肽在胃腸道（GIT)中不被降解并促進它的 全身性生物學(xué)作用。
[0053] 因此，本公開涉及包含含有至少一個CXXC基序的VSP載體（例如，賈第蟲VSP，VSP 樣蛋白，其片段、變體或衍生物）的治療組合物，其中C是半胱氨酸氨基酸，和X是任意氨基 酸，所述VSP載體可以與治療劑組合和與其結(jié)合，且作為用于藥物遞送的載體發(fā)揮作用。本 公開尤其涉及包含VSP載體（例如衍生自賈第蟲VSP的細胞外結(jié)構(gòu)域的多肽）的組合物， 所述VSP載體具有對蛋白酶和不同pH的抗性，且能夠附著于GIT中的上皮細胞。在一些實 施方案中，這種VSP載體被用于形成適合于口服施用的病毒樣顆粒（VLP)。
[0054] 用于口服或粘膜施用的治療劑與VSP載體的組合賦予所述治療劑對pH誘導(dǎo)的降 解和酶降解的增強的抗性，并增加了所述治療劑對胃腸上皮的結(jié)合。在一些具體的方面，所 述治療劑是生物活性肽，如胰島素、胰高血糖素或人生長激素。
[0055] 定義
[0056] 必須注意，如在本說明書和所附權(quán)利要求書中所用的，除非文