癥或者由自閉癥或脆性X染色體綜合癥引起的多動(dòng) 性行為。
[0052] (3)他莫昔芬矯正Fmrl基因敲除小鼠的重復(fù)性行為
[0053] 基本機(jī)理：重復(fù)性行為是自閉癥及脆性X染色體綜合癥患者的典型臨床癥狀之 一，F(xiàn)mrl基因敲除小鼠亦表現(xiàn)顯著的重復(fù)性行為。如果他莫昔芬能矯正Fmrl基因敲除小 鼠的的重復(fù)性行為，則表明他莫昔芬具有治療自閉癥和脆性X染色體綜合癥中重復(fù)性行為 的藥效。
[0054] 試驗(yàn)方法：測(cè)試小鼠在亮-暗箱之間的穿梭行為。野生型（WT)或Fmrl基因敲除 小鼠首先腹腔注射溶劑（VC，百分之二酒精）或他莫昔芬（TMF，檸檬酸鹽），注射量為1毫克 /每千克小鼠體重。注射12小時(shí)后將小鼠置于亮-暗箱中（亮箱、暗箱均為20cm長(zhǎng)，20cm寬，20cm高，亮箱有照明，亮箱與暗箱之間有5cm寬和5cm高的開(kāi)口，可供小鼠在亮箱與暗箱 之間穿梭），測(cè)量小鼠在亮-暗箱之間的穿梭次數(shù)以及在亮箱中的停留時(shí)間，測(cè)量時(shí)間為10 分鐘。比較小鼠在前5分鐘（見(jiàn)圖3中A)和整個(gè)10分鐘的行為數(shù)據(jù)（見(jiàn)圖3中B)。
[0055] 試驗(yàn)結(jié)果：Fmrl基因敲除小鼠在亮-暗箱之間的穿梭次數(shù)更多，表現(xiàn)出明顯的重 復(fù)性行為，而注射他莫昔芬的Fmrl基因敲除小鼠的重復(fù)性行為得到明顯改善（見(jiàn)圖3中 A1、B1)。Fmrl基因敲除小鼠和正常小鼠在亮箱中的停留時(shí)間沒(méi)有明顯差異（見(jiàn)圖3中A2、 B2)。表明他莫昔芬可用于矯正重復(fù)性行為或者由自閉癥或脆性X染色體綜合癥引起的重 復(fù)性行為。
[0056] (4)他莫昔芬矯正Fmrl基因敲除小鼠的被動(dòng)逃避記憶能力
[0057] 基本機(jī)理：智力障礙是自閉癥及脆性X染色體綜合癥患者的典型臨床癥狀之一。 被動(dòng)逃避記憶和學(xué)習(xí)行為是在動(dòng)物模型中常用的對(duì)智力測(cè)試的方法。如果他莫昔芬能矯正 Fmrl基因敲除小鼠的的被動(dòng)逃避記憶缺陷，則表明他莫昔芬具有治療自閉癥和脆性X染色 體綜合癥中智力障礙的藥效。
[0058] 試驗(yàn)方法：野生型（WT)或Fmrl基因敲除小鼠首先腹腔注射溶劑（VC，百分之二酒 精）或他莫昔芬（TMF，梓檬酸鹽），注射量為1毫克/每千克小鼠體重。注射12小時(shí)后將小 鼠置于被動(dòng)逃避學(xué)習(xí)訓(xùn)練箱的亮箱一側(cè)（亮箱、暗箱均為20cm長(zhǎng)，20cm寬，20cm高，亮箱有 照明，亮箱與暗箱之間有5cm寬和5cm高的開(kāi)口，可供小鼠在亮箱與暗箱之間穿梭）。當(dāng)小 鼠進(jìn)入暗箱后，連接亮暗箱之間的門(mén)被關(guān)閉，同時(shí)給予電擊刺激（0. 7毫安培，2秒鐘刺激）， 30秒后轉(zhuǎn)移小鼠返回至飼養(yǎng)籠。24小時(shí)后進(jìn)行記憶性測(cè)試。測(cè)試時(shí)，先將小鼠置于在亮箱 一側(cè)，如果小鼠記住暗箱一側(cè)有危險(xiǎn)（電刺激），則小鼠會(huì)持續(xù)停留在亮箱一側(cè)，進(jìn)入暗箱 的時(shí)間將延長(zhǎng)。小鼠在進(jìn)入暗箱之前在亮箱中的停留時(shí)間作為測(cè)量小鼠學(xué)習(xí)和記憶力的參 數(shù)。
[0059] 試驗(yàn)結(jié)果：如圖4所示，四組小鼠在學(xué)習(xí)訓(xùn)練（Train)時(shí)都很快進(jìn)入暗箱一側(cè)。在 測(cè)試學(xué)習(xí)效果和記憶時(shí)（Test)，與野生型小鼠相比，溶劑注射Fmrl基因敲除小鼠很快就進(jìn) 入暗箱一側(cè)，表明Fmrl基因敲除小鼠的被動(dòng)逃避記憶能力顯著減弱。他莫昔芬注射Fmrl基 因敲除小鼠的被動(dòng)逃避記憶能力與野生型小鼠基本一致，說(shuō)明他莫昔芬能夠提高Fmrl型 小鼠的被動(dòng)逃避學(xué)習(xí)和記憶能力，他莫昔芬可用于矯正被動(dòng)逃避記憶能力下降或者由自閉 癥或脆性X染色體綜合癥引起的被動(dòng)逃避記憶能力下降。
[0060] 5、他莫西芬矯正Fmrl基因敲除小鼠的場(chǎng)景恐懼記憶能力
[0061] 基本機(jī)理：智力障礙是自閉癥及脆性X染色體綜合癥患者的典型臨床癥狀之一。 場(chǎng)景恐懼學(xué)習(xí)和記憶是在動(dòng)物模型中常用的對(duì)智力測(cè)試的方法。如果他莫昔芬能矯正Fmrl 基因敲除小鼠的場(chǎng)景恐懼記憶缺陷，則表明他莫昔芬具有治療自閉癥和脆性X染色體綜合 癥中智力障礙的藥效。
[0062] 試驗(yàn)方法：野生型（WT)或Fmrl基因敲除小鼠首先腹腔注射溶劑（VC，百分之二酒 精）或他莫昔芬（TMF，檸檬酸鹽），注射量為1毫克/每千克小鼠體重。注射12小時(shí)后測(cè) 試對(duì)各組小鼠的場(chǎng)景恐懼記憶能力。在接受場(chǎng)景恐懼學(xué)習(xí)訓(xùn)練時(shí)，先將小鼠置于場(chǎng)景恐懼 訓(xùn)練箱中（40cm長(zhǎng)，40cm寬，40cm高），2分鐘后，對(duì)小鼠進(jìn)行電刺激（0. 7毫安培，2秒鐘刺 激），60秒后將小鼠轉(zhuǎn)移至飼養(yǎng)籠中，24小時(shí)后進(jìn)行記憶性測(cè)試。測(cè)試時(shí)先將小鼠置于場(chǎng)景 恐懼訓(xùn)練箱中，如果小鼠學(xué)習(xí)并記住在這一場(chǎng)景中曾遭受過(guò)電擊，則會(huì)表現(xiàn)出恐懼行為，即 僵直行為，并伴隨運(yùn)動(dòng)減少。
[0063] 試驗(yàn)結(jié)果：如圖5所示，四組小鼠在學(xué)習(xí)訓(xùn)練（Train)時(shí)均表現(xiàn)出相似的運(yùn)動(dòng)參 數(shù)。在測(cè)試學(xué)習(xí)效果和記憶時(shí)（Test)，與野生型小鼠相比，溶劑注射Fmrl基因敲除小鼠表 現(xiàn)出較多的運(yùn)動(dòng)行為（圖5中A)和較少的僵直行為（圖5中B)，表明Fmrl基因敲除小鼠 的場(chǎng)景恐懼記憶能力顯著減弱。他莫昔芬注射Fmrl基因敲除小鼠的場(chǎng)景恐懼記憶能力與 野生型小鼠基本一致，說(shuō)明他莫昔芬能夠提高Fmrl型小鼠的場(chǎng)景恐懼記學(xué)習(xí)和記憶能力。 他莫昔芬可用于矯正場(chǎng)景恐懼記憶能力下降或者由自閉癥或脆性X染色體綜合癥引起的 場(chǎng)景恐懼記憶能力下降，表明他莫昔芬可用于治療由自閉癥或脆性X染色體綜合癥引起的 智力障礙，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 他莫昔芬的用途，其特征在于：他莫昔芬或其藥學(xué)上可接受的鹽、脂、溶劑化物，亦 或在體內(nèi)代謝為4-羥基-他莫昔芬、N-去甲基他莫昔芬的化合物在制備用于防治自閉癥、 脆性X染色體綜合征及其相關(guān)癥狀的藥物方面的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：他莫昔芬或其藥學(xué)上可接受的鹽、脂、溶 劑化物，亦或在體內(nèi)代謝為4-羥基-他莫昔芬、N-去甲基他莫昔芬的化合物在制備用于抑 制mGluRl/5和Gq-mAChR受體活性或者由mGluRl/5和Gq-mAChR受體激活引起的胞內(nèi)信號(hào) 傳導(dǎo)的藥物中的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：他莫昔芬或其藥學(xué)上可接受的鹽、脂、溶 劑化物，亦或在體內(nèi)代謝為4-羥基-他莫昔芬、N-去甲基他莫昔芬的化合物在制備用于矯 正多動(dòng)性行為、重復(fù)性行為的藥物中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：他莫昔芬或其藥學(xué)上可接受的鹽、脂、溶 劑化物，亦或在體內(nèi)代謝為4-羥基-他莫昔芬、N-去甲基他莫昔芬的化合物在制備用于矯 正智力障礙或?qū)W習(xí)、記憶能力下降的藥物中的應(yīng)用。5. 根據(jù)權(quán)利要求1~4中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于：他莫昔芬藥學(xué)上可接受的 鹽為枸櫞酸他莫昔芬、檸檬酸他莫昔芬。6. 用于防治自閉癥、脆性X染色體綜合征及其相關(guān)癥狀的藥物組合物，其特征在于：藥 物組合物中含有藥學(xué)有效量的他莫昔芬或其藥學(xué)上可接受的鹽、脂、溶劑化物，亦或在體內(nèi) 代謝為4-羥基-他莫昔芬、N-去甲基他莫昔芬的化合物，以及藥學(xué)上可接受的載體。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于：他莫昔芬藥學(xué)上可接受的鹽為枸 櫞酸他莫昔芬、檸檬酸他莫昔芬。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種他莫昔芬的用途，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)證明他莫昔芬能夠抑制mGluR1/5和Gq-mAChR受體活性或者由mGluR1/5和Gq-mAChR受體激活引起的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，降低或阻斷這兩種受體的過(guò)度活躍，消除或減弱其對(duì)細(xì)胞功能性變化帶來(lái)的不良影響；同時(shí)通過(guò)自閉癥和脆性X染色體綜合癥動(dòng)物模型試驗(yàn)證明他莫昔芬能夠矯正多動(dòng)性行為和重復(fù)性行為，恢復(fù)其被動(dòng)逃避記憶能力和場(chǎng)景恐懼記憶能力，矯正自閉癥和脆性X染色體綜合癥動(dòng)物模型的認(rèn)知能力缺陷；將其制備成用于防治自閉癥和脆性X染色體綜合癥的藥物具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【IPC分類(lèi)】A61P25/28, A61P25/00, A61P25/14, A61K31/138
【公開(kāi)號(hào)】CN105078947
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510481096
【發(fā)明人】王紅兵, 任建華, 李軒
【申請(qǐng)人】王紅兵, 任建華, 李軒
【公開(kāi)日】2015年11月25日
【申請(qǐng)日】2015年8月7日