施例中，一個(gè)目標(biāo)值是一種參考糖蛋白 產(chǎn)品中一種或多種特定聚糖如高甘露糖聚糖（例如，冊(cè)3、圓4、冊(cè)5、圓6、冊(cè)7、圓8、圓9或組 合）、巖藻糖基化聚糖（例如，GOF、GIF、G2F或組合）、和/或唾液酸化聚糖（例如，單唾液 酸化、二唾液酸化或組合）或一種藥物產(chǎn)品的規(guī)格或主生產(chǎn)批記錄中描述的一個(gè)水平。 在一些實(shí)施例中，一個(gè)目標(biāo)值指代一種糖蛋白制劑中的一種或多種聚糖（例如，高甘 露糖聚糖（例如，高甘露糖聚糖的一個(gè)或多個(gè)種類）、巖藻糖基化聚糖（例如，巖藻糖基化 聚糖的一個(gè)或多個(gè)種類）、和/或唾液酸化聚糖（例如，唾液酸化聚糖的一個(gè)或多個(gè)種類）） 的絕對(duì)水平（例如，摩爾數(shù)）。在一些實(shí)施例中，一個(gè)目標(biāo)值指代一種糖蛋白制劑中的一種 或多種聚糖（例如，高甘露糖聚糖（例如，高甘露糖聚糖的一個(gè)或多個(gè)種類）、巖藻糖基化聚 糖（例如，巖藻糖基化聚糖的一個(gè)或多個(gè)種類）、和/或唾液酸化聚糖（例如，唾液酸化聚 糖的一個(gè)或多個(gè)種類））相對(duì)于該糖蛋白制劑中的總聚糖水平的一個(gè)水平。在一些實(shí)施例 中，一個(gè)目標(biāo)值被表達(dá)為"百分比"，它指代一種糖蛋白制劑中的一種或多種聚糖（例如，F(xiàn)c 聚糖）的摩爾數(shù)對(duì)比聚糖（例如，F(xiàn)c聚糖）的總摩爾數(shù)。在一些實(shí)施例中，"百分比"指代 一種或多種N-糖酰胺酶F釋放的Fc聚糖的摩爾數(shù)對(duì)比所檢測(cè)的N-糖酰胺酶F釋放的Fc 聚糖的總摩爾數(shù)。 細(xì)胞 可以用來表達(dá)一種感興趣的多肽（例如，一種抗體）的任何宿主細(xì)胞都可以用于在此 所述的方法。細(xì)胞可以被基因工程化來含有編碼一種感興趣的多肽（例如，一種抗體）的 一種重組核酸序列例如一種基因。例如，有用的細(xì)胞可以表達(dá)重一種組多肽。編碼一種多 肽的一種基因的重組表達(dá)可以包括構(gòu)建含有編碼該多肽的一種多核苷酸的一個(gè)表達(dá)載體。 一旦獲得一種多核苷酸，就可以通過重組DNA技術(shù)使用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)來產(chǎn)生用于產(chǎn) 生該多肽的一個(gè)載體。已知方法可以用來構(gòu)建含有多肽編碼序列以及適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄和翻譯控 制信號(hào)的表達(dá)載體。這些方法包括例如體外重組DNA技術(shù)、合成技術(shù)、以及體內(nèi)基因重組。 一種表達(dá)載體可以通過常規(guī)技術(shù)轉(zhuǎn)移到一種宿主細(xì)胞中，并且轉(zhuǎn)染細(xì)胞然后可以通過 常規(guī)技術(shù)進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)本披露進(jìn)行修飾，以產(chǎn)生一種重組多肽。可以使用多種宿主表達(dá)載 體系統(tǒng)（參見，例如美國(guó)專利號(hào)5, 807, 715)。此類宿主表達(dá)系統(tǒng)（例如，基因工程化的宿主 表達(dá)系統(tǒng)）可以用來產(chǎn)生多肽（例如，抗體）并且隨后根據(jù)需要進(jìn)行純化。此類宿主表達(dá) 系統(tǒng)包括但不限于：用含有多肽編碼序列的重組酵母表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的酵母（例如，酵母菌 屬和畢赤酵母屬）；用含有多肽編碼序列的重組病毒表達(dá)載體（例如，桿狀病毒）轉(zhuǎn)染的昆 蟲細(xì)胞系統(tǒng)；用重組病毒表達(dá)載體（例如，花椰菜花葉病毒，CaMV ;煙草花葉病毒，TMV)轉(zhuǎn)染 或用含有多肽編碼序列的重組質(zhì)粒表達(dá)載體（例如，Ti質(zhì)粒）轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞系統(tǒng)；或擁 有重組表達(dá)構(gòu)建體的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)（例如，C0S、CH0、BHK、293、NS0以及3T3細(xì)胞），這 些重組表達(dá)構(gòu)建體含有來自哺乳動(dòng)物細(xì)胞的基因組（例如，金屬硫蛋白啟動(dòng)子）或哺乳動(dòng) 物病毒（例如，腺病毒晚期啟動(dòng)子；痘苗病毒7. 5K啟動(dòng)子）的啟動(dòng)子。 對(duì)于哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中的表達(dá)，可以利用基于病毒的表達(dá)系統(tǒng)（參見，例如，洛根 (Logan)等人，1984,美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc. Natl. Acad. Sci.USA)8:355-359)。表達(dá) 的效率可以通過包括適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄增強(qiáng)子元件、轉(zhuǎn)錄終止子等來增強(qiáng)（參見，例如，比特納 (Bittner)等人，1987,酉每學(xué)方法（Methodsin Enzymol.) 153:516-544) 〇 此外，可以選擇調(diào)節(jié)插入序列的表達(dá)，或以所希望的特定方式修飾和加工基因產(chǎn)物的 一種宿主細(xì)胞株。不同的宿主細(xì)胞具有特征性的且特定的對(duì)蛋白質(zhì)和基因產(chǎn)物進(jìn)行翻譯 后加工和修飾的機(jī)制?？梢赃x擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞系或宿主系統(tǒng)以確保所表達(dá)的多肽（例如，抗 體）的正確修飾和加工。此類細(xì)胞包括例如已建立的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系和昆蟲細(xì)胞系、動(dòng)物 細(xì)胞、真菌細(xì)胞、以及酵母細(xì)胞。哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括但不限于CHO、Vero、BHK、HeLa、 COS、MDCK、HEK-293、NIH-3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20、T47D、NSO(不內(nèi)源性地產(chǎn) 生任何免疫球蛋白鏈的鼠骨髓瘤細(xì)胞系）、CRL7030、HsS78Bst細(xì)胞、PER. C6、SP2/0-Agl4、 以及雜交瘤細(xì)胞。此外，動(dòng)物或哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞的非限制性實(shí)例包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì) 胞（CH0)如CH0-K1(ATCC CCL-61)、DG44(蔡辛（Chasin)等人，1986,索姆細(xì)朐分子遺 傳學(xué)（Som. Cell Molec. Genet.),12:555-556 :和寇克卡(Kolkekar)等人，1997,牛物化 學(xué)（Biochem.),36:10901-10909)、CH0-DXB11 (G ?烏爾勞布（G. Urlaub)和 L ? A ?蔡辛 (L. A. Chasin), 1980,美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，77:4216-4220, L ? H ?格拉芙（L. H. Graf)和 L ? A ?蔡辛，1982,分子細(xì)胞生物學(xué)（Molec. Cell. Biol.)，2:93-96)、CHO-KITet-On 細(xì)胞系 (克隆技術(shù)公司（Clontech))、CHO 指定 ECACC 85050302(CAMR，塞爾斯貝里（Salisbury)，威 爾特郡（Wiltshire)，英國(guó)）、CH0克隆13 (GE頂G，熱那亞（Genova)，意大利（IT))、CH0克隆 B (GE頂G，熱那亞，意大利）、CH0-K1/SF指定ECACC 93061607 (CAMR，塞爾斯貝里，威爾特郡， 英國(guó)）、RR-CH0K1指定ECACC 92052129(CAMR，，塞爾斯貝里，威爾特郡，英國(guó)）、CH0Klsv (埃 德蒙（Edmonds)等人，分子生物技術(shù)（Mol. Biotech. )，34:179-190(2006))、CH0-S(皮希 勒（Pichler)等人，生物技術(shù)和生物工程（Biotechnol.Bioeng.)，108:386-94(2011))、二 氫葉酸還原酶陰性CH0細(xì)胞（CH0/-DHFR，烏爾勞布和蔡辛，1980，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊, 77:4216)以及dpl2. CH0細(xì)胞（美國(guó)專利號(hào)5, 721，121);通過SV40轉(zhuǎn)化的猴腎CV1細(xì)胞 (COS細(xì)胞，C0S-7，ATCC CRL-1651);人胚胎腎細(xì)胞（例如，293細(xì)胞，或亞克隆用于在懸浮培 養(yǎng)物中生長(zhǎng)的293細(xì)胞，格拉漢姆（Graham)等人，1977,某閔病毒學(xué)雜志（T. Gen. Virol.), 36:59);幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞（BHK，ATCC CCL-10);猴腎細(xì)胞（CV1，ATCC CCL-70);非洲綠猴腎細(xì) 胞（VERO-76, ATCC CRL-1587 ;VER0, ATCC CCL-81);小鼠支持細(xì)胞（TM4,馬瑟（Mather)， 1980,繁葙牛物學(xué)（Biol. Reorod.),23:243-251);人宮頸癌細(xì)胞（HELA，ATCC CCL-2);犬 腎細(xì)胞（MDCK，ATCC CCL-34);人肺細(xì)胞（W138, ATCC CCL-75);人肝癌細(xì)胞（HEP-G2, HB 8065);小鼠乳腺瘤細(xì)胞（MMT 060562, ATCC CCL-51);布法羅大鼠（buffalo rat)肝細(xì)胞 (BRL 3A，ATCC CRL-1442) ;TR1 細(xì)胞(馬瑟，1982,紐約科學(xué)學(xué)院年鑒（Ann. NYAcad. Sci.), 383:44-68) ;MCR 5 細(xì)胞；以及 FS4 細(xì)胞。 對(duì)于長(zhǎng)期的高產(chǎn)率的重組蛋白的生產(chǎn)，可以將宿主細(xì)胞工程化來穩(wěn)定地表達(dá)一種多肽 (例如，抗體）。宿主細(xì)胞可以使用受本領(lǐng)域中已知的適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)控制元件控制的DNA來轉(zhuǎn) 化，這些表達(dá)控制元件包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、序列、轉(zhuǎn)錄終止子、聚腺苷酸化位點(diǎn)、以及可選 擇性標(biāo)記。重組DNA技術(shù)領(lǐng)域普遍已知的方法可以用來選擇一種所希望的重組克隆。在一 些實(shí)施例中，一種細(xì)胞被基因工程化來提高一種內(nèi)源多肽的表達(dá)水平，例如通過增加編碼 多肽的一種基因的轉(zhuǎn)錄和/或提高mRNA穩(wěn)定性。在一些實(shí)施例中，編碼一種多肽的一種基 因的轉(zhuǎn)錄通過以下各項(xiàng)來增加：例如在體細(xì)胞中例如通過添加一個(gè)正調(diào)節(jié)元件如作為一種 轉(zhuǎn)錄激活劑的增強(qiáng)子或DNA結(jié)合位點(diǎn)來改變內(nèi)源基因的調(diào)節(jié)序列；缺失一個(gè)負(fù)調(diào)節(jié)元件， 如作為一種轉(zhuǎn)錄阻抑物的DNA結(jié)合位點(diǎn)；和/或用另一基因替換內(nèi)源調(diào)節(jié)序列或其中的元 件，從而允許該基因的編碼區(qū)更有效地轉(zhuǎn)錄。 一旦通過重組表達(dá)產(chǎn)生在此所述的一種多肽（例如，在此所述的一種抗體），可以通 過本領(lǐng)域中已知用于純化的任何方法來純化，例如通過色譜法（例如，離子交換、親和、以 及篩柱色譜）、離心分離、差別性溶解度、或通過任何其他用于蛋白質(zhì)純化的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。例 如，一種抗體可以通過適當(dāng)?shù)剡x擇并將親和柱如蛋白質(zhì)A柱與色譜柱，過濾、超濾、鹽析以 及透析程序進(jìn)行組合來分離和純化(參見，抗體：實(shí)騎室手冊(cè)（Antibodies:A Laboratory Manual),艾德哈洛(Ed Harlow)，大衛(wèi)萊恩（David Lane)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室（Cold Spring Harbor Laboratory)，1988)。另外，如在此所述，可以將一種多肽（例如，一種抗體）融合 至異源多肽序列以促進(jìn)純化?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域中已知的方法使用凝集素柱分離具有所希望 的糖鏈的多肽（參見，例如，W0 02/30954)。 根據(jù)本披露，可以采用本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的常規(guī)分子生物、微生物、以及重組DNA技 術(shù)。此類技術(shù)被描述于文獻(xiàn)（參見，例如，薩姆布魯克（Sambrook)、費(fèi)里奇（Fritsch)和馬尼 亞蒂其if (Maniatis),分子克降：實(shí)騎室手冊(cè)（MolecularCloning: A Laboratory Manual), 第二版，（1989)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社，冷泉港，紐約:DNA克降：實(shí)用方法（DNA Cloning:A Practical Approach),卷 I 和卷 II (D *N ?格洛維爾（D. N. Glover)編輯 1985);寡核苷酸合 成（Oligonucleotide Synthesis) (M .J ?蓋特（M. J. Gait)編輯 1984):核酸雜交（Nucleic Acid Hybridization) (B ? D ?黑姆絲（B. D. Hames)和 S ? J ?希金斯（S. J. Higgins)編輯 (1985)):車?錄和番羽譯（Transcription AndTranslation) (B ? D ?黑姆絲和 S ? J ?希金其if 編輯（1984)):動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（Animal Cell Culture)(R ? I ?弗萊士?jī)?nèi)（R. I. Freshney) 編輯（1986)):固定化細(xì)胞和酶（Tmmobi lized Cells and Enzymes)(IRL 出版社（1986)); B ?佩巴爾（B. Perbal),分子克降的實(shí)用指南（A PracticalGuide To Molecular Cloning) (1984) ;F ? M ?奧蘇貝爾（F. M. Ausubel)等人(編輯），現(xiàn)代分子牛物學(xué)實(shí)騎技術(shù)（Current Protocols in Molecular Biology)，約翰威利父子出版社(John ffiley&Sons, Inc.) (1994)。 培養(yǎng)方法
[0001] -般而言，具有目標(biāo)水平聚糖（例如，高甘露糖聚糖、巖藻糖基化聚糖和/或唾 液酸化聚糖）的多肽（例如，抗體）可以通過在培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞來生產(chǎn)，該培養(yǎng)基含有 DMS0,例如一個(gè)特定的有效水平的DMS0(例如，在一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)階段期間）。 在一些實(shí)施例中，（例如，在一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)階段）在包括DMS0例如一個(gè)升高水平的 DMS0的一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)基因工程化來表達(dá)一種多肽的細(xì)胞，以降低由細(xì)胞表達(dá)的多肽的 一種制劑中的G0F聚糖和/或巖藻糖基化聚糖的水平。在一些實(shí)施例中，G0F聚糖和/或 巖藻糖基化聚糖的水平相對(duì)于使用不包括DMS0,例如一個(gè)升高水平的DMS0的相同培養(yǎng)基 產(chǎn)生的多肽的一種制劑中的一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)水平而言是降低的。在一些實(shí)施例中，G0F聚 糖和/或巖藻糖基化聚糖的該降低的水平比該一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)水平低該相應(yīng)水平的至少 約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%。 在一些實(shí)施例中，（例如，在一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)階段）在包括DMS0例如一個(gè)升高水平的 DMS0的一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)基因工程化來表達(dá)一種多肽的細(xì)胞，以提高由細(xì)胞表達(dá)的多肽的 一種制劑中的高甘露糖聚糖、巖藻糖基化聚糖和/或唾液酸化聚糖的水平。在一些實(shí)施例 中，高甘露糖聚糖、巖藻糖基化聚糖和/或唾液酸化聚糖的水平相對(duì)于使用不包括DMS0,例 如一個(gè)升高水平的DMS0的相同培養(yǎng)基產(chǎn)生的多肽的一種制劑中的一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)水平而 言是提高的。在一些實(shí)施例中，高甘露糖聚糖、巖藻糖基化聚糖和/或唾液酸化聚糖的該 提高的水平比該一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)水平高該相應(yīng)水平的至少約10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%、70%、80%、90%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500% 或更 多。 在一些實(shí)施例中，（例如，在一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)階段）在包括一個(gè)降低水平的DMS0,例如 不包括DMS0的一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)基因工程化來表達(dá)一種多肽的細(xì)胞，以提高由細(xì)胞表達(dá) 的多肽的一種制劑中的G0F聚糖和/或巖藻糖基化聚糖的水平。在一些實(shí)施例中，G0F聚糖 和/或巖藻糖基化聚糖的水平相對(duì)于使用不包括一個(gè)降低水平的DMS0的相同培養(yǎng)基產(chǎn)生 的多肽的一種制劑中的一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)水平而言是提高的。在一些實(shí)施例中，G0F聚糖和/ 或巖藻糖基化聚糖的該提高的水平比該一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)水平高該相應(yīng)水平的至少約10%、 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、 400%、450%、500% 或更多。 在一些實(shí)施例中，（例如，在一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)階段）在包括一個(gè)降低水平的DMSO,例如 不包括DMSO的一種培養(yǎng)基中培養(yǎng)基因工程化來表達(dá)一種多肽的細(xì)胞，以降低由細(xì)胞表達(dá) 的多肽的一種制劑中的高甘露糖聚糖、巖藻糖基化聚糖和/或唾液酸化聚糖的水平。在一 些實(shí)施例中，高甘露糖聚糖、巖藻糖基化聚糖和/或唾液酸化聚糖的水平相對(duì)于使用不包 括一個(gè)降低水平的DMSO的相同培養(yǎng)基產(chǎn)生的多肽的制劑中的一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)水平而言是 降低的。在一些實(shí)施例中，高甘露糖聚糖、巖藻糖基化聚糖和/或唾液酸化聚糖的該降低的 水平比該一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)水平低該相應(yīng)水平的至少約10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、 70%、80%、90%、95%或100%。 如在此所使用，"升高水平的DMSO"意指標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基、起始培養(yǎng)基、一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)階段 使用的培養(yǎng)基、和/或其中產(chǎn)生多肽的培養(yǎng)基中存在的較高濃度的DMSO。在一些實(shí)施例中， DMSO不存在于標(biāo)準(zhǔn)和/或起始培養(yǎng)基、一個(gè)或多個(gè)其他培養(yǎng)階段使用的培養(yǎng)基、和/或其中 產(chǎn)生一種多肽的培養(yǎng)基中，并且"升高水平"是DMSO的任何量。一種培養(yǎng)基最初可以包括 一個(gè)升高水平的DMSO ( 即，在培養(yǎng)的起始），和/或培養(yǎng)基可以補(bǔ)充有DMSO以在培養(yǎng)過程中 的具體的一個(gè)時(shí)間或多個(gè)時(shí)間（例如，在一個(gè)或多個(gè)階段）實(shí)現(xiàn)DMSO的一個(gè)升高的水平。 在一些實(shí)施例中，DMSO的一個(gè)升高的水平是相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基、起始培養(yǎng)基、一個(gè)或 多個(gè)培養(yǎng)階段期間的培養(yǎng)基、和/或其中產(chǎn)生一種多肽的培養(yǎng)基中的DMSO的水平而言提 高至少約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、150%、200%、250%、 300 %、350 %、400 %、450 %、500 %、550 %、600 %、650 %、700 %、750 %、800 %、850 %、 900 %、950 %、1000 % 或更多。 在一些實(shí)施例中，DMSO的一個(gè)升高的水平是相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基、起始培養(yǎng)基、一個(gè)或多 個(gè)培養(yǎng)階段期間的培養(yǎng)基、和/或其中產(chǎn)生一種多肽的培養(yǎng)基中的DMSO的水平（v/v)而 言提高至少約 〇? l%、〇. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5%、0. 6%、0. 7%、0. 8%、0. 9%、1%、1. 1%、 1. 2%、1. 3%、1. 4%、1. 5%、1. 6%、1. 7%、1. 8%、1. 9%、2%、2. 1%、2. 2%、2. 3%、2. 4%、 2. 5%、2. 6%、2. 7%、2. 8%、2. 9%、3%、3. 1%、3. 2%、3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、 3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、4. 5%、4. 6%、4. 7%、4. 8%、4. 9%、5%或更 多（v/v)的 DMSO 的 DMSO 的水平（v/v)。 在一些實(shí)施例中，DMSO的一個(gè)升高的水平是約0? 1%、0. 2%、0. 3%、0.4%、0. 5%、 0. 6%,0.7%,0.8%,0.9%A%A.1%A.2%A.3%A.4%A.5%A.6%A.7%A.8%, 1. 9 %、2 %、2. 1 %、2. 2 %、2. 3 %、2. 4 %、2. 5 %、2. 6 %、2. 7 %、2. 8 %、2. 9 %、3 %、3. 1 %、 3. 2%、3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、 4. 5%、4. 6%、4. 7%、4. 8%、4. 9%、5%或更多（v/v)的DMSO。在一些實(shí)施例中，DMSO 的一個(gè) 升高的水平是約〇. 1 %至5 %的DMSO、約0. 1 %至約2 %的DMSO、約0. 1 %至約1 %的DMSO、 約0. 5%至約1%的DMSO、約1%至約1. 5%的DMSO、約0. 5%至約1. 5%的DMSO、約0. 6% 至約1. 4%的DMSO、約0. 7%至約1. 3%的DMSO、約0. 8%至約1. 2%的DMSO、約0. 9%至約 1. 1 %的DMSO、約1 %至約2 %的DMSO、約2 %至約3 %的DMSO、約3 %至約4 %的DMSO、約 4 %至約5 %的DMSO、約0. 1 %至約2. 5 %的DMSO、約2. 5 %至約5 %的DMSO、約0. 1 %至約 2 %的DMSO、約0. 1 %至約3 %的DMSO、約0. 1 %至約4%的DMSO、約1 %至約5 %的DMSO、約 2 %至約5 %的DMS0、或約3 %至約5 %的DMS0。 如在此所使用，"降低水平的DMS0"意指標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基、起始培養(yǎng)基、一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)階段 使用的培養(yǎng)基、和/或其中產(chǎn)生一種多肽的培養(yǎng)基中存在的降低濃度的DMS0。一種培養(yǎng)基 最初可以包括一個(gè)降低水平的DMS0( 即，在培養(yǎng)的起始），培養(yǎng)基可以在培養(yǎng)過程中的具體 的一個(gè)時(shí)間或多個(gè)時(shí)間（例如，在一個(gè)或多個(gè)階段）進(jìn)行稀釋，以降低DMS0的水平，和/或 一種培養(yǎng)基可以在培養(yǎng)過程中的具體的一個(gè)時(shí)間或多個(gè)時(shí)間（例如，在一個(gè)或多個(gè)階段） 使用具有一個(gè)降低水平的DMS0的一種培養(yǎng)基進(jìn)行替換。在一些實(shí)施例中，一個(gè)降低水平的 DMS0是培養(yǎng)基中的0% (v/v)的DMS0或不可檢測(cè)水平的DMS0。 在一些實(shí)施例中，DMS0的一個(gè)降低的水平是相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基、起始培養(yǎng)基、一個(gè)或多 個(gè)培養(yǎng)階段期間的培養(yǎng)基、和/或其中產(chǎn)生一種多肽的培養(yǎng)基中的DMS0的水平而言降低至 少約 10%、20%、30%