Binding Buffer 輕輕重懸，加人 5 yL Annexin V-FITC，輕輕混勾，加人 5 yL Propidium iodide，混勻。室溫（20 ~25°C )
[0096] 避光孵育 lOmin。用流式細胞儀檢測（Ex= 48811111^^= 530nm)，Annexin V-FITC 為綠色熒光，PI為紅色熒光，經(jīng)配套軟件處理，獲取標本數(shù)據(jù)。
[0097] 統(tǒng)計學(xué)分析
[0098] 應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS (editions. 0)進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以表示，計量資料 用一元方差分析，組間差別用t檢驗，P < 0. 05為差異有顯著性，P < 0. 01為非常顯著性差 異。
[0099] 結(jié)果
[0100] 大鼠附睪精子數(shù)據(jù)、精子活力的變化，結(jié)果見表1。
[0101] 表1大鼠附睪精子數(shù)據(jù)、精子活力的變化
[0104] 注：與正常對照組比較，aP < 0. 05,與模型組比較，bP < 0. 05。
[0105] 從表1可知，精子數(shù)口、a級精子比率和a+b級精子比率3個指標均顯示模型組與 正常對照組比較存在顯著差異（P> 0.05)，造模成功。各劑量藥物治療組精子數(shù)口、a+b級 精子比率與模型組比較存在顯著差異（尸< ().(巧），說明藥物治療有效。兩組治療組相 比，采用本發(fā)明提供的促育生精顆粒組較申請人之前研制的早期研制的促育生精顆粒組a 級精子比率和a+b級精子更好，更能促進精子質(zhì)量。
[0106] 附睪精子凋亡率和生精小管上皮生精細胞層數(shù)變化，結(jié)果見表2。
[0107] 表2附睪精子凋亡率和生精小管上皮生精細胞層數(shù)變化
[0109] 注：與正常對照組比較，aP < 0. 05,與模型組比較，bP < 0. 05。
[0110] 模型組與正常對照組相比，精子凋亡率上升，P < 0. 05,兩藥物組與模型組相比， 精子凋亡率明顯下降，P <0.05,且采用本發(fā)明促育生精顆粒較申請人之前研制的早期研 制的促育生精顆粒，精子凋亡率下降更為明顯，P < 0. 05。
[0111] 模型組與正常對照組相比，生精細胞層數(shù)減少，P < 0.05,各藥物組較模型組，生 精細胞層數(shù)增多，P < 〇. 05,且采用本發(fā)明促育生精顆粒較申請人之前研制的早期研制的 促育生精顆粒，生精細胞層數(shù)增多更為明顯，P < 0. 05。
[0112] 臨床資料
[0113] 220例均為門診患者且多是婚后同居2年以上，有正常的性生活而未采取任何避 孕措施，配偶檢查無異常。精液檢查為精子數(shù)量不足及存活力、活動力都低于正常值范疇。 年齡21~43歲，平均年齡30. 5歲?；楹蟛挥?~15年。所有患者具有下列特征至少一 項：1、精液量<2ml ;2、精子密度<2000萬/mi ;3、一次射精精子總數(shù)<4000/mi ;4、精子活 力直線< 50%，精子活動強度< 60% ;5、精子存活率第一小時低于60% ;6、畸形精子數(shù)> 20% ;7、白細胞計數(shù)> IX IOfVml，平均分成2組，每組110例，兩組性別，年齡無差異。
[0114] 治療方法
[0115] 對照組采用早期研制的促育生精顆粒（組方）：淫羊藿、巴戟天、仙茅、枸杞子、山 茱萸、土茯苓、赤芍、黃精、沙苑子、知母、黃柏、蛇床子、杜仲、牛膝、何首烏、菟絲子等。每日 1劑，l〇〇g，沖服分早晚兩次服用。20劑為1個療程。
[0116] 治療組采用本發(fā)明實施例1提供的促育生精顆粒，每日1劑，100g，沖服分早晚兩 次服用。20劑為1個療程。
[0117] 療效觀察
[0118] 療效標準：痊愈：癥狀體征消除，女方已懷孕；顯效：精子計數(shù)> 6000萬/ml，活動 強度> 60 %，活動率> 65 %，畸形精子數(shù)< 20 %以下，精液不液化轉(zhuǎn)為液化，白細胞< 5個 /HP ;有效：自覺癥狀好轉(zhuǎn)，性功能增強，精液有所改善，但各項指標仍未達到正常標準；無 效：精液常規(guī)未能得到改善，甚至下降。
[0119] 結(jié)果
[0120] 兩組療效比較，結(jié)果件表3。
[0121] 表3兩組療效比較
[0123] 從表3可以看出，采用本發(fā)明提供的促育生精顆粒，在治愈方面，效果要比早期研 制的促育生精顆粒更好。
[0124] 所有上述的首要實施這一知識產(chǎn)權(quán)，并沒有設(shè)定限制其他形式的實施這種新產(chǎn)品 和/或新方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員將利用這一重要信息，上述內(nèi)容修改，以實現(xiàn)類似的執(zhí)行情 況。但是，所有修改或改造基于本發(fā)明新產(chǎn)品屬于保留的權(quán)利。
[0125] 以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任 何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等 效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所 作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種新型的促育生精顆粒，其特征在于：原料藥包括淫羊藿、仙茅、杜仲、山茱萸、黃 精、赤芍、菟絲子、刺五加、肉蓯蓉、桑螵蛸、楮實子、山藥、補骨脂、寄生黃、南五味子、首烏 藤、土茯苓、太子參、苦參和女貞子。2. 如權(quán)利要求1所述的促育生精顆粒，其特征在于：各原料藥的重量分別為淫羊藿 30g~40g、仙茅25g~35g、杜仲30g~40g、山茱萸20g~30g、黃精25g~35g、赤茍15g~ 25g、英絲子35g~45g、刺五加30g~40g、肉灰蓉25g~35g、桑螺銷15g~25g、楮實子 15g~25g、山藥25g~35g、補骨脂25g~35g、寄生黃15g~25g、南五味子IOg~20g、 首烏藤20g~30g、土茯苳15g~25g、太子參35g~45g、苦參15g~25g和女貞子20g~ 30g〇3. 如權(quán)利要求1或2所述的促育生精顆粒，其特征在于：各原料藥的重量分別為淫羊 藿33g~37g、仙茅28g~32g、杜仲33g~37g、山茱萸23g~27g、黃精28g~32g、赤茍 18g~22g、英絲子38g~42g、刺五加33g~37g、肉灰蓉28g~32g、桑螺銷18g~22g、楮實 子18g~22g、山藥28g~32g、補骨脂28g~32g、寄生黃18g~22g、南五味子13g~17g、 首烏藤23g~27g、土茯苳18g~22g、太子參38g~42g、苦參18g~22g和女貞子23g~ 27g〇4. 如權(quán)利要求1至3所述的促育生精顆粒，其特征在于：各原料藥的重量分別為淫羊 藿35g、仙茅30g、杜仲35g、山茱萸25g、黃精30g、赤茍20g、英絲子40g、刺五加35g、肉灰蓉 30g、桑螵蛸20g、楮實子20g、山藥30g、補骨脂30g、寄生黃20g、南五味子15g、首烏藤25g、 土茯苓20g、太子參40g、苦參20g和女貞子25g。5. 權(quán)利要求1至4所述促育生精顆粒的制備方法，其特征在于，包括： 第一步，按照前述的比例稱取淫羊藿、仙茅、杜仲、山茱萸、黃精、赤芍、菟絲子、刺五加、 肉蓯蓉、補骨脂、寄生黃、首烏藤、太子參、苦參和女貞子，水提，純化，獲得第一原料藥粉； 第二步，將余下原料藥組分采用乙醇滲漉提取，得到第二原料藥粉； 第三步，將第一原料藥粉和第二原料藥粉混合，加入相對于混合藥粉質(zhì)量〇. 4~0. 6倍 的蔗糖粉和〇. 1~〇. 3倍的糊精，制成顆粒，于40~50°C干燥，獲得顆粒劑。6. 如權(quán)利要求5所述促育生精顆粒的制備方法，其特征在于：所述第一步進一步具體 為，按照前述的比例稱取淫羊藿、仙茅、杜仲、山茱萸、黃精、赤芍、菟絲子、刺五加、肉蓯蓉、 補骨脂、寄生黃、首烏藤、太子參、苦參和女貞子分別粉碎成粗粉，混合在一起，水提，第一次 加水量為該步獲得的混合物的質(zhì)量的5-8倍的量，浸泡2h，煎煮2-3h ;第二次加水量為該步 獲得的混合物的質(zhì)量的3-5倍的量，浸泡lh，煎煮1-2h，合并煎煮液，濾過，合并提取液，減 壓回收乙醇并濃縮至藥液濃度為0. 4g生藥/mL，抽濾后，濾液的相對密度約為20°C時1. 06 ; 上述濾液經(jīng)體積為IOL的大孔吸附樹脂柱，先用10倍樹脂柱體積的去離子水或蒸餾水洗 脫，再用5倍樹脂柱體積的95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，去除溶劑，得到第一原料藥粉。7. 如權(quán)利要求5或6所述促育生精顆粒的制備方法，其特征在于：所述第二步進一步 具體為，按照前述的比例稱取余下原料藥組分，分別粉碎成粗粉，混合在一起，加相對于混 合物3~5倍的醇濃度為80 %~90 %的乙醇，浸泡30~50小時，采用滲漉法以每分鐘1~ 3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，隨后在真空度0. 05~0. 07Mpa下減壓濃縮至60~70°C 時相對密度為1. 00~1. 06的膏體，噴霧干燥，噴霧干燥機的進風(fēng)溫度170~185°C、出風(fēng)溫 度80~90°C，隨后粉碎成粉末，制成第二原料藥粉。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種新型的促育生精顆粒，其原料藥包括淫羊藿、仙茅、杜仲、山茱萸、黃精、赤芍、菟絲子、刺五加、肉蓯蓉、桑螵蛸、楮實子、山藥、補骨脂、寄生黃、南五味子、首烏藤、土茯苓、太子參、苦參和女貞子。其療效可靠、安全性高，比單純西醫(yī)治療在增加精子數(shù)量和改善精子質(zhì)量方面顯示出獨特的優(yōu)勢，且副作用小、安全、有效，并且比申請人前期研發(fā)的成果產(chǎn)品“早期研制的促育生精顆?！毙Ч?。
【IPC分類】A61K36/90, A61K9/16, A61K36/8969, A61K35/64, A61P15/08
【公開號】CN105125980
【申請?zhí)枴緾N201510697266
【發(fā)明人】孫向紅, 王鴻根
【申請人】青島大學(xué)附屬醫(yī)院
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年10月23日