一種含有丹參酚酸b的藥物組合物及其制藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種含有丹參酚酸B的藥物組合物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 丹參酚酸B又稱紫草酸B，是三分子丹參素和一分子咖啡酸的縮合物，是一種縮酚 酸類多羥基化合物，淡黃色無定形粉末，分子式C36H30016。具有改善腎功能，防治心血管疾 病，抗缺血損傷，肝損傷，抗凝血和抗血栓，抗炎，改善腎功能等多種藥理作用。
[0003] 羥基紅花黃色素 A是單查爾酮苷類結(jié)構(gòu)的化合物，是紅花藥理功效的最有效水溶 性成分，可抑制血小板激活因子誘發(fā)的血小板聚集與釋放，可競(jìng)爭(zhēng)性地抑制血小板激活因 子與血小板受體的結(jié)合，是紅花黃色素的活血化瘀有效成分。
[0004] 中國專利CN101759672B公開了丹參酚酸B用于治療心腦血管疾病、肝損傷、肝纖 維化、肺纖維化、腫瘤、衰老藥物中的應(yīng)用，但是未公開丹參酚酸B對(duì)腎臟疾病的治療作用。 更沒有公開丹參酚酸B與羥基紅花黃色素 A組合治療腎病及其他疾病的技術(shù)方案。目前， 也未見以丹參酚酸B和羥基紅花黃色素 A以固定投藥量組合用于治療腎臟病及其他疾病的 報(bào)道。本發(fā)明公開了一種治療腎臟疾病的組合藥物，為臨床治療腎臟疾病提供了新的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 經(jīng)過大量試驗(yàn)研究證實(shí)，本發(fā)明公開的藥物組合物能有效治療腎臟疾病、腎衰、腎 病綜合征、腫瘤、心腦血管等疾病。
[0006] 本發(fā)明組合物含有丹參酚酸B和羥基紅花黃色素 A。
[0007] 本發(fā)明組合物含有的丹參酚酸B，可以用丹參酚酸B的鎂鹽、鉀鹽、鈣鹽代替。
[0008] 本發(fā)明藥物組合物，按重量份計(jì)，含有丹參酚酸B1-30份和羥基紅花黃色素 A1-30 份。其中，丹參酚酸B可以用丹參酚酸B的鎂鹽代替。還可以用丹參酚酸B的鉀鹽代替。還 可以用丹參酚酸B的鈣鹽代替。
[0009] 本發(fā)明組合物成分中的丹參酚酸B和羥基紅花黃色素 A可以分別是從丹參和紅花 等中藥中提取得到，也可以通過化學(xué)合成的方法得到。
[0010] 本發(fā)明藥物組成優(yōu)選：
[0011] 1.丹參酚酸Blmg和羥基紅花黃色素 A30mg。
[0012] 2.丹參酚酸B30mg和羥基紅花黃色素 Almg。
[0013] 3.丹參酚酸B20mg和羥基紅花黃色素 A15mg。
[0014] 4.丹參酸酸B鎂鹽15mg和羥基紅花黃色素 A15mg。
[0015] 5.丹參酚酸B鉀鹽15mg和羥基紅花黃色素 A15mg。
[0016] 6.丹參酚酸B鈣鹽15mg和羥基紅花黃色素 A15mg。
[0017] 本發(fā)明組合物可以制成藥劑學(xué)上任何一種劑型，包括制成固體形式、液體形式、氣 體形式或半固體形式的制劑，優(yōu)選注射劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑或沖劑等。
[0018] 本發(fā)明對(duì)6組藥物組合開展了試驗(yàn)研究，具體組合物如下：
[0019] 組合物一：丹參酚酸Blmg和羥基紅花黃色素 A30mg。
[0020] 組合物二：丹參酚酸B30mg和羥基紅花黃色素 Almg。
[0021] 組合物三：丹參酚酸B20mg和羥基紅花黃色素 A15mg。
[0022] 組合物四：丹參酚酸B鎂鹽15mg和羥基紅花黃色素 A15mg。
[0023] 組合物五：丹參酚酸B鉀鹽15mg和羥基紅花黃色素 A15mg。
[0024] 組合物六：丹參酚酸B鈣鹽15mg和羥基紅花黃色素 A15mg。
[0025] 實(shí)驗(yàn)一、本發(fā)明對(duì)慢性腎衰大鼠的治療作用
[0026] 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠170只，雌雄各半，體重200g±20g，購自中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物中心。
[0027] 2.實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明6組組合物藥物成分，均有由大連美侖生物技術(shù)有限公司提 供，實(shí)驗(yàn)前均用蒸餾水配成5mg/ml溶液（丹參酚酸B、羥基紅花黃色素 A的濃度與組合物三 相同）。
[0028] 3.實(shí)驗(yàn)方法取SD大鼠隨即取出15只作為空白對(duì)照組，其余大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天。 除空白對(duì)照組外，其余大鼠用2. 5 %腺嘌呤混懸液按250mg/kg/天灌胃，連續(xù)灌胃給予3周， 待出現(xiàn)血清尿素氮、肌酐升高等腎功能衰竭現(xiàn)象時(shí)，將符合要求的大鼠隨即分為模型組、組 合物一至六組。組合物一至六組分別灌胃給予相應(yīng)藥物l〇ml/kg，空白對(duì)照組和模型組灌胃 給予等體積的蒸餾水，每日給藥一次，連續(xù)給藥4周。末次給藥24h后，腹主動(dòng)脈取血，測(cè)定 血清尿素氮、肌酐、血清白蛋白的含量和血液流變學(xué)各指標(biāo)，解剖腎臟進(jìn)行病理切片，顯微 鏡下觀察病理變化。
[0029] 4.檢測(cè)指標(biāo)
[0030] (1)測(cè)定血清尿素氮、肌酐和血清白蛋白的含量
[0031] (2)血液流變學(xué)檢查
[0032] (3)病理學(xué)檢查
[0033] 5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0034] (1)本發(fā)明對(duì)慢性腎衰模型大鼠血清尿素氮、肌酐和血清白蛋白的影響。見表1。
[0035] 表1本發(fā)明對(duì)慢性腎衰大鼠血清尿素氮、肌酐和血清白蛋白的影響)
[0036]
[0037]
[0038] 注：各組與模型組比較*P〈0. 05，**P〈0. 01
[0039] 結(jié)果表明：空白對(duì)照組與模型組比較尿素氮和肌酐明顯較低，血清白蛋白明顯較 高，且有顯著性差異，表明造模后，已對(duì)大鼠造成嚴(yán)重?fù)p傷，經(jīng)過4周的治療各給藥組大鼠 尿素氮和肌酐明顯降低，血清白蛋白明顯升高，且有顯著性差異（P〈〇. 05或p〈0. 01)。
[0040] (2)本發(fā)明對(duì)慢性腎衰大鼠血液流變學(xué)的影響。見表2。
[0041] 表2本發(fā)明對(duì)慢性腎衰大鼠血液流變學(xué)的影響G ±Λ< )
[0043] 注：各組與模型組比較*Ρ〈0· 05, **Ρ〈0· 01
[0044] 結(jié)果表明：空白對(duì)照組與模型組比較全血粘度，血漿粘度和紅細(xì)胞壓積均明顯較 低，且有顯著性差異，表明造模后，已對(duì)大鼠造成嚴(yán)重?fù)p傷，經(jīng)過4周的治療各給藥組大鼠 全血粘度，血漿粘度和紅細(xì)胞壓積均明顯降低，且有顯著性差異（P〈〇. 05或p〈0. 01)。
[0045] (3) HE染色顯微鏡下觀察結(jié)果
[0046] 空白對(duì)照組：腎小球和腎小管清晰，結(jié)構(gòu)正常，未見病理改變；模型組：腎小球萎 縮，腎小管明顯擴(kuò)張，近曲小管和遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞均有明顯濁腫和變性發(fā)生，腎間質(zhì)纖維 組織增生，并有慢性炎細(xì)胞浸潤；各給藥組：腎小球輕微充血，結(jié)構(gòu)未見異常，腎小管有輕 微擴(kuò)張，無明顯炎細(xì)胞浸潤。
[0047] 6.結(jié)論結(jié)果證實(shí)，各給藥組對(duì)慢性腎衰均有較好地治療作用，具體表現(xiàn)在改善血 肌酐、尿素氮、血清白蛋白、血液流變學(xué)各指標(biāo)和病理學(xué)特征方面。
[0048] 實(shí)驗(yàn)二、本發(fā)明組合物對(duì)腎小球腎炎的治療作用
[0049] 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠120只，雌雄各半，體重180_220g，購自中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物中心。新西蘭白兔8只，購自西安市迪樂普生物資源開發(fā)有限公司。
[0050] 2.實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明6組組合物藥物成分，均有由大連美侖生物技術(shù)有限公司提 供，實(shí)驗(yàn)前均用蒸餾水配成5mg/ml溶液（丹參酚酸B、羥基紅花黃色素 A的濃度與組合三相 同）。
[0051] 3.實(shí)驗(yàn)方法
[0052] (1)制備兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清取無菌的SD大鼠6只，處死，小心摘取大鼠胸腺 和肝臟。將肝臟用PBS緩沖液沖洗干凈后制成肝粉待用；另將胸腺置于PBS緩沖液中，沖洗 2-3次，小心分離、去除其表面的淋巴結(jié)和血管，置200目不銹鋼網(wǎng)篩上，用解剖針輕輕劃破 胸腺游離出胸腺細(xì)胞，用PBS緩沖液沖洗，收集胸腺細(xì)胞懸液，離心10min，用PBS緩沖液重 制2 X IOVml的胸腺細(xì)胞懸液，按體積比1 :2混合胸腺細(xì)胞懸液和弗氏完全佐劑，充分混 勻，以混合后的懸液作為大鼠胸腺細(xì)胞免疫抗原液。將大鼠胸腺細(xì)胞免疫抗原液多點(diǎn)注射 于8只新西蘭白兔背部皮下，每只兔子注射3ml。常規(guī)飼養(yǎng)2周后，兔耳緣靜脈注射2 X IO7/ ml的胸腺細(xì)胞懸液，每只注射I. 5ml。7d后心臟抽取兔子血液，收集兔血清。用免疫擴(kuò)散法 測(cè)抗兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清效價(jià)為I :160-1 :320。兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清于56°C、30min 滅活后，分別用同個(gè)體大鼠肝粉吸附以去除非特異性抗體，室溫離心30min，棄去肝粉，收集 兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清，-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0053] ⑵慢性腎小球腎炎大鼠模型的制備取健康SD大鼠110只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，收 集尿液，檢測(cè)尿蛋白，結(jié)果均為陰性。隨即分為正常對(duì)照組、模型組、組合物一至六組，每組 10只。除正常對(duì)照組大鼠尾靜脈注射2ml生理鹽水外，其余組大鼠一次性尾靜脈注射兔抗 大鼠胸腺細(xì)胞血清2ml。
[0054] (3)給藥方法及測(cè)定指標(biāo)注射兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清6天后，組合物一至六組分 別灌胃給予相應(yīng)藥物l〇ml/kg，空白對(duì)照組和模型組灌胃給予等體積的蒸餾水，每日給藥一 次，連續(xù)給藥4周。末次給藥24小時(shí)后，腹主動(dòng)脈取血，分別測(cè)定IL-6、IL-8和TNF- α水 平，解剖腎臟，進(jìn)行病理學(xué)考察。
[0055] 4.結(jié)果
[0056] (1)本發(fā)明對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠血清IL-6、IL-8和TNF- α的影響
[0057] 表3本發(fā)明對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠血清IL-6、IL-8和TNF- α的影響（
[0058]
[0059] 注：各組與模型組比較*Ρ〈0· 05廣Ρ〈0· 01
[0060] 結(jié)果表明：模型組大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α水平較正常對(duì)照組顯著升高 (Ρ〈0. 01)，表明造模成功。本發(fā)明藥物組大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α水平低于模型組 (P〈0. 05或P〈0. 01)，本發(fā)明藥物組可降低IL-6含量水平，表明各給藥組在一定程度上均可 以改善血清細(xì)胞因子水平。
[0061] (2)病理學(xué)檢查正常對(duì)照組大鼠腎小球輪廓、結(jié)構(gòu)清晰，形態(tài)正常；模型組大鼠腎 小管明顯腫脹，有充血，管腔變窄，部分可見蛋白管形，腎小球體積增大，可見炎細(xì)胞浸潤； 各給藥組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)未見明顯異常，腎小球毛細(xì)管有輕微腫脹，基底膜稍有增厚，炎細(xì) 胞浸潤不明顯。
[0062] 5.結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，各給藥組對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠均有較好地治療作用，具 體表現(xiàn)在降低血清炎癥因子水平和改善病理學(xué)特征方面。
[0063] 實(shí)驗(yàn)三、考察本發(fā)明藥物對(duì)高血壓腎病的治療作用
[0064] 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自發(fā)性高血壓大鼠110只，雌雄各半，體重180_220g，購自中國科學(xué)院 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0065] 2.實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明6組組合物藥物成分，均有由大連美侖生物技術(shù)有限公司提 供，實(shí)驗(yàn)前均用蒸餾水配成5mg/ml溶液（丹參酚酸B、羥基紅花黃色素 A的濃度與組合三相 同）。
[0066] 3.實(shí)驗(yàn)方法
[0067] 待測(cè)得自發(fā)性高血壓大鼠尿微量白蛋白為20_200mg/L時(shí)為自發(fā)性高血壓腎病模 型復(fù)制成功，剔除不合格大鼠，隨機(jī)分為組合物一至六組，丹參酚酸B組和羥基紅花黃色素 A組，另取10只做為對(duì)照組。各給藥組灌胃給予相應(yīng)藥物0. 5ml/10g，對(duì)照組給予等體積的 蒸饋水，每天給藥一次，連續(xù)給藥4周。
[0068] 4.檢測(cè)指標(biāo)
[0069] 4. 1測(cè)定血壓。給藥前，測(cè)定大鼠清醒狀態(tài)下的尾靜脈收縮壓，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，再次測(cè) 定大鼠尾靜脈的收縮壓，且每次測(cè)三次求平均值。
[0070] 4. 2測(cè)定各組大鼠尿液中尿微量白蛋白、尿02微球蛋白。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前收集12h尿 液，收集尿液期間禁食