抑制移植物抗宿主病的新型Lck的小分子抑制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域的一種抑制移植物抗宿主?。℅VHD)的新型Lck的小分 子抑制劑，尤其涉及一種對體細(xì)胞抗原受體（TCR)的信號(hào)傳遞具有強(qiáng)烈抑制作用的小分子 化合物，用于預(yù)防同種異體CAR-T治療過程中所產(chǎn)生的可能致命的GVHD。該化合物也適用 于同種異體骨髓移植所產(chǎn)生的GVHD。
【背景技術(shù)】
[0002] 嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法（CAR-T療法）代表當(dāng)今腫瘤免疫細(xì)胞治療技術(shù)的 最前沿，在急性淋巴細(xì)胞白血病的臨床試驗(yàn)中獲得極大的成功。它的基本原理就是利用病 人自身的T細(xì)胞，嵌合抗原受體修飾后，可以特異性地識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原，使效應(yīng)T細(xì)胞的 靶向性、殺傷活性和持久性均較常規(guī)應(yīng)用的免疫細(xì)胞高，并可克服腫瘤局部免疫抑制微環(huán) 境并打破宿主免疫耐受狀態(tài)。CAR-T治療分以下五步：1)從癌癥病人身上分離免疫T細(xì)胞。 2)利用基因工程技術(shù)給T細(xì)胞加入一個(gè)能識(shí)別腫瘤細(xì)胞，并且同時(shí)激活T細(xì)胞殺死腫瘤細(xì) 胞的嵌合抗體（CAR)，使T細(xì)胞變成CAR-T細(xì)胞。它不再是一個(gè)普通的T細(xì)胞，它是一個(gè)帶 著GPS導(dǎo)航，隨時(shí)準(zhǔn)備找到癌細(xì)胞，并發(fā)動(dòng)自殺性襲擊。3)體外培養(yǎng)，大量擴(kuò)增CAR-T細(xì)。 4)把擴(kuò)增好的CAR-T細(xì)胞輸回病人體內(nèi)。5)嚴(yán)密監(jiān)護(hù)病人，尤其是控制前幾天身體的劇烈 反應(yīng)。
[0003] 目前的CAR-T療法是一種"個(gè)性化"的療法，細(xì)胞制品來自于患者自身，無法"現(xiàn)貨 供應(yīng)"，只能"現(xiàn)做現(xiàn)用"，不僅操作復(fù)雜，不可控因素多，關(guān)鍵問題在于90%的患者由于自身 T細(xì)胞缺陷，尤其是在CAR-T治療前往往接受過化療和免疫抑制劑治療，T細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量 達(dá)不到CAR-T制備的要求，因而無法接受CAR-T治療。鑒于這一問題，多個(gè)中心嘗試開發(fā)通 用型CAR-T，即采用正常異體來源的T細(xì)胞制備CAR-T，用于腫瘤患者的治療。這種策略顯 著拓寬了CAR-T的細(xì)胞來源，避免因患者自體T細(xì)胞因數(shù)量低、功能不足、擴(kuò)增能力差等限 制應(yīng)用。第三方細(xì)胞來源的CAR-T還具備易于操作、重復(fù)性好等優(yōu)勢，更有利于大批量臨床 應(yīng)用。同種異體CAR-T治療的主要風(fēng)險(xiǎn)是移植物抗宿主?。℅VHD)。鑒于T細(xì)胞受體（TCR) 及其介導(dǎo)的信號(hào)通路是產(chǎn)生GVHD的關(guān)鍵因素，目前普遍采用的技術(shù)是通過敲除內(nèi)源性TCR 基因以排除同種異體TCR導(dǎo)致的GVHD。但是，通過敲除TCR制備同種異體CAR-T目前遇到 敲除效率低等技術(shù)瓶頸，預(yù)計(jì)在若干年內(nèi)都不能用于臨床。
[0004] TCR的信號(hào)傳遞需要關(guān)鍵的蛋白激酶，包括蛋白激酶Lck和ZAP-70。
[0005] Lck是T淋巴細(xì)胞所特異表達(dá)的一種蛋白激酶。它與輔助性T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T 細(xì)胞的CD4和CD8共受體的細(xì)胞內(nèi)段結(jié)合，從而協(xié)助TCR的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。當(dāng)TCR被MHC所遞呈 的抗原激活后，Lck首先使CD3及TCR復(fù)合物的z鏈發(fā)生磷酸化，從而使細(xì)胞內(nèi)的絡(luò)氨酸激 酶ZAP-70與之結(jié)合。然后，Lck使ZAP-70發(fā)生磷酸化，后者進(jìn)一步使信號(hào)分子LAT(Linker ofActivatedTcells)發(fā)生磷酸化，參照圖1所示。
[0006] 另外，近年的研究發(fā)現(xiàn)，抑制Lck能增強(qiáng)CAR-T的抗腫瘤功能，尤其是對實(shí)體腫瘤 的殺傷作用。在實(shí)體腫瘤中常常有大量的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg)浸潤，在這種情況下，CAR-T 的腫瘤細(xì)胞殺傷效果顯著降低。研究發(fā)現(xiàn)，抑制Lck能解除Treg對CAR-T的抑制作用。
[0007] 絡(luò)氨酸激酶Lck介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)首先體現(xiàn)在細(xì)胞內(nèi)Ca2+的移動(dòng)以及一系列信號(hào) 分子的激活。這些信號(hào)分子包括Ras-MEK-ERK通路，后者激活一系列轉(zhuǎn)錄因子，包括NFAT、 NF-kB和AP-1，從而調(diào)節(jié)IL-2等基因的表達(dá)，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和分化。因此，Lck抑制劑 不僅能有效地阻斷TCR介導(dǎo)的GVHD，同時(shí)能增強(qiáng)CAR-T的腫瘤殺傷效果，在同種異體CAR-T 治療以及骨髓移植方面具有良好的應(yīng)用價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的以上問題，提供一種抑制移植物抗宿主病 的新型Lck的小分子抑制劑，旨在開發(fā)Lck的小分子抑制劑，抑制TCR的信號(hào)傳遞而不影響 T細(xì)胞的抗腫瘤功能，從而克服同源異體CAR-T治療過程中所引起的致命的GVHD。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 一種新型Lck小分子抑制劑，所述的Lck小分子抑制劑為FL-2501，其分子式為：
[0010] 進(jìn)一步的，所述的新型Lck小分子抑制劑，用于抑制同種異體CAR-T治療過程中所 引起的移植物抗宿主病。
[0011] 進(jìn)一步的，所述的Lck特異性小分子抑制劑為FL-2501的衍生物。
[0012] 進(jìn)一步的，所述的Lck的特異性小分子抑制劑抑制TCR信號(hào)及T細(xì)胞活化，用于制 備同種異體CAR-T，避免其產(chǎn)生移植物抗宿主病。
[0013] 進(jìn)一步的，所述的Lck的特異性小分子抑制劑抑制TCR信號(hào)及T細(xì)胞活化，用于預(yù) 防同種異體骨髓抑制所產(chǎn)生的移植物抗宿主病。
[0014] 本發(fā)明的有益效果是： 本發(fā)明的Lck的特異性小分子抑制劑通過抑制Lck使T細(xì)胞上的TCR受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑 制，進(jìn)而抑制TCR介導(dǎo)的GBHD的產(chǎn)生。所發(fā)明的Lck的特異性小分子抑制劑可抑制同源異 體CAR-T治療所引起的GVHD，促進(jìn)同源異體CAR-T的推廣和產(chǎn)業(yè)化。同時(shí)，這類化合物也可 用于預(yù)防同種異體骨髓抑制所引起的GVHD。
[0015] 本發(fā)明用高通量篩選法從化合物庫中篩選到對TCR信號(hào)具有高強(qiáng)度選擇性抑制 作用的小分子化合物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽和前體藥。該化合物是蛋白激酶Lck的選 擇性抑制劑，在體外試驗(yàn)中能抑制CAR-T細(xì)胞內(nèi)TCR的信號(hào)傳遞，但不影響CAR-T的增殖和 腫瘤殺傷功能。此類化合物可以有效地抑制同種異體CAR-T治療過程中所產(chǎn)生的GVHD，促 進(jìn)同種異體CAR-T的臨床應(yīng)用。
[0016] 上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段， 并可依照說明書的內(nèi)容予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例并配合附圖詳細(xì)說明如后。 本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】由以下實(shí)施例及其附圖詳細(xì)給出。
【附圖說明】
[0017] 此處所說明的附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本申請的一部分，本發(fā) 明的示意性實(shí)施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中： 圖1是Lck參與TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的示意圖。當(dāng)TCR被MHC所遞呈的抗原激活后，Lck首 先使CD3及TCR復(fù)合物的G鏈發(fā)生磷酸化，從而使細(xì)胞內(nèi)的絡(luò)氨酸激酶ZAP-70與之結(jié)合。 然后，Lck使ZAP-70發(fā)生磷酸化，后者進(jìn)一步使信號(hào)分子LAT(LinkerofActivatedT cells)