?？痔嵛锏闹苽浞椒捌淇鼓[癌應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及海洋產(chǎn)品深加工領(lǐng)域，特別涉及一種?？痔嵛锏闹苽浞椒捌淇鼓[癌應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]?？?Sea Anemone)又名海菊花，是一種海洋腔腸動(dòng)物，屬腔腸動(dòng)物門(Coelenterata)、珊瑚蟲綱(Anthozoa)、?？?actiniaria)動(dòng)物，是海洋中較原始的動(dòng)物。?？?科37種，廣泛分布在熱帶和溫?zé)釒ШＳ?，主要固著在海中巖石上或泥沙中。?？哂凶剃帀殃?yáng)、收斂止瀉、燥濕殺蟲等功效。對(duì)海葵化學(xué)成分的研究開始于20世紀(jì)70年代，海葵的觸手和身體中含有眾多的刺細(xì)胞，其中有儲(chǔ)存著毒液的細(xì)胞器一刺絲囊，當(dāng)?？龅轿锢砘蚧瘜W(xué)刺激時(shí)，刺絲會(huì)刺入獵物身體并釋放毒液而麻痹獵物，用于捕抓獵物或抵御敵害。但由于其含有多種生物活性物質(zhì)，近年來倍受學(xué)者們的關(guān)注，主要集中在?？窠?jīng)毒素、?？芗?xì)胞素及?？x子通道抑制劑等方面的研究。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)了?？芯哂锌鼓[瘤的活性物質(zhì)，如海葵毒素對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞具有凋亡誘導(dǎo)作用，通過增加Fas表達(dá)而誘導(dǎo)凋亡。?？痔嵛锿ㄟ^線粒體途徑激活Caspases和降低線粒體膜電位而誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡，海葵溶細(xì)胞毒素Gigantoxin-4具有殺傷乳腺癌MCF-7細(xì)胞和胰腺癌SW1991細(xì)胞的作用，比如StI，EqtII等對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞都具有較強(qiáng)的抑制作用，因其具有廣泛的生物學(xué)活性，成為海洋天然產(chǎn)物的研究熱點(diǎn)之一。舟山黃?？?AnthopLeuraxanthograrnmica)屬于海葵科，側(cè)花?？麑?，其體內(nèi)富含多種毒素分子，已得到了一種興奮性多肽毒素和多種具有強(qiáng)殺蟲活性及低哺乳動(dòng)物活性的殺蟲肽，是進(jìn)行海洋生物藥物開發(fā)的理想對(duì)象，但有關(guān)舟山黃海葵抗腫瘤作用的研究尚未見報(bào)導(dǎo)。
[0003]肺癌是嚴(yán)重威脅人類健康的一類疾病，在我國(guó)也有非常高的發(fā)病率，而尋找有效的抗癌藥物與方法，徹底攻克癌癥，是世界醫(yī)學(xué)界重要的研究課題。目前臨床現(xiàn)有的抗肺癌在發(fā)揮抗癌作用的同時(shí)，多有較大的毒副作用，因此研究和開發(fā)活性高、療效確切、毒副作用低的藥物成為抗肺癌藥物研究的關(guān)鍵問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種?？痔嵛锏闹苽浞椒ā?br>[0005]本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種上述?？痔嵛锏目鼓[癌應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:該?？痔嵛锏闹苽浞椒ǎ涮卣髟谟?包括以下步驟:
[0007]I)將飼養(yǎng)后的活?？诩兯星逑?，去除其表面雜質(zhì)，將洗凈后的?？胖糜跓屑尤爰兯?，?？c純水的料液比為1: 1.5?1:2于_60°C下進(jìn)行2?3次凍融；
[0008]2)將步驟I)中的?？?0°C?28°C下適當(dāng)解凍后進(jìn)行粗過濾；
[0009]3)取步驟2)中的濾液，于4°C?6°C、12000?14000r/min條件下離心10?15min，收集上清液得到?？侄疽?；
[0010]4)將步驟3)中的?？侄疽河?0%、60%、90%的丙酮進(jìn)行分級(jí)沉淀，并將每一步所得的沉淀物于4°C?6°C、12000?14000r/min條件下離心15min，將最終所得沉淀收集后冷凍干燥后，即得海葵粗毒，于_20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0011]進(jìn)一步地，所述的步驟I)中海葵與純水的料液比為1: 1.5。
[0012]進(jìn)一步地，所述的步驟4)中將丙酮于_20°C下進(jìn)行預(yù)冷。
[0013]雖然文獻(xiàn)報(bào)道?？芗?xì)胞毒素具有殺傷乳腺癌MCF-7細(xì)胞和胰腺癌SW1991細(xì)胞的作用，如stl，EqtII等對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞都具有較強(qiáng)的抑制作用，但由于肺癌與乳腺癌和胰腺癌為不同類型腫瘤，具有不同的適應(yīng)癥，因此，不能推之海葵粗毒也具有抑制肺癌的功效。
[0014]因此，本發(fā)明還提供一種利用?？痔嵛锏闹苽浞椒ㄖ苽涞暮？侄驹谥苽淇狗伟┧幬镏械膽?yīng)用。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):通過?？M(jìn)行反復(fù)凍融、丙酮分級(jí)沉淀的方法提取得到?？舅卮痔嵛?，同時(shí)采用冷凍干燥技術(shù)，能較好的保留?？械纳锘钚?，并經(jīng)過MTT法檢測(cè)顯示，?？舅卮痔嵛锞哂袕?qiáng)烈的體外抗腫瘤活性，可用于制備治療腫瘤藥物。
【附圖說明】
[0016]圖1海葵粗毒的濃度對(duì)SPC-Al細(xì)胞抑制率的影響；
[0017]圖2海葵粗毒的作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞增殖的影響；
[0018]圖3?？侄疽种品伟㏒PC-Al細(xì)胞生長(zhǎng)的顯微觀察圖，其中，A圖為對(duì)照，B圖中海葵毒素的濃度為0.625mg/mL, C圖中?？舅氐臐舛葹?.25mg/mL, D圖中?？舅氐臐舛葹?2.5mg/mL ；
[0019]圖4海葵粗毒抑制肺癌SPC-Al細(xì)胞生長(zhǎng)的HE染色圖，其中，A圖為對(duì)照，B圖中?？舅氐臐舛葹?.625mg/mL, C圖中?？舅氐臐舛葹?.25mg/mL, D圖中海葵毒素的濃度為 2.5mg/mL ；
[0020]圖5?？侄疽种品伟㏒PC-Al細(xì)胞生長(zhǎng)的Α0/ΕΒ熒光染色圖，其中，A圖為對(duì)照，B圖中海葵毒素的濃度為0.625mg/mL，C圖中?？舅氐臐舛葹?.25mg/mL，D圖中?？舅氐臐舛葹?.5mg/mL。
【具體實(shí)施方式】
[0021]以下通過結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0022]實(shí)施例1?？痔嵛锏闹苽?br>[0023]I)將飼養(yǎng)后的活?？诩兯星逑矗コ浔砻骐s質(zhì)，將洗凈后的海葵放置于燒杯，按物料比1: 1.5加入一定量的純水，并置于_60°C超低溫中冷凍過夜，次日取出20°C下自然解凍，待全部溶解后，再置于冰柜中冷凍，如此凍融步驟循環(huán)3次；
[0024]2)將步驟I)中紗布包裹全部融化的海葵于20°C下適當(dāng)解凍后進(jìn)行粗過濾，棄去?？w中的雜質(zhì)；
[0025]3)取其濾液，濾液在4°C、12000r/min條件下離心lOmin，收集上清液得到?？侄疽海?br>[0026]4)將步驟3)中的?？侄疽悍謩e加入_20°C預(yù)冷過的30%、60%、90%的丙酮分級(jí)沉淀，迅速用玻璃棒攪拌使迅速沉積，每一步所得的沉淀物在4°C、12000r/min離心15min。將最終所得沉淀收集后冷凍干燥即是所得海葵粗毒，于_20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0027]實(shí)施例2?？痔嵛锏闹苽?br>[0028]I)將飼養(yǎng)后的活海葵于純水中清洗，去除其表面雜質(zhì)，將洗凈后的?？胖糜跓次锪媳?:2加入一定量的純水，并置于_60°C超低溫中冷凍過夜，次日取出22°C下自然解凍，待全部溶解后，再置于冰柜中冷凍，如此凍融步驟循環(huán)2次；
[0029]2)將步驟I)中紗布包裹全部融化的?？?8°C下適當(dāng)解凍后進(jìn)行粗過濾，棄去?？w中的雜質(zhì)；
[0030]3)取其濾液，濾液在6°C、14000r/min條件下離心15min，收集上清液得到?？侄疽?；
[0031]4)將步驟3)中的?？侄疽悍謩e加入_20°C預(yù)冷過的30%、60%、90%的丙酮分級(jí)沉淀，迅速用玻璃棒攪拌使迅速沉積，每一步所得的沉淀物在6°C、14000r/min離心15min。將最終所得沉淀收集后冷凍干燥即是所得?？侄?，于_20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0032]實(shí)施例3?？痔嵛锏闹苽?br>[0033]I)將飼養(yǎng)后的活?？诩兯星逑?，去除其表面雜質(zhì)，將洗凈后的海葵放置于燒杯，按物料比1: 1.8加入一定量的純水，并置于_60°C超低溫中冷凍過夜，次日取出20°C下