含有透明質(zhì)酸的人工唾液的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及含有透明質(zhì)酸的人工唾液。
【背景技術(shù)】
[0002] 透明質(zhì)酸（HA)是由D-葡糖醛酸單位和N-乙酰-D-氨基葡萄糖單位交替組成的糖 胺聚糖。D-葡糖醛酸與N-乙酰-D-氨基葡萄糖通過(guò)0 (1 - 3)鍵連接，而N-乙酰-D-氨 基葡萄糖與D-葡糖醛酸通過(guò)0 (1 - 4)鍵連接。在眼睛的玻璃體液、關(guān)節(jié)的骨膜液以及細(xì) 胞外基質(zhì)中富含HA。由于它先天的生物相容性和獨(dú)特的物理性質(zhì)，HA已應(yīng)用于給藥、生物 相容性物質(zhì)的制備、干眼病患者的人工眼淚、以及用于緩解骨關(guān)節(jié)炎癥的物質(zhì)。
[0003] 據(jù)研究，在人唾液中存在HA，而且唾液中的HA能促進(jìn)唾液的潤(rùn)滑性能及治愈性能 并協(xié)助保護(hù)口腔粘膜。另?yè)?jù)研究，HA具有抗念珠菌活性。由于它的粘彈性和無(wú)免疫原性， HA已被認(rèn)為是代替口腔干燥患者唾液的候選物質(zhì)，并在某種濃度上表現(xiàn)出與人唾液類似的 物理性質(zhì)。
[0004] 已知唾液中的HA減少與口腔干燥的發(fā)病有關(guān)，這能證明HA能夠保護(hù)并潤(rùn)滑口腔 粘膜。此外，HA的傷口愈合活性和潛在抗念珠菌活性可進(jìn)一步有益于患有口干的、弱于口 腔粘膜損傷和念珠菌病的患者。
[0005] -直以來(lái)，人們?cè)噲D用市場(chǎng)上可見(jiàn)的口腔衛(wèi)生產(chǎn)品來(lái)強(qiáng)化及復(fù)原唾液的抗菌能 力。在口腔衛(wèi)生產(chǎn)品中使用最廣的抗菌蛋白質(zhì)包括溶菌酶（lysozyme)和乳過(guò)氧化物酶 (lactoperoxidase)。在唾液替代物中引入所述抗菌蛋白質(zhì)，以復(fù)原患有口干的、易受念珠 菌病侵害的患者的唾液抗菌能力。人們已了解溶菌酶的抗真菌活性和過(guò)氧化物酶的抗真菌 活性的系統(tǒng)。眾所周知，通過(guò)將溶菌酶與過(guò)氧化物酶一起使用來(lái)增強(qiáng)殺傷念珠菌的活性。還 未確定的是，將體外實(shí)驗(yàn)所得物以相同方法應(yīng)用到體內(nèi)環(huán)境中時(shí)，抗菌增補(bǔ)劑可能會(huì)減緩 口腔干燥患者體內(nèi)的念珠菌病的發(fā)展
[0006] 口腔能提供唾液替代物與唾液分子可共存的環(huán)境。因此，所述唾液替代 物HA分子也會(huì)與人唾液的抗菌分子相互作用。在現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)中已提到HA-溶菌 酉每復(fù)合物(Van Damme et al. Binding of Hyaluronan to Lysozyme at Various PHSA, Biochemistry International, 1991Jul, 24(4), 605-13 ；Van Damme et al. Binding Properties of Glycosaminoglyeans to Lysozyme-Effect of Salt and Molecular Weight,Archives of Biochemistry and Biophysics,1994April,310(1),16-24 ； Moss etal. Dependence of Salt Concentration on Glycosaminoglycan-Lysozyme Interactions in Cartilage, Archives of Biochemistry and Biophysics, 1997 December 1,348(1)，49-55)和 HA-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（Green et al. Depolymerization of Synovial Fluid Hyaluronic Acid(HA)by the Complete Myeloperoxidase(MP0) System May Involve the Formation of a HA-MP0 Ionic Complex, The Journal of Rheumatology，1990, 17:12, 1670-5)的存在。
[0007] 然而，尚不清楚HA對(duì)溶菌酶和過(guò)氧化物酶的抗念珠菌活性的影響及影響機(jī)理。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 摶術(shù)問(wèn)題
[0009] 由此，本發(fā)明的一個(gè)目的，在于提供含有透明質(zhì)酸（HA)的人工唾液。
[0010] 本發(fā)明的另一個(gè)目的，在于提供適用于人工唾液的HA濃度，以及作為抗菌添加劑 的溶菌酶和過(guò)氧化物的濃度。
[0011] 解決方案
[0012] 本發(fā)明提供含有0. 4~0. 6mg/ml HA的人工唾液，其特征在于，基于100重量份 HA，所述人工唾液包含溶菌酶10~12重量份、和過(guò)氧化物酶7~9重量份。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，在所述人工唾液中，基于人工唾液總量的溶菌酶濃度 可為50~60 y g/ml，或基于人工唾液總量的過(guò)氧化物酶濃度為36~43 y g/ml。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，所述HA的分子量可在lOOkDa~lOOOOKDa范圍內(nèi)， 但本發(fā)明不會(huì)特別限于此范圍。
[0015] 本發(fā)明的人工唾液可用于治療口腔干燥或口腔念珠菌病，而且還可以用于預(yù)防或 治療因唾液分泌減少所引起的并發(fā)癥。因此，本發(fā)明提供用于治療口腔干燥或口腔念珠菌 病的人工唾液，或者提供用于預(yù)防或治療因唾液分泌減少所引起的并發(fā)癥的人工唾液，其 中所述人工唾液含有HA。
[0016] 有益效果
[0017] 本發(fā)明的人工唾液可用于治療口腔干燥或口腔念珠菌病，而且由于所述人工唾液 在人唾液的生理范圍內(nèi)，并表現(xiàn)出足夠的抗菌活性，因而可有效地用于預(yù)防或治療因唾液 分泌減少所引起的并發(fā)癥。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1展示了 HA對(duì)白色念珠菌（C. albicans)ATCC10231生長(zhǎng)的抑制作用。
[0019] 圖2展示了 HA對(duì)白色念珠菌ATCC18804生長(zhǎng)的抑制作用。
[0020] 圖3展示了HA對(duì)白色念珠菌ATCC11006生長(zhǎng)的抑制作用。
[0021] 最佳實(shí)施方式
[0022] 下面，將結(jié)合實(shí)施例和對(duì)比實(shí)施例詳細(xì)地描述本發(fā)明。然而，本發(fā)明不限于這些實(shí) 施例。
[0023] 本發(fā)明提供含有0? 4~0? 6mg/ml透明質(zhì)酸（HA)的人工唾液，其特征在于，基于 100重量份HA，所述人工唾液含有溶菌酶10~12重量份；和過(guò)氧化物酶7~9重量份。
[0024] 在本發(fā)明中，由于所述HA在概念上同時(shí)包括HA和其鹽，在本發(fā)明中所用的術(shù)語(yǔ) "HA"指透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸鹽、或透明質(zhì)酸與透明質(zhì)酸鹽的混合物。所述透明質(zhì)酸鹽同時(shí)包 括如透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸鈣、透明質(zhì)酸鎂、透明質(zhì)酸鋅或透明質(zhì)酸鈷的無(wú)機(jī) 鹽、以及如四丁基透明質(zhì)酸銨的有機(jī)鹽。必要時(shí)，可使用它們的組合物。
[0025] 溶菌酶是能水解細(xì)菌細(xì)胞壁上的多糖中的N-乙酰胞壁酸（NAM)與N-乙酰葡糖胺 (NAG)之間的0-1，4-糖苷鍵的酶。通常，在雞蛋清、動(dòng)物組織、鼻粘膜、痰、胃液、眼淚等物 質(zhì)中含有所述溶菌酶，而且所述溶菌酶具有殺菌及抗菌活性。
[0026] 過(guò)氧化物酶是指能催化氧化反應(yīng)的酶，其使得單胺、多胺、單酚、多酚、無(wú)色顏料、 抗壞血酸、細(xì)胞色素C，HI等可用以下反應(yīng)式H202 (或CH300H) :H202+AH2- 2H 20+A表達(dá)。
[0027] 用與唾液成分類似的緩沖液（模擬唾液緩沖液）將HA制成濃度為0. 5mg/ml的溶 液，則其在流變學(xué)上是最合適的唾液替代物。此外，作為抗菌添加劑，溶菌酶的加入量（基 于1〇〇重量份HA)可以是10~12重量份，而過(guò)氧化物酶的加入量（基于100重量份HA) 可以是7~9重量份。此時(shí)，人工唾液在人唾液的生理范圍內(nèi)，并表現(xiàn)出足夠的抗菌活性。
[0028] 在本發(fā)明中，所述術(shù)語(yǔ)"重量份"是指重量比。
[0029] 當(dāng)抗菌添加劑溶菌酶的量少于基于100重量份HA的10重量份，或過(guò)氧化物酶的 量少于基于100重量份HA的7重量份時(shí)，所述人工唾液的抗真菌活性可能會(huì)不足。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述人工唾液中的溶菌酶的濃度可以為基于人工唾液 總量的50~60 y g/ml，或所述人工唾液中的過(guò)氧化物酶的濃度可以為基于人工唾液總量 的 36 ~43 y g/ml。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，所述HA的分子量可在100~10, OOOkDa范圍內(nèi)，但 本發(fā)明不會(huì)特別限制于此。
[0032] 本發(fā)明的人工唾液可以用來(lái)治療口腔干燥或口腔念珠菌病，而且可以用來(lái)預(yù)防或 治療由唾液減少而引起的并發(fā)癥。因此，本發(fā)明提供用于治療由口腔干燥或口腔念珠菌病 的人工唾液，還提供用于預(yù)防或治療由唾液減少而引起的并發(fā)癥的人工唾液，其中該人工 唾液包含HA。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 為能更好地理解，下面將進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明的示例性實(shí)施例。然而，這里提 出的描述僅以說(shuō)明優(yōu)選實(shí)施例為目的，不會(huì)限制本發(fā)明的范圍，從而應(yīng)當(dāng)理解成，在不超出 本發(fā)明的范圍內(nèi)可作出其他等同物和修飾物。
[0034] 設(shè)計(jì)下面的制備實(shí)施例以提供常用于本發(fā)明實(shí)施例的制備實(shí)施例。
[0035] 制備實(shí)施例1:HA溶液
[0036]將 HA(1, 630kDa，Sigma-Aldrich，St Louis, MO,