一種毛稔提取物，該提取物的制備方法及醫(yī)藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取物領域，具體涉及一種毛稔提取物，該提取物的制備方法及 醫(yī)藥用途，該提取物可以應用于制備增強免疫的藥物。
【背景技術】
[0002] 藥材毛稔為野牡丹科野牡丹屬植物毛稔的葉或全株，又名豺狗舌、紅爆狼牙（《常 用中草藥手冊》）、豺牙郎（《廣西本草選編》）、紅芯豬稔（《惠陽中草藥》）。
[0003] 原植物毛稔（學名：MelastomasanguineumSims)又名甜娘、開口率，為野牡丹科 (Melastomataceae)直立灌木，葉對生，卵狀披針形至披針形，長10 - 14厘米，寬2. 5 - 5厘 米，頂端長漸尖，基部圓形或鈍，有縱脈5,腹面無毛而光亮，但于表面伏生短粗毛；花極大， 1 一 3朵生于葉鞘，直徑可達7 - 8厘米，紫紅色；萼管長1 一 1. 5厘米，披長而硬的剛毛， 花由基部廣展，裂片5 - 7,三角形至三角狀披針形，遠較萼管為短，有相等大鉆形的附屬裂 片；花瓣5 - 7片，闊匙形，長3 - 5厘米；果杯形，頂部比基部寬，長1. 2 - 1. 6厘米，披紅 色長而硬的粗毛。分布于我國南部，印度，馬來西亞等地。毛稔花朵大而艷麗，是較好的庭 院盆栽植物，成熟的果實香甜可口，可以生吃，亦可用來泡酒。根葉有收斂止血，消食止痢等 藥用價值。
[0004] 原植物毛稔為大灌木，高1. 5-3米；莖、小枝、葉柄、花梗及花萼均被平展的長粗 毛，毛基部膨大。葉片堅紙質，卵狀披針形至披針形，頂端長漸尖或漸尖，基部鈍或圓形，長 8-15(-22)厘米，寬2.5-5(-8)厘米，全緣，基出脈5,兩面被隱藏于表皮下的糙伏毛，通常 僅毛尖端露出，葉面基出脈下凹，側脈不明顯，背面基出脈隆起，側脈微隆起，均被基部膨大 的疏糙伏毛；葉柄長1. 5-2. 5 (-4)厘米。傘房花序，頂生，常僅有花1朵，有時3 (-5)朵；苞 片戟形，膜質，頂端漸尖，背面被短糙伏毛，以脊上為密，具緣毛；花梗長約5毫米，花萼管長 1-2厘米，直徑1-2厘米，有時毛外反，裂片5 (-7)，三角形至三角狀披針形，長約1. 2厘米， 寬4毫米，較萼管略短，脊上被糙伏毛，裂片間具線形或線狀披針形小裂片，通常較裂片略 短，花瓣粉紅色或紫紅色，5 (-7)枚，廣倒卵形，上部略偏斜，頂端微凹，長3-5厘米，寬2-2. 2 厘米；雄蕊長者藥隔基部伸延，末端2裂，花藥長1. 3厘米，花絲較伸長的藥隔略短，短者藥 隔不伸延，花藥長9毫米，基部具2小瘤；子房半下位，密被剛毛。果杯狀球形，胎座肉質，為 宿存萼所包；宿存萼密被紅色長硬毛，長1. 5-2. 2厘米，直徑1. 5-2厘米。花果期幾乎全年， 通常在8-10月。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種毛稔提取物，其制備方法和液相分析方法，含有該提 取物的藥物制劑及利用該提取物制備增強免疫的藥物的用途。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現(xiàn)的：
[0007] -種毛稔提取物，該提取物由以下方法制備：（a)以重量計，每100份藥材包含干 燥的毛稔75~85份和干燥的黨參15~25份，混合粉碎，用乙醇熱回流提取，合并提取液， 濃縮至無醇味；(b)將步驟（a)所得乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁 醇萃取物用大孔樹脂富集，先用5~15%乙醇沖洗8~12個柱體積除去多糖，再用65~ 75%乙醇洗脫7~9個柱體積，收集65~75%洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥。
[0008] 進一步地，步驟（a)中所述用乙醇熱回流提取所采用的乙醇濃度為85~95 %。
[0009] 進一步地，步驟（a)中所述用乙醇熱回流提取所采用的乙醇濃度為90%。
[0010] 進一步地，步驟（c)中所述大孔樹脂為AB-8型大孔樹脂。
[0011] 進一步地，步驟（c)為：正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂富集，先用10%乙醇沖 洗10個柱體積除去多糖，再用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，噴霧 干燥。
[0012] 為了能夠通過建立HPLC指紋圖譜的方法控制不同批次制備的提取物的批間差 異，所述提取物的液相分析方法為：
[0013] 色譜柱：AgilentTCC18 柱（4. 6mmX250mm，5ym);
[0014] 流動相：A為乙腈，B為0? 1 %甲酸溶液（三乙胺調節(jié)pH值至6. 0);
[0015] 梯度洗脫程序：0 ~5min，A35%;5 ~10min，A35%-70%;10 ~15min，A70% -35% ;
[0016] 15 ~20min，A35% ;
[0017] 流動相流速：1.OmL?minS檢測波長：240nm;柱溫：30°C;進樣量10yL。
[0018] 藥物制劑，含有治療有效量的所述提取物和藥學上可接受的載體。
[0019] 所述的提取物在制備增強免疫的藥物中的應用。
[0020] 所述的藥物制劑在制備增強免疫的藥物中的應用。
[0021] 本發(fā)明提取物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物制劑的形式使用。
[0022] 所述藥物制劑含有治療有效量的本發(fā)明毛稔提取物，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0023] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物制劑以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明提取物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
[0024] 本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明通過對干燥的毛稔和黨參進行提取、除雜、富集處理，能得 到具有增強免疫的提取物；本發(fā)明提供的液相分析方法可以用于建立該提取物的指紋圖 譜，用于控制不同批次制備的提取物的批間差異。
【附圖說明】
[0025] 圖1為毛稔提取物HPLC液相圖譜。
【具體實施方式】
[0026] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質性內容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和范圍。
[0027] 實施例1 :毛稔提取物①制備（80份毛稔，20份黨參）
[0028] 藥材來源：毛稔和黨參購自安徽亳州中藥材市場。
[0029] 主要試劑：食品級乙醇購自上海凌峰化學試劑有限公司；AB-8型大孔樹脂購自天 津波鴻樹脂有限公司；乙腈為HPLC級，購于TEDIA;甲酸為HPLC級，購于TEDIA;色譜用純 凈水為哇哈哈純凈水。
[0030] 制備方法：將8. 0kg干燥毛稔和2. 0kg干燥黨參混合粉碎，用90 %乙醇熱回流提 取3次，每次提取2小時，每次用95%乙醇25L，合并提取液，濃縮至無醇味（4L);濃縮液依 次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水飽和的正丁醇（4LX3次）萃取，分別得 到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔樹脂富集， 先用10%乙醇沖洗10個柱體積除去多糖，再用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫 液，減壓濃縮，噴霧干燥（約225g)。
[0031] 實施例2 :毛稔提取物②制備（75份毛稔，25份黨參）
[0032] 制備方法：將7. 5kg干燥毛稔和2. 5kg干燥黨參混合粉碎，用90 %乙醇熱回流提 取3次，每次提取2小時，每次用95%乙醇25L，合并提取液，濃縮至無醇味（4L);濃縮液依 次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水飽和的正丁醇（4LX3次）萃取，分別得 到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔樹脂富集， 先用10%乙醇沖洗10個柱體積除去多糖，再用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫 液，減壓濃縮，噴霧干燥（約225g)。
[0033] 實施例3 :毛稔提取物③制備（85份毛稔，15份黨參）
[0034] 制備方法：將8. 5kg干燥毛稔和1. 5kg干燥黨參混合粉碎，用90 %乙醇熱回流提 取3次，每次提取2小時，每次用95%乙醇25L，合并提取液，濃縮至無醇味（4L);濃縮液依 次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水飽和的正丁醇（4LX3次）萃取，分別得 到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔樹脂富集， 先用10%乙醇沖洗10個柱體積除去多糖，再用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫 液，減壓濃縮，噴霧干燥（約225g)。
[0035] 實施例4 :毛稔提取物④制備（90份毛稔，10份黨參）
[0036] 制備方法：將9. 0kg干燥毛稔和1. 0kg干燥黨參混合粉碎，用90 %乙醇熱回流提 取3次，每次提取2小時，每次用95%乙醇25L，合并提取液，濃縮至無醇味（4L);濃縮液依 次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水飽和的正丁醇（4LX3次）萃取，分別得 到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔樹脂富集， 先用10%乙醇沖洗10個柱體積除去多糖，再用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫 液，減壓濃縮，噴霧干燥（約225g)。
[0037] 實施例5 :毛稔提取物⑤制備（70份毛稔，30份黨參）
[0038] 制備方法：將7. 0kg干燥毛稔和3. 0kg干燥黨參混合粉碎，用90 %乙醇熱回流提 取3次，每次提取2小時，每次用95%乙醇25L，合并提取液，濃縮至無醇味（4L);濃縮液依 次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水飽和的正丁醇（4LX3次）萃取，分別得 到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔樹脂富集， 先用10%乙醇沖洗10個柱體積除去多糖，再用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫 液，減壓濃縮，噴霧干燥（約225g)。
[0039] 實施例6 :液相色譜分析
[0040] 供試品溶液配制：取實施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加 30mL10 %乙腈水溶液超聲溶解，冷卻至室溫后，繼續(xù)加10 %乙腈水溶液定容。分析方法如 下：
[0041] 高效液相色譜儀：Agilent1260,二元栗；
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