一種甜葉懸鉤子多糖用于抑制血液的凝固的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于一種從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取甜葉懸鉤子多糖提取物， 甜葉懸鉤子提取的水溶性多糖、草酸鹽溶果膠類多糖、堿溶性多糖的混合物甜葉懸鉤子多 糖用于抑制血液的凝固，屬于醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 血液凝固，是指血液由液體狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)椴涣鲃?dòng)的凝膠狀態(tài)的過(guò)程，是生理性止血 的重要環(huán)節(jié)。血液凝固是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，凝血機(jī)制內(nèi)部采用級(jí)聯(lián)機(jī)制逐級(jí)放大凝血信號(hào)， 并通過(guò)多個(gè)正反饋環(huán)節(jié)加強(qiáng)凝血過(guò)程。與此同時(shí)，為了防止正常情況下意外形成血栓，或者 出血部位形成的血栓不受控制，機(jī)體還有抗凝機(jī)制和纖溶機(jī)制對(duì)抗凝血機(jī)制。
[0003] 抗凝藥物是一類通過(guò)影響凝血過(guò)程的不同環(huán)節(jié)而抑制血液凝固的藥物，抗凝藥物 被廣泛用于血栓栓塞性疾病的預(yù)防和治療，預(yù)防中風(fēng)或其它血栓性疾病。傳統(tǒng)抗凝藥物中 最常用的口服抗凝藥華法林，已經(jīng)在臨床使用很多年，但其存在諸多局限性，如起效延緩、 抗凝治療窗窄、易受飲食影響、用藥期間需要頻繁的監(jiān)測(cè)及調(diào)節(jié)劑量、與多種藥物之間存在 相互作用以及大出血等副作用等。因此長(zhǎng)期以來(lái)，人們一直在尋找一種安全、有效和方便的 抗凝藥物。理想的抗凝藥應(yīng)該具有高的有效/安全系數(shù)、可預(yù)測(cè)的劑量響應(yīng)（無(wú)需監(jiān)測(cè)）、 起效快、藥物間相互作用少等特點(diǎn)。從天然植物中尋找安全有效的抗凝活性物質(zhì)一直是關(guān) 注的熱點(diǎn)。
[0004] 甜葉懸鉤子是薔薇科懸鉤子屬的一個(gè)變種，屬于多年生有刺灌木，主要生長(zhǎng)于我 國(guó)廣西省的山區(qū)，由于其葉味道甘甜，口感獨(dú)特，故又稱廣西甜茶，是廣西特有的無(wú)毒、低熱 量、高甜度的野外珍稀天然植物。在民間有悠久的應(yīng)用歷史，長(zhǎng)期以來(lái)當(dāng)?shù)匕傩找恢币云淙~ 當(dāng)茶飲用，也用來(lái)代糖加工食品。根據(jù)廣西中藥藥物標(biāo)準(zhǔn)記載，甜葉懸鉤子具有清熱降火、 潤(rùn)肺生津、止咳祛痰的功效。其食用性以及藥用性早已為當(dāng)?shù)孛耖g醫(yī)藥所證實(shí)。但是直至 上世紀(jì)80年代的全國(guó)藥物調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，雖然懸鉤子植物在我國(guó)各地均有分布，但都不具備 廣西甜葉懸鉤子這種甜味，因此該植物被植物學(xué)家李樹(shù)剛確定為懸鉤子的變種，與其它懸 鉤子區(qū)分來(lái)。甜葉懸鉤子、甜葉菊以及羅漢果被并稱為廣西三大甜味植物，以它們?yōu)樵洗?量制備天然甜味劑，而其中以甜葉懸鉤子制備成的甜味劑口感最為獨(dú)特。日本專家保健學(xué) 部高級(jí)專員田中三郎等曾在廣西考察時(shí)指出，較之甜葉菊和羅漢果，甜葉懸鉤子的甜味是 人們最容易接受的，是目前世界上所發(fā)現(xiàn)的甜味植物中最理想的植物。自上世紀(jì)80年代發(fā) 現(xiàn)該物種以來(lái)，我國(guó)逐步展開(kāi)了對(duì)甜葉懸鉤子的研究，在其食用和藥用等方面獲得了一定 的進(jìn)展。研究表明，甜葉懸鉤子葉片中含有豐富的必需氨基酸、黃酮苷、甜葉懸鉤子苷、多 酚、維生素以及人體所必需的多種微量元素；甜葉懸鉤子粗提物具有降糖、降脂、抗炎、抗 過(guò)敏、改善皮膚瘙癢等多種藥理活性。
[0005] 多糖是一類具有廣泛生物活性的天然大分子化合物，廣泛分布于自然界高等植 物、藻類、微生物（細(xì)菌和真菌）及動(dòng)物體內(nèi)。多糖類物質(zhì)是除蛋白質(zhì)和核酸之外的又一類 重要的生物大分子，是很多植物藥發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，植物多糖具有復(fù)雜的、多方面的生 物活性和功能，如免疫調(diào)節(jié)功能、抗感染、抗輻射、抗凝血、降血糖、降血脂、促進(jìn)核酸與蛋白 質(zhì)的生物合成以及抗衰老等作用。如甘草多糖具有明顯的抗病毒和抗腫瘤作用；黑木耳多 糖、銀杏外種皮多糖和蘆薈多糖可抗腫瘤和增強(qiáng)人體免疫功能；柴胡多糖具有抗輻射、增強(qiáng) 免疫功能等生物學(xué)作用；麥冬多糖具有降血糖及免疫增強(qiáng)作用；爬山虎多糖具有抗病毒和 抗衰老作用；茶葉多糖、靈芝多糖、大蒜多糖及黑木耳多糖等植物多糖具有抗凝血作用等。 目前已有部分天然多糖類化合物用于臨床，顯示出良好療效，已成為天然藥物及保健品研 發(fā)中的重要部分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是：從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多 糖、草酸鹽溶果膠類多糖、堿溶性多糖的混合物甜葉懸鉤子多糖用于抑制血液的凝固。
[0007] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
[0008] 1.從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、草酸鹽溶果膠類多糖、堿 溶性多糖
[0009] (1)將甜葉懸鉤子干葉粉碎后，用體積百分?jǐn)?shù)為80%-85%的乙醇水溶液在 60-80 °C浸泡80-1OOmin，抽濾，棄濾液，濾渣用去離子水在50-70 °C保溫浸取兩次，每次 90-150min，冷卻后抽濾，濾渣留下一步（2)提取用，合并兩次濾液，加入相當(dāng)于濃縮物三倍 體積的無(wú)水乙醇，4°C靜置過(guò)夜沉淀，離心分離，得到沉淀物a，稱重，用丙酮、乙醚、乙醇交 替洗滌3次，加去離子水溶解，加入相當(dāng)于沉淀a質(zhì)量的2% -3 %的三氯乙酸，于4°C靜置 90-150min，離心分離，濾渣留下一步（2)提取用，取上清濾液置于蒸餾水中透析20-30h，每 隔8h換一次透析液，透析后的溶液冷凍干燥，即得到水溶性甜葉懸鉤子多糖；
[0010] (2)合并以上（1)中去離子水提取抽濾后的濾渣和后續(xù)離心分離的濾渣，加入質(zhì) 量百分?jǐn)?shù)為〇. 5 %草酸銨水溶液，在85-95 °C攪拌，提取2-3次，每次40-80min，冷卻，抽濾， 濾渣留下一步（3)提取用，濾液用冰醋酸調(diào)pH值為5-6,于50-60°C減壓蒸餾濃縮，加入相 當(dāng)于濃縮物三倍體積的無(wú)水乙醇，沉淀，離心分離，得到沉淀b，稱重，沉淀b用丙酮、乙醚、 乙醇交替洗滌3次，加去離子水溶解，加入相當(dāng)于沉淀b質(zhì)量2% -3%的三氯乙酸，4°C靜 置90-150min，離心分離，濾渣留下一步（3)提取用，取上清濾液置于蒸餾水中透析20-30h， 每隔8h換一次透析液，透析后的溶液冷凍干燥，即得到草酸鹽溶果膠類甜葉懸鉤子多糖；
[0011] (3)合并以上（2)中草酸銨水溶液提取抽濾后的濾渣和后續(xù)離心分離的濾渣，加 入0. 5mol/LNa0H水溶液，室溫隊(duì)流下提取2-3次，每次40-80min，過(guò)濾，離心分離，上清濾 液以冰醋酸調(diào)pH值為5-6,于50-60°C減壓蒸餾濃縮，加入相當(dāng)于濃縮物三倍體積的無(wú)水乙 醇，沉淀，離心分離，得到沉淀c，沉淀物c用丙酮、乙醚、乙醇交替洗滌3次，加去離子水溶 解，加入相當(dāng)于沉淀(：質(zhì)量2%-3%的三氯乙酸，于4°(：靜置9〇-15〇 1^11，離心分離，取上清 濾液置于蒸餾水中透析20-30h，每隔8h換一次透析液，透析后的溶液冷凍干燥，即得到堿 溶性甜葉懸鉤子多糖。
[0012] 2.將以上1中（1)、（2)、（3)分別提取的薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子水溶性 多糖、草酸鹽溶果膠類多糖、堿溶性多糖混合，即為甜葉懸鉤子多糖，其優(yōu)選的混合質(zhì)量比 為I: 1 : 1〇
[0013] 3.從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、草酸鹽溶果膠類多糖、堿 溶性多糖結(jié)構(gòu)特征的檢測(cè)
[0014] (1)總糖含量、糖醛酸含量、蛋白質(zhì)含量
[0015] 采用苯酚-硫酸法測(cè)定薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、草酸鹽 溶果膠類多糖、堿溶性多糖的總糖含量，采用間羥基聯(lián)苯比色法測(cè)定其糖醛酸含量，采用考 馬斯亮藍(lán)法測(cè)定其蛋白質(zhì)含量，結(jié)果見(jiàn)實(shí)施例表1。
[0016] (2)單糖組成
[0017]采用氣相色譜測(cè)定薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、 草酸鹽溶果膠類多糖、堿溶性多糖單糖組成，結(jié)果顯示，甜葉懸鉤子提取水溶性 多糖主要由核糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖5種單糖組成，其摩爾比為 0. 146 : 0.403 : 17. 745 : 1.436 : 0.382;草酸鹽溶果膠類多糖主要由鼠李糖、核糖、阿 拉伯糖、巖藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖7種單糖組成，其摩爾比為0.1081 : 0.2478 : 0.1 056 : 0.0851 : 40.558 : 1.52 : 0.2797;堿溶性多糖主要由阿拉伯糖、巖藻糖、甘露糖、葡萄 糖和半乳糖5種單糖組成，其摩爾比為0.5386 : 0.2686 : 29. 441 : 1.354 : 0.2556。
[0018] (3)紅外光譜
[0019] 甜葉懸鉤子提取水溶性多糖