一種甘草多糖脂質(zhì)體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甘草多糖脂質(zhì)體的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 甘草在我國有悠久的藥用歷史，是一種補(bǔ)益中草藥。甘草多糖（glycyrrhiza polysaccharide，GP)是甘草的主要活性成分之一，是從甘草中提取出的一類α-D-P比喃多 糖，多糖組分由鼠李糖、葡聚糖、阿拉伯糖和半乳糖組成，并以葡聚糖為主鏈。該多糖類物 質(zhì)，其基本結(jié)構(gòu)為a-(1，4)鍵連接的單一葡聚糖具有抗炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能，甘草 多糖分子的形貌結(jié)構(gòu)為螺旋結(jié)構(gòu)圖像。
[0003] 脂質(zhì)體（liposomes)是人工合成的雙分子層的單層磷脂或多層可溶性物質(zhì)隔開 的呈同心圓的微環(huán)體脂質(zhì)小囊，可包裹各種物質(zhì)及疫苗，進(jìn)入機(jī)體后主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng) 吞噬而激活機(jī)體的自身免疫功能。它既是抗原也是免疫佐劑，由于其膜結(jié)構(gòu)致密，抗原不易 漏出，能長久地將抗原傳遞給適免疫細(xì)胞，促進(jìn)抗原對抗原提呈細(xì)胞的定向作用，從而顯著 增強(qiáng)機(jī)體對抗原的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生保護(hù)性抗體和細(xì)胞免疫應(yīng)答。通過各種給藥途徑，它還可 以使包裹的藥物具有靶向作用，準(zhǔn)確的命中病變部位、組織和細(xì)胞，從而增強(qiáng)藥物的療效， 并具有較大的發(fā)展前景。
[0004] 脂質(zhì)體作為新型藥物載體，在中藥制劑中獲得廣泛的應(yīng)用以來，可以防止藥物快 速降解、延緩藥物釋放而延長藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間，提高藥物的溶出度和穩(wěn)定性，增加藥 物對靶區(qū)的指向性，降低對正常細(xì)胞的毒性，提高藥物的生物利用度。以脂質(zhì)體作藥物包 埋，不但能提高藥物的靶向定位作用，還能減少藥物的用量及降低毒副作用。
[0005] 當(dāng)前甘草多糖主要被制備成膠囊劑型，然而甘草多糖直接用于臨床，存在著多糖 在體內(nèi)代謝快、作用時(shí)間短、作用范圍不集中、臨床用量大等缺點(diǎn)?，F(xiàn)有技術(shù)中沒有甘草多 糖脂質(zhì)體的制備，研究者沒有任何參考，同時(shí)由于各種方法中參數(shù)之間的相互影響，無法通 過有限次的實(shí)驗(yàn)確定合適的方法參數(shù)，所以在如何制備甘草多糖脂質(zhì)體時(shí)存在技術(shù)難題。
[0006] 雖然現(xiàn)有技術(shù)中有關(guān)其他脂質(zhì)體制備方法的介紹，例如CN201310456446. 0公開 了一種地黃多糖脂質(zhì)體逆相蒸發(fā)法的制備方法，先取大豆磷脂、膽固醇和吐溫80,溶于溶劑 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)中，超聲溶解；30~70°C減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)加入乙醚溶解；將地黃 多糖的PBS溶液導(dǎo)入反應(yīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)容器，形成兩相體系，冰水浴超聲，至形成穩(wěn)定的旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)W/0型乳劑；30~70°C減壓蒸發(fā)形成膠態(tài)后加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)PBS，繼續(xù)旋蒸除去有機(jī)溶劑； 置于超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理，使地黃多糖融合到脂質(zhì)體中，得旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)到地黃多糖 脂質(zhì)體混懸液；再將混懸液分別擠壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)過微孔濾膜，得地黃多糖脂質(zhì)體。
[0007] 但是由于多糖的結(jié)構(gòu)具有各自的特點(diǎn)，例如單糖的種類、連接位點(diǎn)、單糖和糖苷鍵 的構(gòu)型以及重復(fù)單元的數(shù)量等都會(huì)因提取多糖的種類不同而不同，上述專利中公開的一種 地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，是針對玄參科植物特別是地黃這中多糖的特點(diǎn)而形成的，所 以即使現(xiàn)有技術(shù)中有其他脂質(zhì)體的制備方法，但是對甘草多糖脂質(zhì)體的制備沒有過多的指 導(dǎo)價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的就是為了解決上述問題，提供一種甘草多糖脂質(zhì)體的制備方法，包 括以下步驟：
[0009] (1)準(zhǔn)確稱取分析純的大豆磷脂、膽固醇和吐溫80,溶于氯仿和乙醚（體積比 0. 5-1. 5:2-3 ;優(yōu)選1:2,在氯仿與乙醚以1:2的比例，在保證最佳溶解效果的同時(shí)，減慢溶 劑的揮發(fā)。）中，超聲使其充分溶解；其中大豆磷脂和膽固醇的質(zhì)量比為2:1-10:1，吐溫80 和大豆磷脂的質(zhì)量，1:1-1:20 ;
[0010] (2)將含甘草多糖的PBS溶液（磷酸鹽緩沖溶液，pH = 7. 4)緩慢導(dǎo)入反應(yīng)容器， 形成兩相體系，冰水浴超聲，至形成穩(wěn)定的W/0型乳劑；其中大豆磷脂與甘草多糖的質(zhì)量比 為 5:1-25:1 ;
[0011] (3) 25~65°C減壓蒸發(fā)，形成膠態(tài)后加入PBS溶液，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機(jī)溶 劑；
[0012] (4)置于超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理，得到甘草多糖脂質(zhì)體混懸液；
[0013] (5)再將混懸液分別擠壓過孔徑為0. 45 μπι、0. 22 μπι的微孔濾膜3次，得甘草多糖 脂質(zhì)體，置于4°C保存。
[0014] 所述步驟⑵中，大豆磷脂與甘草多糖的質(zhì)量比為20:1，如圖4和5,當(dāng)脂藥比 20:1時(shí)，包封率達(dá)最大值，而載藥量隨著脂藥比的增加而增加，當(dāng)15:1以后不再增加。
[0015] 所述步驟⑴中，大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為8:1，如圖6和7,當(dāng)大豆磷脂與膽 固醇的比率為8:1時(shí)，包封率和載藥量均達(dá)到最大值。
[0016] 所述步驟⑴中，吐溫80與大豆磷脂的質(zhì)量比為1:8,如圖10和11，包封率和載 藥量隨著吐溫80量的增加先增加后降低，當(dāng)吐溫80與磷脂比為1:8時(shí)，包封率達(dá)最大值， 而吐溫80與磷脂比為1:16時(shí)，載藥量達(dá)最大值。
[0017] 所述步驟（3)中，減壓蒸發(fā)與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的溫度均為45°C，如圖8和9,當(dāng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 溫度為45 °C時(shí)，包封率和載藥量達(dá)到最大值。
[0018] 所述步驟⑷中，超聲時(shí)間為15min，（強(qiáng)度40%，2.58開，2.58停），如圖2和3， 當(dāng)超聲時(shí)間在15min時(shí)，包封率和載藥量均為最大值。
[0019] 所述步驟（2)中，大豆磷脂與甘草多糖的質(zhì)量比為24.24:1 ;所述步驟（3)中，旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為46. 45°C，所述步驟（4)中，超聲時(shí)間為16. llmin，在此條件下包封率和載藥 量達(dá)到最大值。
[0020] 所述步驟（2)中，大豆磷脂與甘草多糖的質(zhì)量比為24:1 ;所述步驟（3)中，旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)溫度為46°C，所述步驟（4)中，超聲時(shí)間為16min，在此條件下包封率和載藥量達(dá)到最大 值。
[0021] 本發(fā)明的有益效果：
[0022] 本發(fā)明首次將甘草多糖包封于脂質(zhì)體中，制備出甘草多糖脂質(zhì)體，利用脂質(zhì)體的 緩釋作用和靶向作用維持甘草多糖在機(jī)體內(nèi)的有效濃度，提高其生物利用度。
[0023] 本發(fā)明采用逆相蒸發(fā)法，通過響應(yīng)面優(yōu)化，能夠最大可能地節(jié)約原材料同時(shí)獲得 較高的藥物包封率；結(jié)合超聲作用，使制備的脂質(zhì)體更均一更具穩(wěn)定性。其中，最佳制備工 藝為：大豆磷脂與甘草多糖的質(zhì)量比為24,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為46°C，超聲時(shí)間為16min，包封 率平均值約為79%，其平均粒徑為136. 4±0. 15lnm，見圖15。
[0024] 本發(fā)明選用有機(jī)溶劑氯仿和乙醚，并且選用1:2的用量，配合合適的旋蒸時(shí)間與 以及旋蒸溫度避免了逆向蒸發(fā)中常用溶劑甲醇的不易溶解，同時(shí)解決了現(xiàn)有技術(shù)中旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)時(shí)的貼壁現(xiàn)象。
[0025] 超聲的時(shí)間與處方有關(guān)，同時(shí)若加入膽固醇后更加的不易超聲，本發(fā)明選用了合 適的超聲時(shí)間搭配其他的參數(shù)，避免超聲出現(xiàn)的無法成乳的現(xiàn)象。
【附圖說明】
[0026] 圖1是葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；
[0027] 圖2是超聲時(shí)間對GUPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0028] 圖3是超聲時(shí)間對GUPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0029] 圖4是脂藥比對GUPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0030] 圖5是脂藥比對GUPL的載藥量影響結(jié)果圖；
[0031] 圖6是膜材比對GUPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0032] 圖7是膜材比對GUPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0033] 圖8是旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對GUPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0034] 圖9是旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對GUPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0035] 圖10是吐溫80與磷脂比對GUPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0036] 圖11是吐溫80與磷脂比對GUPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0037] 圖12是脂藥比和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對脂質(zhì)體包封率影響的的等高線和響應(yīng)面圖；
[0038] 圖13是脂藥比和超聲時(shí)間對脂質(zhì)體包封率影響的的等尚線和響應(yīng)面圖；
[0039] 圖14是旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度和超聲時(shí)間對脂質(zhì)體包封率影響的的等高線和響應(yīng)面圖；
[0040] 圖15是本發(fā)明方法制備的甘草多糖脂質(zhì)體的粒度分布圖。
【具體實(shí)施方式】
[0041] 下面結(jié)合附圖與實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。以下實(shí)施例中所使用的主要藥 物、試劑、設(shè)備和計(jì)算方法具體如下：
[0042] 試驗(yàn)藥物：生甘草（安徽省祥和藥業(yè)有限公司生產(chǎn)批號：140402)。
[0043] 主要試劑：大豆磷脂（上海太偉藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號20120904)，膽固醇（天 津市博迪化學(xué)有限公司