造影劑及其制造方法和制造試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及造影劑及其制造方法和制造試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 長久以來，X射線CT、MRI、超聲波診斷裝置等圖像診斷方式在醫(yī)療現(xiàn)場(chǎng)是必須的 工具。它們分別將生物體內(nèi)的CT值、自旋弛豫時(shí)間、聲阻抗的差異進(jìn)行圖像化，這些物理性 質(zhì)的差異專門反映生物體的結(jié)構(gòu)（形狀），因此被稱為"形態(tài)成像"。
[0003] 與此相對(duì)，將對(duì)于即使在結(jié)構(gòu)上為相同組織、但在功能上處于不同狀態(tài)的部位進(jìn) 行圖像化的技術(shù)稱為"功能成像"。在該功能成像中，特別是對(duì)蛋白質(zhì)等生物體構(gòu)成分子的 存在狀態(tài)進(jìn)行可視化的技術(shù)多被稱為"分子成像"。分子成像可以期待應(yīng)用于發(fā)生、分化等 生命現(xiàn)象的闡明和疾病的診斷、治療，因此是目前最受關(guān)注的研究領(lǐng)域之一。
[0004] 在分子成像中，多使用"分子探針"，該分子探針是具有對(duì)生物體構(gòu)成分子具有選 擇性的結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，這種情況下，對(duì)分子探針附加能夠利用某種物理手段進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)構(gòu)， 使分子探針在體內(nèi)的分布可視化。近年來，將這樣的分子成像用于早期診斷的動(dòng)向加速。
[0005] 對(duì)于之前用于上述的形態(tài)成像用途的MRI、超聲波診斷裝置等方式，也進(jìn)行了用于 分子成像的研究開發(fā)。此外，由于超聲波診斷裝置具有：（1)實(shí)時(shí)性優(yōu)異；(2)小型化因而在 手術(shù)室內(nèi)使用的相關(guān)限制少；（3)不僅能夠診斷、而且還能夠作為治療用工具使用；等其他 設(shè)備所不具備的特長，因此，作為在大型醫(yī)院以外也能夠使用的診斷治療綜合工具而受到 期待。
[0006] 以往，為了實(shí)現(xiàn)"疾病的早期診斷"中的分子成像，作為超聲波造影劑，已知有使用 了液體的微氣泡前體的部位特異性（site specific)水包油型乳液（例如，參見專利文獻(xiàn) 1)〇
[0007] 該微氣泡前體中，氣體形成性化學(xué)物質(zhì)的乳液能夠在液體狀態(tài)下處于穩(wěn)定。并且， 提出了可從血管移動(dòng)到組織中的尺寸的造影劑，其為在被施加超聲波能量時(shí)產(chǎn)生微小氣泡 的造影劑。
[0008] 該微氣泡前體是在施與至生物體時(shí)通過對(duì)納米尺寸的液滴照射超聲波而產(chǎn)生相 變、從而生成微氣泡的相變型超聲波造影劑。由于具有在施加超聲波能量時(shí)形成微小氣泡 的能力，因此，能夠成為部位特異性造影劑，并且，通過進(jìn)一步附加抗體、配體等與生物體構(gòu) 成分子選擇性結(jié)合的分子探針而能夠使其具有組織選擇性。
[0009] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0010] 專利文獻(xiàn)
[0011] 專利文獻(xiàn)1 :日本專利第3016592號(hào)公報(bào)
【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 發(fā)明所要解決的課題
[0013] 但是，專利文獻(xiàn)1的由微氣泡前體形成的超聲波造影劑存在無法判斷其存在于細(xì) 胞內(nèi)外的何處的問題。特別是存在無法判斷其是否被納入到細(xì)胞內(nèi)的問題。
[0014] 本發(fā)明是鑒于上述情況而進(jìn)行的，其目的在于提供一種能夠容易地確認(rèn)到已被納 入到細(xì)胞內(nèi)的造影劑及其制造方法和制造試劑盒。
[0015] 解決課題的手段
[0016] 為了達(dá)成上述目的，本發(fā)明提供下述手段。
[0017] 本發(fā)明的一個(gè)方式提供一種造影劑，其是在具有超聲波造影功能的基材的表面具 備至少1個(gè)靶向用的分子探針和至少1個(gè)光學(xué)探針的造影劑。
[0018] 在上述方式中，可以具備偶聯(lián)用的第1分子探針、標(biāo)記在第2分子探針上的光學(xué)探 針、以及與疾病特異性細(xì)胞或組織結(jié)合的靶向用的第3分子探針。
[0019] 另外，在上述方式中，上述第3分子探針可以由上述第1分子探針進(jìn)行了標(biāo)記。 [0020]另外，在上述方式中，上述第2分子探針和上述第3分子探針可以以摩爾比1:1的 比例含有。
[0021 ] 另外，在上述方式中，上述基材可以為膠囊狀造影劑，該膠囊狀造影劑的內(nèi)部內(nèi)包 有具有造影功能的造影物質(zhì)，且該膠囊狀造影劑具有由脂質(zhì)膜形成的外殼。
[0022] 另外，在上述方式中，上述造影物質(zhì)可以通過超聲波照射而氣化的不溶于水的物 質(zhì)。
[0023] 此外，在上述方式中，上述造影物質(zhì)可以為氣體。
[0024] 此外，本發(fā)明的另一方式提供上述造影劑的制造方法，其包含下述步驟：第1步 驟，生成將上述第1分子探針標(biāo)記于上述基材的表面而得到的第1溶液；第2步驟，生成將 上述光學(xué)探針標(biāo)記于上述第2分子探針上而得到的第2溶液；第3步驟，生成將上述第1分 子探針標(biāo)記于上述第3分子探針上而得到的第3溶液；第4步驟，將上述第2步驟中生成的 第2溶液與上述第3步驟中生成的上述第3溶液混合，生成第4溶液；第5步驟，將上述第 4步驟中生成的溶液混合到上述第1步驟中生成的第1溶液中，進(jìn)行反應(yīng)；以及第6步驟， 對(duì)該第5步驟中生成的混合液進(jìn)行離心分離。
[0025] 在上述方式中，在上述第4步驟中被混合的上述第2溶液中的上述第2分子探針 與上述第3溶液中的上述第3分子探針可以為摩爾比1:1的比例。
[0026] 另外，在上述方式中，在上述第5步驟中，可以將上述第1步驟中生成的上述第1 溶液稀釋至10倍以上后進(jìn)行混合。
[0027] 另外，本發(fā)明的另一方式提供上述造影劑的制造試劑盒，其具備2個(gè)以上的收容 部以及連接這些收容部的可開閉的流路，該2個(gè)以上的收容部將第1溶液、第2溶液和第3 溶液各自分離地收容，所述第1溶液是將上述第1分子探針標(biāo)記于上述基材的表面而得到 的，所述第2溶液是將上述光學(xué)探針標(biāo)記于上述第2分子探針上而得到的，所述第3溶液是 將上述第1分子探針標(biāo)記于上述第3分子探針上而得到的。
[0028] 發(fā)明的效果
[0029] 根據(jù)本發(fā)明，可發(fā)揮如下效果：能夠容易地確認(rèn)到已被納入到細(xì)胞內(nèi)。
【附圖說明】
[0030]圖1為示出本發(fā)明的第1實(shí)施方式的造影劑的示意性的分子結(jié)構(gòu)圖。
[0031] 圖2為示出圖1的造影劑的制造方法的流程圖。
[0032] 圖3示出了在培養(yǎng)前、撒入造影劑30分鐘后圖1的造影劑對(duì)CCA1高表達(dá)癌細(xì)胞 的特異性結(jié)合性，（a)為共聚焦熒光顯微鏡圖像、（b)為亮視野圖像、（c)為重疊圖像；還示 出了使用不具有CCA1抗體的造影劑的比較例，（d)為共聚焦熒光顯微鏡圖像、（e)為亮視野 圖像、（f)為重疊圖像。
[0033] 圖4示出了在培養(yǎng)6小時(shí)后圖1的造影劑在CCA1高表達(dá)癌細(xì)胞中的特異性細(xì)胞 內(nèi)納入，（a)為共聚焦熒光顯微鏡圖像、（b)為亮視野圖像、（c)為重疊圖像；還示出了使用 不具有CCA1抗體的造影劑的比較例，（d)為共聚焦熒光顯微鏡圖像、（e)為亮視野圖像、（f 為重疊圖像。
[0034]圖5為示出在培養(yǎng)6小時(shí)后圖1的造影劑在癌細(xì)胞中的特異性細(xì)胞內(nèi)納入的流式 細(xì)胞儀分析結(jié)果，（a)為CCA1高表達(dá)癌細(xì)胞的由相變納米液滴的納入所帶來的熒光量與細(xì) 胞數(shù)的關(guān)系，（b)為（a)的各情況下的平均熒光量，（c)為內(nèi)包成分不同的相變納米液滴的 納入所帶來的熒光量與細(xì)胞數(shù)的關(guān)系，（d)為（c)的各情況下的平均熒光量。
[0035] 圖6為示出用于對(duì)施與了圖1的造影劑的組織進(jìn)行超聲波照射和攝像的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) 的圖。
[0036] 圖7為示出氣相化所需強(qiáng)度的超聲波（a)照射前、（b)照射后的超聲波圖像的圖。
[0037] 圖8為分別示出作為比較例的與圖2的制造方法的步驟順序不同的造影劑的（a) 制造方法的流程圖、（b)不進(jìn)行（a)的第二階段步驟而不具有CCA1抗體的造影劑的共聚焦 顯微鏡分析結(jié)果、（c)納入了也進(jìn)行了第二階段步驟、具有CCA1抗體的造影劑的情況下的 共聚焦顯微鏡分析結(jié)果的圖。
[0038] 圖9為分別示出在圖2的流程圖的第5步驟中（a)未稀釋的情況下的散射、（b) 20 倍稀釋的情況下的散射的圖。
[0039] 圖10為示出圖1的造影劑的變形例對(duì)（a)培養(yǎng)前、（b)培養(yǎng)后的癌細(xì)胞的特異性 結(jié)合性的超聲波圖像。
[0040] 圖11示出了在培養(yǎng)3小時(shí)后圖1的造影劑在HCT116細(xì)胞中的特異性細(xì)胞內(nèi)納 入，（a)為共聚焦熒光顯微鏡圖像、（b)為亮視野圖像、（c)為重疊圖像；還示出了使用不具 有CCA1抗體的造影劑的比較例，（d)為共聚焦熒光顯微鏡圖像、（e)為亮視野圖像、（f)為 重疊圖像。
[0041] 圖12示出了在培養(yǎng)3小時(shí)后圖1的造影劑在AGS細(xì)胞中的特異性細(xì)胞內(nèi)納入，（a) 為共聚焦熒光顯微鏡圖像、（b)為亮視野圖像、（c)為重疊圖像；還示出了使用不具有CCA1 抗體的造影劑的比較例，（d)為共聚焦熒光顯微鏡圖像、（e)為亮視野圖像、（f)為重疊圖 像。
[0042] 圖13為示出在培養(yǎng)12小時(shí)后圖1的造影劑在HCT116細(xì)胞和AGS細(xì)胞中的特異 性細(xì)胞內(nèi)納入的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果，（a)為示出HCT116細(xì)胞的由相變納米液滴的納入所 帶來的熒光量與細(xì)胞數(shù)的關(guān)系的圖，（b)為示出（a)的各情況下的平均熒光量的圖，（c)為 示出AGS細(xì)胞的由相變納米液滴的納入所帶來的熒光量與細(xì)胞數(shù)的關(guān)系的圖，（d)為示出 (c)的各情況下的平均熒光量的圖。
[0043] 圖14是示意性示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的造影劑的制造試劑盒的圖。
【具體