一種抗過敏復合多糖組合物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種復合多糖組合物，更具體地說，是一種可應用于抗過敏藥品和防 治皮膚過敏化妝品中的抗過敏復合多糖組合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 人體過敏是一個復雜的過程，主要與機體免疫球蛋白IgE、細胞核因子酉乙蛋白、 白細胞介素_8、腫瘤壞死因子_a及組胺5個方面息息相關，因此在人體常見過敏發(fā)生機制 的這5個關鍵環(huán)節(jié)上起作用是較為有效、直接、全面的防治過敏途徑。而多糖作為一種在植 物中分布很廣的活性成分，在抗過敏的應用領域有著獨特的優(yōu)勢。
[0003] 對于多糖的抗過敏機理，傳統(tǒng)中醫(yī)學認為主要是通過調(diào)節(jié)機體免疫功能達到相應 效果。而隨著科學技術的發(fā)展，多糖的抗過敏機理在分子生物、細胞基因學的研究漸見報 道。如中國專利[公開（公告）號CN103467616A]公開了一種通過提取純化獲得的紫菜多 糖能增加Thl細胞因子IFN-y的基因表達量，降低Th2細胞因子IL-4的基因表達量。中 國現(xiàn)代應用藥學[1999,16(2)]報道了麥冬多糖能拮抗乙酰膽堿和組胺混合液刺激引起的 正常豚鼠和卵白蛋白引起的致敏豚鼠的支氣管平滑肌收縮、抑制致敏豚鼠哮喘的發(fā)生、并 具有較顯著的抗小鼠耳異種被動皮膚過敏的作用。中藥藥理與臨床[2014 ;30(3) :86-89] 報道了姬松茸多糖通過抑制肥大細胞脫顆粒和釋放組胺可減輕過敏炎癥反應的強度。中國 醫(yī)院藥學雜志[2011，31 (18) :1532-1534]報道了桑黃多糖抗過敏作用與抑制肥大細胞脫 顆粒及炎性介子的釋放有關。
[0004] 然而，人體過敏是一個復雜的過程。主要與機體免疫球蛋白IgE、細胞核因子酉乙 蛋白、白細胞介素-8、腫瘤壞死因子-a及組胺5個方面息息相關。所以在人體常見過敏 發(fā)生機制的5個關鍵環(huán)節(jié)上起作用是較為有效、直接、全面的防治過敏途徑。但目前研究僅 是以單味藥材獲得的多糖進行細胞分子水平單方面的抗過敏作用機制研究，尚未有人以黃 芪、合歡皮、甘草為原料組成復合多糖用于多環(huán)節(jié)抗過敏方面的報道。
[0005] 黃芪、合歡皮、甘草作為常見的抗過敏中藥，對它們抗過敏作用的研究大多數(shù)只停 留在對其單組分的分離和化學成分鑒定上，但沒有嘗試將這三種不同結構類型的活性多糖 通過合理復配得到協(xié)同增效作用的抗過敏復合多糖，也沒有對其活性成分篩選和功效驗 證。
[0006]研究表明[ClinicalJournalofChineseMedicine，2012 (4) :4_6.]，黃苗多糖 是黃芪中含量最多、免疫活性最強的一類物質(zhì)，在多方而發(fā)揮免疫增強作用，不僅能增強特 異性免疫，還能增強非特異性免疫，不僅能增強正常機體的免疫功能，還能增強異常機體的 免疫功能。例如黃芪多糖誘導培養(yǎng)獲得的樹突狀細胞對異基因外周血T淋巴細胞的增值具 有明顯刺激作用，且隨細胞數(shù)量的增多而作用增強，呈良好的量效關系，證實黃茂多糖不僅 可以定向誘生臍血單核細胞分化為DC，而且可以促使DC的成熟，特異性激活T細胞，產(chǎn)生細 胞免疫。蒙古黃芪中已發(fā)現(xiàn)8種多糖成分：黃芪多糖I、II、III，葡聚糖AG-l，AG-2,雜多糖 AH-UAH-2,和1種水溶性葡聚糖。膜莢黃芪中的總多糖，由葡萄糖、阿拉伯糖、萄搪醛酸、半 乳糖醛酸等組成。
[0007] 甘草多糖的具有重要的生理活性，研究發(fā)現(xiàn)它具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)以及抗腫瘤 的活性。能激活網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，具有抗補體活性，直接刺激B淋巴細胞增殖，誘導人體中 IgM，IgG的產(chǎn)生，還能誘生和促誘生干擾素，增強機體的殺傷細胞的活性。甘草多糖的免疫 調(diào)節(jié)作用主要體現(xiàn)在對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中單核巨噬細胞系統(tǒng)功能的影響，也可激活靜止 小鼠脾淋巴細胞增殖效應以及抗補體活性等。研究甘草多糖抑制腫瘤的抑制，認為甘草多 糖可以單獨或者協(xié)同化療藥共同作用于腫瘤細胞。組成甘草多糖的單糖一般為阿拉伯糖、 半乳糖、鼠李糖以及葡萄糖，部分酸性多糖還含有半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸，還含有巖藻 糖、木糖、甘露糖等。還有學者從甘草根中分離到了a-l，4_連接的單一葡聚糖。
[0008] 合歡皮具有鎮(zhèn)靜催眠、抗生育、抗炎、抑制腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性，水煎 劑大鼠灌胃給藥可抑制腹膜肥大細胞脫顆粒，可明顯抑制抗原（馬血清）對大鼠的致敏過 程和抗體產(chǎn)生過程。有學者猜測其抗過敏有效成分為耐熱的水溶性物質(zhì)。同時有研究表明， 合歡皮中的多糖類是細胞免疫的活性成分，具有增強實驗小鼠機體紅細胞免疫功能。
[0009] 傳統(tǒng)的多糖的分離純化方法通常都包括水提、醇沉、除脂、除蛋白、脫色、柱分離這 些基本步驟。常用的去除多糖中蛋白質(zhì)的方法有：sevag法、二氣二氯乙燒法、二氯醋酸法， 這些方法的原理是加入有機溶劑使蛋白質(zhì)變性沉淀而多糖在溶液中保留。這些方法不可避 免會帶來溶劑殘留。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有技術存在的不足之處，提供一種成分明確、多環(huán)節(jié)協(xié)同增 效的具有抗過敏功效的抗過敏復合多糖組合物。
[0011] 本發(fā)明的第二目的是提供一種抗過敏復合多糖組合物的制備方法。
[0012] 本發(fā)明的第三目的提供所述抗過敏復合多糖組合物的應用。
[0013] 為解決上述的技術問題，本發(fā)明采用如下技術方案：一種抗過敏復合多糖組合物， 由包括以下重量份數(shù)組分制成：黃芪10~90、合歡皮10~90、甘草1~50。
[0014] 優(yōu)選的，所述抗過敏復合多糖組合物，由包括以下重量份數(shù)組分制成：黃芪30~ 50、合歡皮10~40、甘草10~30。
[0015] 上述抗過敏復合多糖組合物可以采用常規(guī)的醇水煎煮來制備，但制備效率不高和 效果欠佳。
[0016] -種抗過敏復合多糖組合物的制備方法，其包括的步驟如下：
[0017] (1)打粉：將黃芪、合歡皮和甘草粉碎；
[0018] (2)投料：在藥粉中加入其重量5~50倍量的水或醇水混合物，攪拌均勻；
[0019] (3)提?。涸?0? 1~70MPa、0~25°C條件下提取，收集提取液進行離心分離，收集 離心液；
[0020] (4)分離濃縮：將離心液用微濾膜除去固體顆粒、細菌等雜質(zhì)，然后用IOODa~ 20000Da通量的超濾膜分級純化多糖，最后濃縮、干燥。
[0021] 所述（2)步驟中，水的加入量為為藥粉重量的20~30倍。水優(yōu)選純水。
[0022] 所述（3)步驟中，提取條件為壓力為-0? 1~35MPa、提取溫度為10~20°C、提取 次數(shù)為1次。
[0023] 所述⑷步驟中，微濾膜的孔徑規(guī)格為0.2 ym~1.0 ym ;超濾膜孔徑規(guī)格為 1000 Da~lOOOODa。
[0024] 所述醇水混合物優(yōu)選體積百份數(shù)為50~95%的乙醇水溶液。
[0025] 所述⑷步驟中，得到的截留液濃縮到1. 03~1. 08比重。
[0026] 抗過敏復合多糖組合物可以用于制備具有抗過敏功效的化妝品，添加量為1~ 50% (質(zhì)量百份數(shù)）?；瘖y品的劑型包括霜劑，乳液、水劑、凝膠劑、面膜、涂擦劑和洗劑。
[0027] 抗過敏復合多糖組合物可以用于制備具有抗過敏功效的藥物中，添加量為10~ 90%，劑型包括液體制劑（湯劑、糖漿劑、注射液、合劑、酊劑等）、固體制劑（散劑、沖劑、丸 劑、片劑、膠囊劑等）、半固體制劑（內(nèi)服膏、外用膏、糊劑等）、氣體劑型（氣霧劑、煙劑等）。
[0028] 本發(fā)明把黃芪、甘草、合歡皮多糖合理復配后，通過功效驗證實驗表明，本發(fā)明提 取物能抑制IgE活性表達，阻止組胺的釋放，阻斷NF-KB的激活，抑制IL-8活性表達，抑制 TNF-a活性表達，具有抗炎，抗過敏、增強機體免疫力的效果。
[0029] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：
[0030] (1)與現(xiàn)有抗過敏中藥復方相比，本發(fā)明具有明確的抗過敏功效成分，產(chǎn)品質(zhì)量容 易控制；
[0031] (2)與現(xiàn)有抗過敏西藥相比，本發(fā)明提取物具有多環(huán)節(jié)在致敏靶點上起協(xié)同增效 作用，無毒副作用、安全性高；
[0032] (3)生產(chǎn)制造過程無有機溶劑接觸，無毒害殘留；而且制備工藝簡單、容易操作， 適合于產(chǎn)業(yè)化推廣應用。
【附圖說明】
[0033] 圖1是本發(fā)明的制備方法工藝流程簡圖；
[0034] 圖2是本發(fā)明提取物對透明質(zhì)酸酶抑制實驗結果的柱狀圖；
[0035] 圖3是分子基因調(diào)控表達的RNA電泳圖；
[0036] 圖4是分子基因調(diào)控表達的NFKBp65的擴增曲線；
[0037] 圖5是分子基因調(diào)控表達的NFKBp65的熔解曲線；
[0038] 圖6是分子基因調(diào)控表達的GAPDH的擴增曲線；
[0039] 圖7是分子基因調(diào)控表達的GAPDH的熔解曲線；
[0040] 圖8是低溫高壓差提取器的結構示意圖。 具體實施例
[0041] 為了更好地闡述本
【發(fā)明內(nèi)容】
，下面用若干較佳的具體實施例進行說明。
[0042] 發(fā)明原理
[0043] 本發(fā)明根據(jù)中藥復方祛邪去因、扶正固本，通過協(xié)調(diào)臟腑經(jīng)絡機能從而糾正陰陽 偏盛偏衰，使機體恢復到陰平陽秘的正常狀態(tài)的治療病原理進行合理組方。黃芪、合歡皮、 甘草三者具有不同結構類型的活性多糖，所以功效上會有所差別，在特定的組合比例情況 下可以達到協(xié)同增效作用。這也是指導本發(fā)明組方的一個重要原因。
[0044]膜分離工藝是純物理性的分離，在壓力驅動下常溫進行分離、濃縮、精制，分離過 程中